全自动电泳培训PPT文件格式下载.ppt

全自动电泳培训PPT文件格式下载.ppt

《全自动电泳培训PPT文件格式下载.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《全自动电泳培训PPT文件格式下载.ppt（50页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

3.关上盖子，清洗芯片应静置2分钟。

4.在清洗芯片中加入800ulDEPC水，并做好标记。

5.打开盖子，取出清洗芯片，再在该芯片中加入800ulDEPC水，如此反复用DEPC水清洗，共4次以上。

6.关上盖子，在全自动电泳仪中安置清洗芯片停留5分钟，清洗电极。

7.清洗后，倒去清洗芯片中的水，并重新加入800ulDEPC水，重复第6步清洗。

8.打开盖子，取出清洗芯片。

9.打开全自动电泳仪的盖子30-60秒，使电极上的水份蒸发干净。

10.实验完毕后，请将清洗芯片中的DEPC水倒去。

Experion操作（以RNA分析为例）,制备gel-Stain1使用前将RNA胶（RNAgel），RNAstain和上样buffer（loadingbuffer）从冰箱中取出，避光，并在室温平衡15-20分钟。

2振荡RNAstain（蓝色帽），离心3-5秒钟，确保染色剂（stain）中的DMSO完全溶解3在过滤离心管（spinfiltertube）加入600ulRNAgel（绿色帽）4将上述

（1）胶1，500g离心10分钟。

使所有胶都过滤后，丢弃已用的过滤离心管（spinfiltertube）。

已过滤的胶可以在4周内使用，4周后过滤的胶，如要再使用须再过滤。

5在无RNase的EP管中加入65ul已经过滤好的胶和1ulRNAstain（蓝色帽），振荡混匀，并避光备用。

（足够1个芯片）6旋紧RNAStain管的盖子。

由于二甲基亚砜（DMSO）为高度的光敏感，所以应避光保存。

制备好的Gel-stain溶液应在一周内使用。

7RNA样品和RNALadder,70变性2min，冰上5min。

芯片制胶,1.从包装盒中取出一块RNA芯片，按芯片上箭头所指方向和位置嵌入至置胶工作站的芯片平台；

2.在GS孔中垂直加入9ulGel-stain，枪头应深入加样孔，加样时防止加入气泡；

3.按RNA芯片上所示，设置工作模式：

压力为B和置胶时间为1；

4.启动START按钮，置胶工作站工作信息会在液晶显示屏上显示。

整个置胶过程为30秒钟，在置胶过程中，切勿打开盖子。

加样品和RNALadder,1.将9ulgel-stain加入其他标有GS的孔中；

2.在标有G的孔中，加入9ul过滤好的胶；

3.上样buffer和sensitivityenhancer在使用前，要充分振荡；

4.在标有SE的加样孔中加入6ulsensitivityenhancer；

5.在每一个样品孔和标记有L的ladder孔中，加入5ul上样buffer（Loadingbuffer），即使待检测样品少于11个，也要把所有的加样孔都加满，没有样品的加样孔，要以Loadingbuffer代之，否则实验结果有误；

6.加1ul变性的RNALadder至标记有L的加样孔中；

7.在每一个样品孔中加1ul待测样品或Loadingbuffer；

8.将加好样的芯片置于振荡器（vortexstaion）中悬浮，振荡1分钟，而后从振荡器中取出；

9.加样后的芯片，要在5分钟内进行样品检测，否则样品溶液会蒸发，导致实验结果不准确,芯片内电泳30分钟,A,B,100ng/L,1.6523S/16SRatioin“A”1.0423S/16SRatioin“B”,Analysis:

E.coliTotalRNA,Sample:

ProkTotalRNA,TotalRNA分析示例,样品结束后清洗电极,1.在清洗芯片中加入800ulDEPC水，轻轻拍击芯片，将加样孔中的气泡赶出2.打开全自动电泳仪的盖子，将清洗芯片放置进全自动电泳仪。

3.关上盖子，让清洗芯片停留在全自动电泳仪中1分钟。

4.打开盖子，取出清洗芯片，倒出芯片中的DEPC水。

5.让全自动电泳仪的盖子打开30秒钟，吹干电极，而后关上盖子。

6.为防止污染电极，清洗芯片使用完后，重新用DEPC水清洗该芯片。

数据分析：

RNAQualityIndicator,蛋白质表达优化蛋白质表达方法比较蛋白质表达模式基于蛋白质表达选择克隆,ExperionTMSystem,蛋白质纯化监测及优化蛋白质纯化分析蛋白质纯度和产量,DNA、RNA分析RNA特性研究浓度检测定量PCR分析DNA芯片分析,Experion应用,应用一：

蛋白电泳检测,摸索蛋白最佳诱导、表达的时间蛋白层析后纯度检测传统的SDS-PAGE费时费力全自动电泳与任何品牌或型号的层析设备搭配，方便、快捷,SDS-PAGE,纯度100%?

在蛋白质纯化中的应用,ShownaresamplesfromanIMACpurificationofHis-taggedDihydrofolateReductase（DHFR）proteinseparatedusingtheExperionsystemorbySDS-PAGE,Load,FlowThru,Elution,Wash,RNA极易降解，使得定量PCR结果的可信度下降传统的方法是PAGE电泳，当28S/16S1.8时，认为样品完好方法费时费力，且需消耗较多样品,应用二：

RNA电泳检测,RNAQualityIndicator（RQI）,定量PCR前的检测,NGS:

WhereExperionFits（RNAandDNAassays）,DNAlibrary,Shear,Amplify,TotalRNAextraction,RTtocDNA,Sequence（e.g.Illumina,Roche,ABIsolid）,CheckRNAIntegrityusingRNAchips.,CheckDNAsmearToensureshearingProducedfragmentsizeRangeofinterest.Rangeofdesiredshearedsizevariesbasedonthenextgensequencingplatform.CustomersusingDNAchipRNAchip.,BaylorCollegeofMedicine:

sheareddscDNArunonDNA12Kassay,Note:

TheselibrarieswereshearedandpreparedwithIlluminasadapterssotheimageisthefinalcDNAlibrarybeforeitgoesonthesequencer.,常见问题（troubleshooting）,电泳、漩涡震荡、制胶工作站1、全自动电泳时屏幕显示“IVCheckFailure”或“Chiperror”芯片中1个或多个加样孔没有正确加样，或者电极没有完全被溶液所覆盖。

因此，所有加样孔必须加满，没有加样品的孔须补加空白样品或者其他代用品。

如果1个或多个加样孔中含有气泡，那么就会影响实验结果,加样时，枪尖必须深入加样孔底部。

补救办法是：

轻轻拍击芯片，或者用一干净的枪头去除芯片内的气泡。

当使用枪头去除气泡时，须将枪头垂直深入进加样孔底部，缓慢的吸取液体，切勿在最后一步将气泡混入芯片。

漩涡震荡时有液体遗洒，检查加样孔外壁，确保振荡器平台与基底安装紧密。

2、制胶工作站显示“CheckSeal”检查或者更换置胶工作站中的“O”垫圈。

重新确认置胶工作站中是否有芯片，或芯片是否安置正确。

数据分析1、全自动电泳图谱中未检测到峰加样孔中有气泡，或者没有正确地置胶，或者没有正确地加样品。

改进方法是：

分别在置胶和加样阶段仔细检查芯片中是否混入气泡。

所加样品量过少。

改进方法：

确认所有加样孔中有6ul的溶液，并确认每一个未加待检样品的孔中都有Loadingbuffer，TE，或者DEPC处理水。

电泳管道中有阻塞物。

改进办法：

使用高质量的实验用水（如本公司的全自动电泳仪专用DEPC处理水）。

或者，重新过滤一下胶溶液。

电极针脏引起断流，可使用清洁芯片清洗电极2、电泳图中的泳道有小杂峰加样孔中有气泡，改进方法：

在加样完成后，应将芯片翻转，从背面仔细检查是否混入气泡。

确认RNA芯片是否正确安置入全自动电泳仪中。

确认移液枪是否校准正确，使用加样