+SOGC技术更新胚胎植入前基因诊断与筛查No323Word文档下载推荐.docx

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结果仅限于系统评价，随机对照试验/对照临床试验和1990年至2014年4月发表的观察性研究。

没有语言限制。

经常更新发现，并将其更新至2015年1月。

从检索文章的参考书目中确定了其他出版物。

通过搜索卫生技术评估和卫生技术相关机构，临床实践指南收集，临床试验登记册，国家和国际医疗专业社会网站，确定了灰色（未发表）文献。

价值观：

本文件中的证据质量按照加拿大预防性保健工作组报告中的标准进行评级（表格1）。

利益，危害和成本：

本更新将向读者介绍新的植入前遗传概念，方向和技术，以及辅助生殖的主要危害和成本。

关键词：

植入前遗传诊断，植入前遗传筛选，全面染色体筛选，，微阵列，，胚胎选择

推荐：

1.在进行植入前进行基因诊断之前，必须由经过认证的遗传咨询师提供遗传咨询，以确保患者充分了解生育缺陷患儿的风险，疾病对缺陷患儿的影响以及所有可用于植入前和产前诊断的检测方法的益处和限制。

2.应该告知夫妻，如果可以通过在单个细胞或多个滋养外胚层细胞上进行的检测来鉴定异常，那么植入前遗传学诊断可以降低父母双亲生育携带遗传异常的儿童的风险。

3.由于用于植入前遗传诊断的方法具有技术限制，包括可能导致假阳性，因此鼓励进行产前或产后检测以确认植入前遗传诊断的结果。

4.与卵裂期活检相反，滋养外胚层活检暂无实验显示对胚胎发育产生影响。

因此，尽可能地，选择滋养外胚层活检作为胚胎活检中的首选方法，应由经验丰富的人员执行。

5.理想情况下，单基因遗传病的植入前遗传学诊断应用多重，连同滋养外胚层活组织检查。

6.推荐携带染色体易位的夫妇使用综合染色体筛选技术与胚胎植入前遗传诊断中的滋养外胚层活检，因为它与良好的临床结果相关。

7.在进行胚胎植入前遗传筛选之前，必须由经过认证的遗传咨询师提供彻底的教育和咨询，以确保患者充分了解技术的局限性，错误的风险，以及是否需要进胚胎行植入前遗传筛查来改善体外受精的活产率。

8.使用荧光原位杂交技术（）在第3天胚胎活检中进行胚胎植入前遗传筛选与活产率降低有关，因此不应在体外受精中进行。

9.使用综合染色体筛选技术对囊胚期活检进行胚胎植入前遗传筛选，可以提高植入率，并改善周期中的胚胎选择，显示良好预后。

前言

鉴于新的细胞遗传学技术的出现，产前诊断的实践在过去十年中在产科和生殖科学领域取得了重大进展。

虽然羊膜穿刺术和已经成为传统产前检测的主要内容，但胚胎植入前遗传诊断的改进已经彻底改变了遗传诊断的世界，特别是在携带单基因疾病或染色体易位的患者中。

胚胎植入前遗传检测是在植入和植入之前使用生殖技术进行胚胎的遗传分析。

该技术在20世纪80年代后期首次开发，用确定携带X连锁疾病患者的胚胎性别。

这种做法允许仅选择植入未受影响的胚胎，从而避免常规产前检测后的选择性妊娠终止。

在具有遗传疾病例如已知遗传突变（单基因疾病）的患者中，或者当亲本存在染色体异常时，使用分子生物学或细胞遗传学技术在植入之前对卵母细胞和胚胎进行遗传分析，作为胚胎植入前遗传诊断。

虽然有争议，也被用于性别选择，兼容分型（为了救助先生患儿），并可以检测具有可变外显率（例如1,2状态）和晚期遗传的遗传性癌症疾病（例如亨廷顿舞蹈病）因此可能在某些临床和社会场合中发挥重要作用。

胚胎植入前遗传检测的另一个应用在于不孕症的治疗中。

实际上，现代人口统计学和延迟生育导致作为受孕方法的使用增加。

尽管取得了许多进展，但根据所使用的年龄组和方法，周期的活产率从27％到35％不等。

胚胎状态（染色体完整），子宫内膜容受性和植入效率等因素被认为是这种低植入率的潜在病因。

在接受的妇女中观察到的妊娠率低的最可能原因是，在正常的胚胎显微镜形态中染色体异常（非整倍体）的发病率增加，特别是在那些高龄产妇和复发性妊娠失败中。

因此，已经提出了植入整倍体胚胎作为增加植入和活产率并减少早期妊娠损失的方法。

使用细胞遗传学技术进行非整倍体筛选的胚胎遗传检测的过程称为胚胎植入前遗传筛选。

​​和均需要有，可有可无，用于进行取样的胚胎活检，遗传检测和选择的胚胎移植。

可以从卵母细胞（极体）或从胚胎细胞中提取，比如来自卵裂期胚胎的一个卵裂球或来自囊胚期胚胎的5至10个滋养外胚层细胞。

然后使用分子生物学技术（，多重）或染色体易位和非整倍体，使用细胞遗传学技术如或（综合染色体筛查），检测单基因突变。

后者是新出现的新的细胞遗传学技术，其中包括鉴定整个染色体组（24条染色体，22个常染色体+2个性染色体）。

可以通过微阵列技术（如和）或通过实现。

当细胞被检测时，胚胎保留在培养基中。

如果活检细胞或细胞显示不受遗传疾病影响或在中携带整倍体胚胎，则该特定胚胎被认为是植入到子宫中的适宜候选者。

胚胎植入前遗传检测的主要局限性是其在实现植入和活产率方面的低效力。

这可能可以通过手术，胚胎活检技术，胚胎培养和遗传诊断中遇到的技术难题来解释。

这种低怀孕率可以通过染色体异常胚胎（非整倍体）的植入进一步解释，尽管它已经被检测为没有所讨论的遗传病症，例如单基因突变或染色体易位。

目前可以与24条染色体非整倍体筛选结合进行特异性基因突变的检测，这是增加妊娠结局的理想方式。

和的实践是复杂和侵入性的，它们可能与假阳性或假阴性结果相关。

因此，必须采用多学科的方法，包括，遗传学，高危妊娠，伦理和心理学等专业人员的投入和协调。

目前用于减少遗传疾病向后代的传播，因此被提议用于单基因疾病（主导和隐性，常染色体或X连锁）和染色体结构异常携带者的诊断，包括但不限于平衡易位和罗氏易位，倒位，缺失和插入。

目前用于辅助生殖，通过植入整倍体胚胎来提高怀孕成功率，因此被提出用于孕妇年龄较大的妇女，伴有重复植入失败的夫妇，伴有重复不明原因流产的夫妇，以及伴有严重男性因素不育症的夫妇。

细胞生物学技术的发展

的最早试验使用核型分析和来对植入人类胚胎的性别以及孟德尔病进行分析。

到20世纪90年代中期，使用诸如的细胞遗传学技术，允许对某些非整倍体和染色体易位进行移植前诊断，该技术对后面人类基因组的测序起到了极大的帮助。

技术后来显示出很大的技术局限性：

只有一批染色体适合分析（最多12个探针）;

解释通常很麻烦，因为杂交失败，信号重叠和分裂影响输出的准确性;

更重要的是，许多研究显示该方法的临床结果没有差异。

鉴于这些缺点，开发了其他新的细胞遗传学技术，例如，微阵列和可以进行（所有染色体筛查）。

主要的需要来自检测和对照样品的标记；

然后将标记的与微阵列杂交。

通过扫描和成像阵列进行分析，然后测量相对于每个探针的两个杂交信号的强度。

最后，一个计算机程序分析数据并生成一个情节。

最初使用分裂中期细胞进行的显微镜进行分析。

为了准确和实际的原因，中期很快被所取代。

的评估是确定检测样本的中是否存在任何定量偏差（额外的或缺失的序列）。

因此，它可以检测染色体拷贝数（例如三体或单体）和不平衡的染色体易位。

平衡染色体重排如易位或反转（其中遗传物质仅重新排列，不丢失或获得）不能被识别。

是在特定位置或位点处存在两个或多个核苷酸列突变，这些突变其中可以存在于一个物种的不同染色体上。

迄今为止，基因组已经验证了近4000万个，主要在非编码区。

大多数阵列在所有染色体的长度上检测到66万到200万个。

对于分子细胞遗传学，分析杂合位点两个等位基因的强度比率允许高分辨率检测小区域中整个染色体的重复和缺失。

在缺失的情况下，通过不存在杂合带来检测杂合性的丧失。

阵列还具有通过对父母进行基因分型来调查任何异常的父母来源的优点，允许检测单亲二体畸变等。

因为基于的方法提供额外的理论分辨率和原始信息信息，它们可能特别适合某些应用，例如单基因缺陷的或易位染色体不平衡以及非整倍体综合检测。

使用实时对24条染色体拷贝数进行分析的方法已被研究并被广泛验证。

在该方法中，预扩增步骤，是在384孔的多孔板进行高阶多重反应，以扩增每个染色体的每个臂上的至少两个序列。

实时之后被用于快速定量每个产品，允许在基因组上进行比较。

多重是直接对样品进行的，以避免来自全基因组扩增的扩增偏差，并确保准确的拷贝数分析;

因此仅适用于多细胞滋养外胚层样品。

和微阵列在检测前都需要（单细胞扩增）。

最近技术被应用在中，并且在中使用时已经显示出植入和活产率的改善。

和中使用的不同细胞遗传学技术在表2中概述。

胚胎生物学的阶段

用于或目的的胚胎活检可以在手术期间的不同胚胎发育阶段进行。

该技术可以通过卵母细胞（一个或两个极体），卵裂期胚胎（一个卵裂球细胞）或囊胚期胚胎（5至10个滋养外胚层细胞）的活检来完成。

极体活检

这种活检技术通常在胚胎活检被认为是非法的国家（例如意大利，德国，奥地利）进行。

（极体）切除需要通过创建透明带的开口进入卵母细胞周围的空间，这可以通过机械或激光解剖来完成。

该过程可以通过在不同时间除去第一和第二，或理想地通过同时进行两次同时去除（后8至14小时）来完成。

虽然分析为夫妻关于非整倍体起源的重要预后信息提供了重要的预测信息，但仍然有不断的讨论关于是否需要进行这种类型的活检。

最近的研究表明，第一和第二都容易出现减数分裂的错误。

不幸的是，这种技术在期间使用时具有缺点，特别是其限于单独由母体携带的遗传或染色体异常的诊断。

在中，由于与其成本效益（需要检测的卵母细胞数量很多）有关的问题，活检仍然是一个讨论的问题，活检方法无法检测出减数分裂后染色体异常的高发生率，鉴于减数分裂非整倍体的可能自我修正，活检的诊断准确性受到怀疑。

卵裂期活检

透明带的开放可以通过酸性酪氨酸溶液，机械解剖或通过激光切割来完成。

卵裂期活检通常在体外发育的第3天通过提取一个卵裂球进行。

之前文献显示提取两个卵裂球可能对胚胎发育有不利影响，因此应该避免。

卵裂球活检的主要缺点是嵌合风险，这可能是胚胎植入前遗传技术遇到的假阳性或假阴性结果的原因。

然而，这种技术与胚胎发育的第5天至第6天的新鲜胚胎移植相容，因为遗传结果通常在卵裂球活检后1至2天可用。

囊胚期活检

囊胚期活检技术包括在胚胎发育的第5天或第6天取5至10个滋养外胚层细胞。

透明带的打开是通过机械或激光穿透在胚胎发育的第3天完成的。

然后将这些胚胎放入用于囊胚期的扩展培养物中，并通过提取疝内皮细胞进行囊胚活检。

从100个或150个细胞的囊胚取5至10个滋养外胚层细胞对应于从6至8个细胞胚胎中取一个或两个卵裂球的比例较低的细胞损失比例（3.3％至10％），其中细胞含量将减少12.5％至33％。

囊胚活检还提供比第3天活检更多的起始模板，这将理论上导致的敏感性和特异性改善，并且有较低的嵌合率。

这种技术是合算的，因为很少的胚胎被检测，并且与过去十年的活产生活机会增加有关。

然而，如果要进行冷冻胚胎移植，在单位工作的胚胎学家应该经历胚胎培养和玻璃化。

最近，与卵裂期活组织检查相比，滋养外胚层细胞活检已显示对胚泡生殖潜力没有影响，而卵裂期活检会降低39％。

虽然每次移植的活产率可能会随着这种技术的进步而增加，但应注意的是，随着胚胎培养的延长，更多的患者将不能达到胚胎移条件；

因此，应该仔细咨询夫妻关于这些技术限制和项目的更高成本。

参见表3，以比较不同胚胎活组织检查的优点和缺点。

单基因缺陷检测项目

首先应用于基于的X连锁病症的方法。

这允许确定胚胎性别和未受影响的女性的移植。

在这些早期病例之后不久，开发了基于的方案用于遗传性疾病，例如囊性纤维化和α-1-抗胰蛋白酶缺乏症。

这些是基于包含致病突