分析测试技术之仪器介绍2_精品文档Word下载.docx

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由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中，激发样品中的荧光物质发出荧光，荧光经过滤过和反射后，被光电倍增管所接受，然后以图或数字的形式显示出来。

物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态,这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出，从而产生荧光．

不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征，这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱；

，因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。

在溶液中，当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似，荧光分析通常也采用标准曲线法进行。

3、使用方法：

1.开机：

接通电源，打开计算机，接着打开荧光分光光度计开关，再打开软件，等待10分钟后再进行使用。

2.检测前准备：

参照仪器说明书，在20天内至少进行一次激发校准和发射校准，检测前仪器应预热。

3.工作条件的选择：

环境温度应在20℃±

5℃;

相对湿度不大于70%;

电源稳定，无磁场、电场干扰。

根据样品的特性及荧光强度，选择合适的仪器工作条件（如狭缝、PM增益、响应时间等）。

4.基本测定

（1）荧光激发光谱测定

设置仪器参数，扫描发射波长，找到max、λem，以此为发射波长，记录发射强度作为激发波长的函数，便得到激发光谱。

（2）荧光发射光谱测定

设置仪器参数，扫描激发波长，找到max、λex，以此为激发波长，记录发射强度与发射波长间的函数关系，便得到荧光发射光谱。

（3）定量测定

配制一系列已知浓度的标准溶液，在一定的测定条件下，设置λex、λem，按照由稀至浓的次序，测定标准溶液的荧光强度，绘制荧光强度—浓度的工作曲线，不改变仪器参数测定未知溶液的荧光强度，由工作曲线即可求出未知溶液的浓度。

4、注意事项：

1.在实验开始前，应提前打开仪器预热，并配制好所需的溶液，对于已经配制好的溶液，在不用时放在4℃冰箱中保存，放置时间超过一星期的溶液要重新配制。

2.实验所用的样品池是四面透光的石英池，拿取的时候用手指掐住池体的上角部，不能接触到四个面，清洗样品池后应用擦镜纸对其四个面进行轻轻擦拭。

3.在测试样品时，注意荧光强度范围的设定不要太高，以免测得的荧光强度超过仪器的测定上限。

4.实验结束后，要及时的清理台面，处理废液，清洗和放置好样品池，将下次要用的溶液放回冰箱，并且按规定登记实验记录，养成良好的实验习惯。

5.关机时，先关闭灯源，等待15分钟后再关闭分光光度计和计算机。

否则会影响仪器的寿命。

5、本专业应用领域：

在本专业中主要用来测量实验中合成材料的激发光谱、发射光谱和固体样品荧光量子产率测定，可根据固体样品的测定结果计算其荧光量子产率。

也可用来检测分子间荧光共振能量转移（FRET）和生物发光共振能量转移（BRET）和环境中的污染物：

通过比较三维荧光光谱可识别环境污染物。

二、CE-LIF（毛细管-激光诱导荧光）

CE-LIF装置图

1.原理和方法：

毛细管与激光诱导荧光检测装置联用，在进行分析时将毛细管内充满了电解液，毛细管两端通高压电，使电解液内带电分子移到毛细管相反电荷的一端。

因为不同荧光分子的大小对电荷比不同，电泳的方向不同，就以不同的速率在管中移动，到达毛细管检测端也有快有慢。

毛细管电泳既依此检测、分离不同分子。

混合物在毛细管中通过10-20kv的高压进行驱动分离，在柱上检测端利用激光诱导荧光检测并在计算机上记录荧光分子的信号。

2.注意事项：

保证一定干燥度（硅胶吸收空气水分）；

保持系统稳定（防抖动，温度突变，防止气泡进入毛细管等）；

缓冲溶液要每天新制，使用之前用滤膜过滤；

实验之前毛细管要用氢氧化钠溶液过夜

3.本专业应用：

用于食品农药残留。

主要针对有机磷农药和对氧磷农药，主要通过用有荧光的物质通过与农药分子的直接或间接结合检测并分离实际样品中的农药，通常用的荧光物质为FITC、QD量子点。

同时还要注意缓冲溶液pH对分离效果的影响。