脯氨酸的检测方法.docx
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脯氨酸的检测方法
Coca-colastandardizationoffice【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】
脯氨酸的检测方法
脯氨酸的检测方法
1.原理
样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm检测吸光度，并作空白对照实验。
2.应用范围
本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。
本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。
3.试剂及仪器
脯氨酸
3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（茚三酮溶解于10ml2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）
2-甲氧基乙醇
蚁酸（96%），即甲酸
异丙醇（2-丙醇）水溶液：
水：
丙醇=1：
1
15ml旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）
分光光度计，检测吸光度设定在520nm下
1cm玻璃比色皿
4.样品准备
苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：
20的水进行稀释。
其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L（见稀释表）。
浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。
蜂蜜的稀释，采用蜂蜜加50ml水。
将样品在分析之前离心5min左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。
原果汁稀释表
样品类型
稀释比例
颜色空白
期望值
Apple苹果
1:
1
yes
Apricot杏
21:
1
yes
Aronia野樱莓
1:
1
yes
Banana香蕉
1:
1
yes
Blackberry黑莓
1:
1
yes
Cherry樱桃
1:
1
yes
Cranberry蔓越莓
1:
1
yes
Grape葡萄
16:
1
yes
Grapefruit柚子
21:
1
no
Guava番石榴
3:
1
yes
Kiwi泥猴桃
1:
1
yes
Lemon柠檬
21:
1
no
Lime酸橙
21:
1
no
Mandarin中国柑桔
21:
1
no
Mango芒果
1:
1
yes
Nectarine油桃
21:
1
no
Orange柑桔
21:
1
no
Papaya番木瓜
1:
1
yes
PassionFruit西番莲
1:
1
yes
Peach桃
6:
1
yes
Pineapple菠萝
1:
1
yes
Plum李子
7:
1
yes
Prune西梅
16:
1
yes
Raspberry悬钩子（树梅）
5:
1
yes
Strawberry草莓
1:
1
yes
Tangerine橘子
21:
1
no
Tomato番茄
1:
1
yes
5.标准溶液的制备
脯氨酸贮备液（500mg/L）：
脯氨酸加水定容至100ml。
此贮备溶液冷藏存放，每月重新配置一次。
50mlg/L准工作溶液：
每天配置一次，取5ml脯氨酸贮备溶液，用水定容至50ml。
用该溶液作为分析用的标准溶液。
6.结果判定
将离心管编号，并设计样品编号与离心管标号的对照表格。
按下表，向离心管内移取相应溶液：
*颜色水
样品空白标准空白
茚三酮溶液mL-------mLmL
2-甲氧基乙醇-------mL-------------标准溶液--------------mL-------
样品mLmL--------------
水---------------------mL
蚁酸mLmLmLmL
深颜色的果汁或者稀释度较低的果汁中的色素物质，将会对检测结果的判定产生影响。
为纠正因此产生的结果偏差，使用颜色空白对照实验。
对苹果汁、梨汁、浆果汁和蜂蜜采用颜色空白对照实验。
50mg/l标准溶液的水空白对照实验用于柑橘汁及其它高稀释倍数的果汁检测。
盖紧离心管，充分摇匀（处理茚三酮时要戴乳胶手套）。
同时将所有离心管放入沸水浴中加热15分钟。
将离心管放在室温水浴中冷却5分钟。
向每个离心管中加入5ml异丙醇水溶液（1：
1）。
充分混匀后，用1cm比色皿，在520nm下测量每管溶液的吸光度（A520）（对于有絮状物的样品，如芒果，将样品离心后，把上清液用移液管小心转移至比色皿中，直接用离心管倾倒会将絮状物混到上清液中）。
每次测量之前，要先用待测溶液将比色皿润洗一下，倒掉润洗液，然后再进行测量。
在35分钟的冷却时间，内将所有待测溶液的A520检测完毕。
应戴乳胶手套，以避免茚三酮溶液滴溅到皮肤上，茚三酮溶液滴溅到皮肤上，会产生深紫色的色斑。
7.计算
如果50mg/L标准溶液的DA值<，结果需经实验室主管的核准，才能上报结果，否则样品可能需要进行复测
脯氨酸（mg/L）=（A样品/A标准溶液）xC
C是标准溶液的浓度（通常为50mg/L）
对于脯氨酸含量的水果来说，结果必须要乘上稀释倍数（稀释后体积/原体积）对于浓缩果汁和蜂蜜来说，结果必须乘以稀释倍数（稀释后体积ml/预案重量g）结果用mg/kg表示
8.参考资料
AOAC官方分析方法
出版时间15thEd.（1990）
方法编号
工作表
脯氨酸
样品编号#___________________________________________Date__________
样品类型________________________________________Analyst__________
样品标准_________________________________________________
稀释度（w/v）_________________________________________________
稀释度（v/v）_________________________________________________离心管编号#________________________________________________________
空白管号_________________________________________________
A520吸光度________________________________________________________
A520空白吸光度_________________________________________________
A520________________________________________________________
如果50mg/L标准溶液的DA值<，结果需经实验室主管的核准，
样品脯氨酸
________________mg/Lormg/kg
________________mg/Lormg/kg
________________mg/Lormg/kg
________________mg/Lormg/kg
________________mg/Lormg/kg
________________mg/Lormg/kg
________________mg/Lormg/kg
PROLINE
Principle
Thepreparedsampleistreatedwithninhydrin.Prolineinthesamplereactstoformanorangederivative.Absorbanceismeasuredat520nmversusappropriatereagentblank.
Applicability
Thismethodisapplicabletothedeterminationofprolineinhoney,fruitjuicesandconcentrates.Otherapplicationsofthismethodmustbeindividuallyvalidated.
ReagentsandEquipment
Proline脯氨酸
3%ninhydrinin2-methoxyethanolgofninhydrindissolvedin10mL2-methoxyethanolissatisfactory;makeupfreshdaily）
3%的茚三酮在2-甲氧基乙醇（g茚三酮溶解在10mL2-甲氧基乙醇；每天补充新的）
2-methoxyethanol2-甲氧基乙醇
formicacid（96%）蚁酸（96%）（甲酸）
aqueousisopropanol（2-Propanol）-diluted1+1水：
异丙醇1：
1
15mLscrewcapglasscentrifugetubes（besurethattherearenochipsontherimofthetube;disposeofchippedtubes）15mL的带螺帽的玻璃离心管（确定管子的边没有破损；除掉有破损的瓶子）
spectrophotometersettomeasureabsorbanceat520nm520nm测定吸光度
1cmglasscuvettes1cm的玻璃小管
SamplePreparation
Apple,pearandmostberryjuicesarerunsinglestrength.苹果，梨和多数浆果类的汁液是直接做。
Citrusjuicesarediluted1+20withwater.柑橘类的汁液要用水稀释1：
20。
Otherfruitjuicesshouldbedilutedappropriatelysuchthattheprolineconcentrationinthedilutedsampleislessthan50mg/L（seedilutiontable）.其它水果汁液也应该适当的稀释使脯氨酸的浓度在稀释后达到小于50mg/L。
Fruitjuiceconcentratesaredilutedtosinglestrengthwithwater,andthenfurtherdilutedappropriately.浓缩果汁用水稀释到原来的浓度，然后再适当的稀释。
Honeyisdilutedgto50mLwithwater.蜂蜜取g用50mL的水稀释。
Centifugeturbidsamplesforapproximately5minutespriortoanalysistoremovesuspendedmaterial;useclearsupernatantforanalysis.浑浊的样品，在分析前5分钟离
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