乙酰半胱氨酸分析Word文档格式.docx

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全部溶化或轻微浑浊,不得有异物

装量差异

中国药典2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异（SOP/YC005-01-01装量差异）

符合规定

有关物质

HPLC法（SOP/YC005-01-01有关物质）

L-胱氨酸（杂质A）、L-半胱氨酸（杂质B）、N,S-二乙酰-L-半胱氨酸（杂质D）的量均不超过0、5%,N,N’-二乙酰-L-胱氨酸（杂质C）的量不超过0、5%,杂质总量不得过1、0%

L-胱氨酸（杂质A）、L-半胱氨酸（杂质B）、N,S-二乙酰-L-半胱氨酸（杂质D）的量均不超过0、5%,N,N’-二乙酰-L-胱氨酸（杂质C）的量不超过1、0%,杂质总量不得过1、5%

微生物限度

中国药典2010年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法（SOP/YC005-01-01微生物限度检查）

细菌数≤1000个/g,霉菌与酵母菌数≤100个/g,大肠埃希菌不得检出

含量

HPLC法（SOP/YC005-01-01含量测定）

95、0%～105、0%

90、0%～110、0%

1性状

本品应为可溶性细颗粒;

气芳香,味酸甜。

1、2鉴别

（1）取本品适量（约相当于乙酰半胱氨酸0、2g）,加水20ml溶解,用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6、5,并用水稀释至40ml,作为供试品溶液;

另取乙酰半胱氨酸对照品0、2g,同法制备作为对照品溶液。

照薄层色谱法（附录ⅴB）试验,吸取上述两种溶液各5µ

l,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水（4:

1:

5）混合并平衡10分钟的上层液为展开剂,展开后,取出,在热气流下吹干,再于碘蒸气中显色,供试品溶液所显主斑点的位置与颜色应与对照品溶液的主斑点相同。

（2）HPLC法:

在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

以上

（1）、

（2）两项可选做一项。

1、3检查

检查方法:

取本品,加水制成10%的溶液,依法测定（2010年版二部附录ⅥH）,pH值应为2、0～3、0。

取本品,在70℃干燥4小时,减失重量不得过2、0%（2010年版二部附录ⅧL）。

取供试品10g,加热水200ml,搅拌5分钟,可溶颗粒应全部溶化或轻微浑浊,但不得有异物。

应符合规定（2010年版二部附录ⅠN颗粒剂-装量差异）。

HPLC法

色谱条件:

色谱柱:

C18

流动相:

硫酸铵缓冲液（取硫酸铵5、00g、庚烷磺酸钠4、04g,用水稀释至1000ml,用7mol/L的盐酸溶液调节pH值至2、0）:

甲醇（93:

7）

柱温:

30℃检测波长:

205nm

流速:

1、0ml/min进样体积:

10µ

l

理论塔板数:

按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000。

测定法:

取含量测定项下的细粉适量（约相当于乙酰半胱氨酸25mg）,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,作为供试品溶液;

精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为自身对照溶液;

另取胱氨酸（杂A）对照品与半胱氨酸（杂B）对照品适量,精密称定,（杂A需加1M盐酸使溶解）,加流动相分别溶解稀释制成每1ml中约含有2、5μg的溶液,摇匀,作为杂质A,杂质B对照溶液;

取自身对照溶液20μl注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分峰的峰高约为满量程的20%;

精密量取杂A与杂B对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图;

再精密量取供试品溶液20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分保留时间的5倍。

供试品溶液色谱图中,如有与杂A与杂B保留时间一致的色谱峰,按外标法以峰面积计算,均不得过0、5%;

杂C的峰面积（杂C相对保留时间约为1、6）除以校正因子（校正因子=1、21）之后不得大于自身对照溶液的主峰面积1、0倍（1、0%）,杂D的峰面积（杂D相对保留时间约为1、8-2、0）除以校正因子（校正因子=0、78）之后不得大于自身对照溶液的主峰面积的0、5倍（0、5%）,各杂质峰面积的与不得大于自身对照溶液主峰面积的1、5倍（1、5%）。

计算公式:

AX×

CR×

Vx×

W×

R

杂A/杂B（%）＝—————————×

100%

AR×

MX×

K

式中:

AX为供试品溶液相应杂质的峰面积;

AR为杂质对照溶液的主峰面积;

MX为供试品的称取量,mg;

CR为杂质对照品的浓度,mg;

R为杂质对照品自身的含量;

W为平均袋重,mg;

K为每袋的标示含量,mg。

AX

杂质C（%）=—————×

1%

1、21×

AR

AX为杂质C的峰面积;

AR为自身对照溶液的主峰面积;

杂质D（%）=—————×

0、78×

式中:

AX为杂质D的峰面积;

AX

其她单个杂质（%）＝———×

AR

AX为供试品溶液其她单个杂质的峰面积;

AR为自身对照溶液的主峰面积;

杂质总与（%）=杂A（%）+杂B（%）+杂C（%）+杂D（%）+其她单个杂质的与（%）

微生物限度

含量测定

0、05mol/L磷酸氢二钾溶液（用稀磷酸调节pH值3、0）

214nm

20µ

测定法:

取本品10袋,将内容物全量转移至500ml量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液（1→2000）适量,振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液（1→2000）稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;

精密量取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图。

另取乙酰半胱氨酸对照品约50mg,精密称定,置100ml量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液（1→2000）溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,同法测定。

按外标法以峰面积计算,即得。

AX×

MR×

R×

VX

含量（%）=————————×

VR×

式中:

AX为供试品溶液的峰面积;

AR为对照品溶液的峰面积;

MR为对照品的称取量,g;

VR为对照品稀释体积,ml;

VX为供试品稀释体积,ml;

R为乙酰半胱氨酸对照品的含量;

K为乙酰半胱氨酸颗粒的规格,g。

分析方法的验证

按照《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》、《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《化学药物杂质研究技术指导原则》、《化学药物残留溶剂研究技术指导原则》以及2010年版《中华人民共与国药典》附录中有关的指导原则提供方法学验证资料,进行方法学验证,结果如下:

含量测定方法学验证结果

项目

验证结果

专属性

空白辅料基本无干扰

线性与范围

在108、44µ

g/ml～1084、40µ

g/ml范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系,R=0、9998

定量限、检测限

主成分的定量限为0、856ng,峰面积的RSD%=2、75,保留时间的RSD%=0、76

准确度

在80%～120%浓度范围内,回收率为:

99、21%-104、75%,平均回收率为101、74%,RSD为1、77%

精密度

重复性:

平均值为99、95%,RSD为0、61%

中间精密度:

平均值为99、93%,RSD为0、06%

溶液稳定性

测试液在5小时内稳定

耐用性

参数的微小调整对结果均无显著影响

方法的确定

参考乙酰半胱氨酸颗粒（中国药典2010版第二部）的含量测定方法,照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录VD）对本品的含量测定条件进行了试验。

色谱条件与系统适用性试验:

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;

以0、05mol/L磷酸氢二钾溶液（用稀磷酸调节pH值3、0）为流动相;

检测波长为214nm。

理论板数按乙酰半胱氨酸峰计算不低于1000。

取本品10袋,将内容物全量转移至500ml量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液（1→2000）适量,振摇使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取25ml,置100ml（0、1g规格）或200ml（0、2g规格）量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液（1→2000）稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液;

仪器、试剂及色谱条件

仪器:

岛津SPD-10AVP紫外可变波长检测器

岛津LC-10ATVP高压恒流泵

HW2000色谱工作站

试剂:

磷酸氢二钾分析纯南京化学试剂有限公司

水纯化水自制

磷酸分析纯南京化学试剂有限公司

焦亚硫酸钠分析纯国药集团

C18柱,5μm,4、6mm×

250mm;

流动相:

0、05mol/L磷酸氢二钾溶液（用稀磷酸调节pH值3、0）;

检测波长:

214nm;

流速:

1、0ml/min;

检测波长的确定

取乙酰半胱氨酸对照品适量,精密称定,用焦亚硫酸钠溶液（1→2000）稀释制成每1ml含乙酰半胱氨酸10μg的溶液;

照紫外-可见分光光度法（中国药典2010版二部附录ⅣA）,于190nm～400nm扫描,结果发现乙酰半胱氨酸对照品为末端吸收。

参照乙酰半胱氨酸颗粒质量标准（中国药典2010年版二部）,选用214nm为含量的测定波长。

见附件5,第1页。

空白辅料干扰

称取处方量空白辅料约0、225g,置50ml量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液（1→2000）溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为空白辅料溶液。

取空白辅料溶液20μl注入液相色谱仪,记录谱图。

见附件5,第2、3页。

结果显示:

空白辅料不干扰本品含量的测定。

含量测定线性试验

精密称取乙酰半胱氨酸对照品27、11mg,精密称定,置25ml容量瓶中,加焦亚硫酸钠溶液（1→2000）溶解并稀释至刻度、摇匀,作为贮备液。

分别精密量取贮备液适量置合适量瓶中,用焦亚硫酸钠溶液（1→2000）稀释制成一系列浓度的供试品溶液,分别精密吸取供试品溶液及贮备液各20μl注入液相色谱仪,记录色谱图。

以峰面积为纵坐标（Y）,对照品浓度（mg/ml）为横坐标（X）,绘制标准曲线。

图谱见本资料附图第15-20页,结果见表1。

表1乙酰半胱氨酸颗粒含量测定线性试验

浓度

（µ

g/ml）