过氧化氢酶(CAT)活性的测定Word文档格式.doc
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可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
过氧化氢在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液的吸光度（A240）随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
三、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：
小麦或其它叶片
（二）仪器设备：
1.研钵；
2.紫外分光光度计；
3.离心机；
4.恒温水浴；
5.容量瓶。
（三）试剂：
1.0.2mol/LpH7.8磷酸缓冲液（pH7.8:
0.2mol/LNa2HP0491.5ml;
0.2mol/LNaH2P048.5ml）；
2．0.1mol/LH2O2（30%的H2O2溶液5.68ml稀释至1000ml）
二、实验步骤：
1、酶液提取称取新鲜植物叶片或其它组织0.5g，置于研钵中，加入2～3ml4℃下预冷的pH7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。
混合均匀，将容量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上清液在4000r/min下离心15min，上清液即为过氧化氢粗提液，5℃下保存备用。
2、测定10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表1-1顺序加入试剂。
25℃预热后，逐管加入0.6ml0.1mol/l的H2O2,每加完1管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，260nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测完后，按式（1-1）计算酶活性。
表1-1紫外吸收法测H2O2样品测定液配制表
管号
S1
S2
S0
空白
粗酶液（ml）
0.4
0.4（失活酶液）
0.4（磷酸缓冲液）
PH7.8磷酸缓冲液（ml）
3.0
蒸馏水（ml）
2.0
3、结果计算以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（μ）。
过氧化氢酶活性（μ.g-1min-1）=ΔA240*Vt/（0.1*Vl*t*FW）（1-1）
式中ΔA240：
As0-（As1+As2）/2;
As0：
加入失活酶液的对照管吸光值；
As1，As2：
样品管吸光值；
Vt：
粗酶提取液总体积（ml）；
Vl：
测定用粗酶提取液体积（ml）；
FW：
样品鲜重（g）；
0.1：
A240每下降0.1为1个酶活单位（μ）；
t：
过氧化氢到最后一次读数时间（min）
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