不同中药复方对禽流感病毒感染模型小鼠的影响文档格式.docx
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模型组小鼠体质量显着下降(P005),3组中药复方均可减缓模型小鼠的体质量下降(P005),作用强弱依次为桑菊饮桂枝汤藿香正气散。
3组中药复方均可延长模型小鼠的存活时间,死亡保护作用强弱依次为桂枝汤藿香正气散桑菊饮。
模型组肺指数显着升高(P005),3组中药复方均可显着降低肺指数(P005),且3组肺指数抑制率均高于病毒唑组。
【结论】藿香正气散、桂枝汤、桑菊饮对禽流感均具有一定的防治作用。
【关键词】藿香正气散/药理学;
桂枝汤/药理学;
桑菊饮/药理学;
禽流感/中药疗法;
疾病模型,动物;
小鼠
流行性感冒属于中医时行感冒和风温的范畴。
H5N1禽流感病毒所致的流行性感冒对全世界造成一定的危害,有必要研究传统中药复方对新型禽流感的防治疗效,为预防禽流感提供新的手段。
预实验结果提示:
H5N1禽流感病毒感染小鼠后,病邪由表入里迅速传变,病情急骤,发热过程不明显,机体功能迅速下降,主要表现为体温下降、纳差,甚者不能进食、消瘦、腹泻、衰竭死亡等。
本研究经过中药复方筛选预试,选择了对胃肠型感冒和暑瘟有治疗作用的藿香正气散,对体温、免疫、胃肠道等功能具有双向调节作用的桂枝汤以及治疗风热感冒初期的桑菊饮[1],观察3种中药复方对H5N1禽流感病毒感染BALB/c小鼠的干预作用,现报道如下。
1材料与方法
11毒株A/Goose/Guangdong/NH/2003(H5N1)由华南农业大学禽病研究室惠赠并经中国农科院哈尔滨兽医研究所鉴定。
12鸡胚9~12d龄发育良好的SPF鸡胚,由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司提供,许可证号:
SCXK(京)20050001。
13鸡红细胞(RBC)健康雄鸡静脉血于生理盐水4℃保存,用生理盐水洗涤,配成体积分数1%的RBC悬液。
14实验动物选用110只18~22g的SPF级BALB/c小鼠[许可证号:
SCXK(粤)20030002],雌雄各半,由广东省医学实验动物中心提供。
经5%随机抽样符合SPF级标准,并排除禽流感病毒(AIV)的自然感染,且无抗AIV的抗体产生。
选用Co60灭菌饲料,由广东省医学实验动物中心提供[生产许可证号:
SCXK(粤)20030002]。
本实验在广东省实验动物监测所的负压感染实验室[使用许可证号:
SYXK(粤)20040019]中进行,动物饲养于负压隔离器中,接毒及取材在生物安全柜中操作。
15主要实验仪器MC3电脑数字式体温计由欧姆龙(大连)有限公司提供,JJ200型电子天平由常熟双杰测试仪器厂提供,BS124S电子天平由北京赛多利斯仪器系统有限公司提供,DK8D型电热恒温水槽由上海医用恒温设备厂提供,TG16W微量高速离心机由长沙湘仪离心机仪器有限公司提供,BHC1300IIA/B3生物安全柜由苏净集团安泰公司提供。
16药物藿香正气散(藿香10g、紫苏叶5g、白芷5g、大腹皮5g、茯苓5g、白术6g、半夏曲6g、陈皮6g、厚朴6g、桔梗6g、炙甘草6g)、桂枝汤(桂枝9g、芍药9g、甘草9g、生姜9g、大枣3枚)、桑菊饮(桑叶15g、菊花10g、杏仁10g、桔梗10g、连翘10g、薄荷10g、芦根15g、甘草6g)处方药材均购自广州健民医药连锁有限公司。
病毒唑(利巴韦林),批号:
08045102,由广东省药品检验所提供。
刘忠华,等.不同中药复方对禽流感病毒感染模型小鼠的影响第3期17动物分组将110只BALB/c小鼠分为6组:
藿香正气散组(简称藿香组,剂量为264g·
d-1),病毒唑组(阳性药物对照,剂量为70mg·
d-1),模型对照组(简称模型组),尿囊液对照组(简称尿囊液组)。
接毒前2d,各组小鼠每天分别灌胃给药,接毒当天上午给药,下午将100μLH5N1禽流感病毒〔小鼠半数致死剂量(MLD50)为100625/mL〕用移液枪滴入各组小鼠鼻腔,尿囊液组小鼠滴入100μL正常尿囊液。
接毒后正常饲养,供给饲料量为标准日粮,高压灭菌水足量供给,雌雄分笼饲养。
18观察指标
181临床症状观察各组呼吸、精神状况、毛色、双耳、四肢和尾巴色泽、行为活动、粪便、饮食、体质量等变化。
182体温变化采用电子体温计测量肛温,接毒前5d每天1次,接毒后12h测1次,以后每天1次,连续9d。
183死亡情况记录接毒后各组小鼠出现死亡的时间,计算死亡率及死亡保护率:
p死亡=N死亡/N总数×
100%,p死亡保护=(N总数-N死亡)/N总数×
100%。
184肺指数实验结束后,称量各组小鼠肺质量和体质量,计算肺指数和肺指数抑制率:
I肺=m肺/m体,p肺指数抑制=(I肺,模型组-I肺,给药组)/I肺,模型组×
19统计学方法实验数据采用SPSS130统计软件进行处理,采用单变量方差分析,方差不齐采用秩和检验;
计数资料采用χ2检验,检验水平α=005。
2结果
21临床症状小鼠在接毒后第2天出现精神不振,反应迟钝,皱毛,弓背,食欲下降及呼吸急促,爱扎堆,蜷缩,竖毛,颤抖;
第3~7天出现死亡,部分小鼠出现腹泻,尿囊液组小鼠未出现临床症状。
藿香组、桂枝汤组、桑菊饮组、病毒唑组小鼠于接种后的第4~5天出现明显临床症状,模型组于接种后第3天出现明显临床症状,第6天模型组小鼠全部死亡。
22各组体温变化表1结果显示:
接毒后第1天至第9天,各组小鼠体温均显着下降,与尿囊液组比较差异均有显着性意义(P005)。
第5天3组中药复方小鼠体温均较模型组显着升高(P005),作用强弱依次为藿香正气散桂枝汤桑菊饮,其中藿香组作用更佳,第5~7天体温与病毒唑组比较差异均有显着性意义(P005)。
23各组体质量变化表2结果显示:
接毒后第2天开始,各组小鼠体质量均显着减轻,与尿囊液组比较差异有显着性意义(P005),作用强弱依次为桑菊饮桂枝汤藿香正气散。
第4~5天,藿香组、桂枝汤组、桑菊饮组与模型组比较,差异均有显着性意义(P005),表明中药干预能减缓禽流感小鼠体质量降低。
24各组小鼠的死亡保护率表3结果显示:
接毒后第4~5天,藿香组、桂枝汤组、桑菊饮组、病毒唑组小鼠死亡保护率高于模型组(P005)。
第6~8天藿香组、桂枝汤组、桑菊饮组,第9天藿香组、桂枝汤组小鼠死亡保护率高于病毒唑组(均P005),作用强弱依次为桑菊饮桂枝汤藿香正气散。
表4结果显示:
藿香组、桂枝汤组死亡保护率升高,与病毒唑组比较差异均有显着性意义(P005)。
25各组小鼠肺指数表5结果显示:
模型组肺指数显着升高(P005),藿香组、桂枝汤组、桑菊饮组肺指数显着降低,与模型组比较差异均有显着性意义(P005),且3组肺指数抑制率均高于病毒唑组。
表1各组小鼠体温变化比较(x±
s)表2各组小鼠体质量变化表3各组小鼠每天死亡保护率表4各组小鼠死亡保护率比较表5各组小鼠肺指数比较
3讨论
禽流感是由A型流感病毒引起的家禽或野禽的一种感染和/或疾病综合征。
李志东等建立了禽流感ICR小鼠模型。
我们在进行中药防治实验前也研究了禽流感病毒感染BALB/c小鼠后出现体温下降、体质量减轻、腹泻、纳差甚者不能进食,病程明显,死亡率高的模型特点。
其中体温下降可能与麻醉或动物种类有关。
因为是人工接毒,大量禽流感病毒同时进入呼吸道和肺脏,急性起病,发热就可能发生在接毒的24h内,而这时受麻醉降温影响,无法检测到体温升高的变化。
Dybing等报道,将禽流感病毒接种到BALB/c小鼠引起小鼠体温降低,与本实验禽流感病毒感染小鼠后测得体温下降相似。
我们将禽流感病毒感染猴后,也表现为发热症状,与Lois等报道禽流感在雪貂身上复制并引起发热和Rimmelzwaan等[5-6]报道禽流感引起食蟹猴发热相似。
研究表明[7-13]:
藿香正气散可通过祛邪培中治疗AIV感染小鼠所导致的正气不足及体温下降。
桑菊饮中的桑叶有抗菌、抗病毒作用,连翘对流感和副流感病毒有抑制作用。
桂枝汤对体温的双向调节能使营卫不和所致的体温升高或偏低的病理状态趋向正常,而且对肠道功能、免疫功能具有双向调节作用,能显着抑制亢进的肠蠕动,也能使受抑的肠蠕动活动增强。
桂枝含挥发油,其成分主要为桂皮醛等,对流感病毒有抑制作用。
藿香中的黄酮类化合物具有抗病毒生长增殖的作用,陈皮苷能预防流感病毒的感染。
本研究结果显示:
用中药干预的模型小鼠推迟1d出现明显临床症状,藿香正气散对模型小鼠的体温保护效果最明显,其次是桂枝汤和桑菊饮,病毒唑对禽流感感染小鼠的体温无保护作用。
藿香正气散、桂枝汤、桑菊饮的干预均能减缓模型小鼠体质量降低,对模型小鼠均有保护作用,死亡保护率由高到低依次是桂枝汤、藿香正气散、桑菊饮。
藿香组、桂枝汤组、桑菊饮组、病毒唑组肺指数抑制率均为正值,表明给药组动物的肺病变程度较模型组轻,且3组中药复方减轻肺脏病变的作用较病毒唑更佳。
综上所述,藿香正气散、桂枝汤、桑菊饮对禽流感均具有一定的防治作用。
【参考文献】
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