《细胞工程》考试大纲docWord文档下载推荐.docx

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细胞计数应注意的问题；

细胞冻存与复苏的技术要点及注意事项。

第四章细胞培养与代谢调控

分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养、灌流式培养。

分批式培养、连续式培养、灌流式培养的特点。

第五章植物人工繁殖

植物细胞工程、植物组织培养、外植体、脱分化、再分化、愈伤组织、胚状体、大量元素、微量元素、器官发生途径、胚状体发生途径、植物快速无性繁殖、植物脱毒、胚培养、胚乳培养、人工种子、体细胞胚。

。

植物细胞工程的主要内容；

植物组织培养的理论基础；

植物细胞工程的技术手段；

植物组织再分化的两条途径；

植物组织培养的主要步骤与技术要点；

影响植物细胞脱分化和再分化因素；

愈伤组织有的特点及其在细胞工程中的重要性；

愈伤组织再生植株的途径；

植物组织与动物细胞的超低温保存原理及方法的不同；

植物细胞的几种大规模培养系统的特点及其影响因素；

生长素、细胞分裂素的生理作用及其在组织培养中的意义。

成熟胚培养与幼胚培养在技术上的异同；

植物胚乳培养的类型；

植物胚胎培养的意义及影响因素；

愈伤组织的形成的三个阶段及主要特征；

人工种子的组成、构建与应用；

体细胞胚胎发生的同步控制；

植物脱毒的方法；

植物快繁技术的主要步骤；

微繁殖中芽的增殖方式；

植物脱毒时外植体的预处理途径。

第六章动物人工繁殖

胚胎工程p96

体外受精p97

胚胎移植p97

胚胎分割p115

胚胎融合p6

嵌合体p6

胚胎性别鉴定p121

胚胎冷冻技术p6

试管婴儿p103

超数排卵p6

同步发情p6

胚胎细胞克隆p8

同种体细胞克隆p8

异种体细胞克隆p8

核移植技术'

p108

胚胎工程的主要技术领域p6

体外受精的基本过程p7

试管婴儿的基本步骤p104

胚胎工程的意义p7

克隆研究的主要内容p8

克隆的理论与技术基础

理论基础是细胞全能性

技术基础：

核移植技术\胚胎移植技术

核移植的技术要点、应用与发展前景p8

“多莉”的制备步骤p9

“多莉”引发的思考

你对克隆人的看法。

第七章细胞重组与细胞融合

细胞重组p128

胞质体p128

核质体

微细胞p128

细胞融合p132

HAT培养基p6

单克隆抗体p239

基因定位p6

细胞重组的方式与意义

1）胞质体与完整细胞的融合形成胞质杂种；

2）微细胞与完整细胞的融合形成微细胞异核体；

3）胞质体与核体（小细胞）融合形成重组细胞（核质杂种）

HAT选择的原理p6

细胞融合的主要应用

1）进行基因定位，绘制人类基因图

2）诱导PC染色体

3）体细胞杂种的致瘤性分析

4）遗传缺陷的基因互补

5）分化功能表达调控的研究

6）淋巴细胞杂交瘤技术与单克隆抗体

7）植物细胞的原生质体融合培育杂种植株

8）核质相互作用关系

9）基因治疗

10）疾病诊断

PEG诱导细胞融合的基本原理

PEG（polyethyleneglycol）是一种多聚化合物，分子式为H（OHCH2-CH2）nOH，平均分子量在200—20000之间。

诱导机制可能是由于带有大量负电荷的PEG分子和原生质体表面的负电荷间在钙离子的作用下形成静电键，促使原生质体间的黏着而结合，导致电荷平衡失调并重新分配，使两种原生质体上的正负电荷连接起来，进而形成具有共同质膜的融合体。

融合体的基本类型及其筛选

1）同核体——同源原生质体的融合

2）异核体——非同源原生质体的融合

3）多核体——含有双亲不同比例核物质的融合体

融合体的筛选方法

1）遗传互补筛选法2）抗性互补筛选法3）生长特性筛选法4）物理特性筛选法5）其他方法

第八章新品种培育

花药培养p150

植物原生质体融合p13

端体系统:

除了从细胞中去掉整条染色体外，还可以有计划的去除某一染色体的某一侧的臂。

三体植物系统:

如果细胞中增加一条同种的染色体，则染色体数成为2n+1，称为三体（trisome）。

如果增加两条同种染色体（非同源），结果有两对染色体都变成三条，则称双三体。

单体系统p13

孤雌生殖p150

染色体加倍p13

染色体倍性改造工程:

指有目的、有计划的增加或减少一组或几组同源或异源染色体，以创造我们所需的动植物新品种的一项染色体工程技术。

植物染色体的非整倍体改造:

是按照人们预定的目标,通过有计划的削减、添加和代换同种或异种的一个或若干条染色体或其一部分，可以在一定程度上达到定向改变植物的遗传性、选育新品种的目的。

单体植物:

从细胞中去掉一条染色体，则染色体数成为2n-1，这样的植物叫做单体植物。

缺体植物:

去掉两条染色体（同源），2n-2

花药培养中外植体的选择

（1）材料的遗传变异

首先，不同物种之间花药培养的反应存在跟大差异；

此外，同一属内不同种或品种之间也存在诱导性的差异。

母本材料的基因型是影响花药培养的关键因素，不同基因型植株的花药对培养的反应不同。

花药培养的诱导率也与杂种优势有关，一般情况下杂种比纯种容易诱导。

（2）母本生理状态的影响

母本生理状态直接影响花药培养力

母本的氮素营养水平是另一个重要的影响因素

（3）花粉发育时期

被子植物的花粉发育过程经历三个阶段，即第一期四分体时期、第二期单核期（小孢子阶段）、第三期双核期和三核期（雄配子体阶段）。

单核期又分为单核早期、但和中期、单核晚期。

对大多数植物来说，单核中期和晚期是诱导花粉胚或花粉愈伤组织的最佳时期，尤其单核靠边期是花粉诱导的关键时期。

不同植物的花粉对离体培养有其特定的、最敏感的发育时期，然而，对大多数植物，单核期的花粉比较容易培养。

具有无限数目花药的植物，取材比较方便，具有有限数目花药的植物，按顺序找出小孢子发育时期不同的花药。

将镜检结果与花蕾发育状态进行对比，发现花蕾状态与花粉发育时期的对应关系，为进一步取样培养奠定基础。

供体植物的遗传背景对单倍体的诱导影响甚大。

花药培养与花粉培养的不同点p12

花药培养中再生植株的形成途径与再生植株倍性的关系p12

花药培养再生植株的途径

植物原生质体制备的方法

原生质体再生植株的技术路线p13

植物染色体的人工加倍方法p14

植物远缘杂交遇到的主要困难

第九章植物细胞代谢产物制备

看护培养p165：

用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖。

这块愈伤组织被称为看护组织。

饲养层培养p165：

与处理过的（如X射线处理）无分裂能力或分裂很慢的细胞来饲养所需培养的细胞，使其分裂和生长。

细胞固定化培养p168：

是指将游离的细胞埋在支持物内部或表面进行培养的一门技术。

冠瘿组织p186：

是由根癌农杆菌感染引起的植物肿瘤组织，它能在无外加植物激素的培养基上生长。

转基因植物p266：

是指将外源基因转入到植物的细胞或组织获得了新的遗传性状的植物。

Ti质粒p14：

是指在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA。

植物细胞定向富集驯化方法p174：

细胞株定向富集驯化是一种有效的筛选技术，主要包括:

1\激素自养型细胞株的筛选驯化：

将愈伤组织或分离到的细胞接种在不含生长素、细胞分裂素的继代培养基中进行传代培养，挑选生长好的细胞进行反复继代培养驯化可以获得激素自养型细胞。

2、耐受高剂量有毒物质的细胞株驯化：

将愈伤组织或分离到的细胞接种在含高浓度的乙酸盐、苯甲酸钠等可能对细胞产生含毒化合物的培养基中反复继代培养驯化。

不断提高这些成分含量，可以获得耐受高剂量有毒物质的细胞株。

第十章微藻培养及应用

微藻p190：

一般指是那些在显微镜下才能辨别形态的微小藻类。

微藻的特点及分类p190；

1、特点：

（1）利用太阳能和二氧化碳通过光合作用生产有机物，生长速度快，效率高，能耗低。

（2）微藻提取有效成分不需要复杂的前处理。

（3）种类多，许多微藻可以产生有生物活性的化合物。

（4）可以利用贫瘠土地、盐碱地等极端环境。

（5）微藻培养简单，容易产业化。

2、分类：

微藻有原核微藻和真核微藻两大类。

根据微藻生长环境可分为水生微藻、陆生微藻和气生微藻三类生态类群。

水生微藻又有淡水生和海水生之分，根据分布又可分为浮游微藻和底栖微藻。

微藻的应用p190：

微藻生物能源、藻类生物柴油、藻类生物制氢、生物活性物质制备、水产饵料、微藻基因工程、其他应用。

第十一章动物细胞培养

动物细胞工程

细胞培养

组织培养

器官培养

原代培养p215

继代培养p217

细胞系p220

克隆

接触抑制p207

密度抑制p207

天然培养液

合成培养液

“一代”细胞p217

组织块培养法

单层细胞培养法

大规模细胞培养技术p223

体外培养细胞的主要类型及其生长特点p206

细胞系的生长过程的主要阶段及其特征

血清的主要用途及注意事项p208~209

细胞培养液配置的技术要点p211

原代细胞培养的方法、主要步骤、技术要点以及各自的适用范围

原代培养方法:

组织块培养法,组织消化培养

贴壁细胞传代的主要方法及技术要点

酶消化法

悬浮细胞传代的主要方法及技术要点

直接传代、离心法传代

细胞模型的建立与应用

细胞培养的作用意义

生产实践方面1）有害物质的快速检测

（2）大面积皮肤烧伤的修复（3）遗传病的产前诊断（4）建立各种医学模型（5）大量生产生物活性物质

理论研究方面

（1）细胞与细胞之间的相互作用

（2）细胞内部与细胞外界之间的作用（3）细胞内胞质的活动4）胞质与核质之间的流动

第十二章转基因生物反应器

转基因动物p259

基因治疗p9

基因打靶p9

动物生物反应器p249

遗传物质导入受体细胞的方法

1物理法；

包括电穿孔法、显微注射法和裸露DNA直接注射法。

2化学法：

DEAE-葡聚糖法、磷酸钙—DNA沉淀法和脂质体载体包埋法。

3生物学方法：

指病毒介导的基因转移。

常用DNA病毒载体和反转录病毒载体。

转基因动物的制备方法

1）原核期胚胎显微注射法2）反转录病毒感染法3）胚胎干细胞方法（ES细胞途径）4）精子载体法5）人工酵母染色体（YAC）转基因法6）受精前卵细胞显微注射法7）其它方法:

包括电脉冲法、染色体片段注入法、磷酸钙共沉淀法、微弹轰击法、基因剔除和基因嵌入法等

动物生物反应器的类型与特点

乳腺生物反应器、血液生物反应器、基因改良动物

第十三章干细胞与组织工程

干细胞p278

胚胎干细胞p280

成体干细胞p287

ES细胞p7

EC细胞p7

EG细胞p7

组织工程：

利用细胞生物学和工程学原理，将人体某部分的组织细胞种植和吸附在一种生物材料的支架上进行人工培