健脾活血中药对胃溃疡大鼠H K ATP酶及壁细胞胃泌素受体作用的影响Word下载.docx

健脾活血中药对胃溃疡大鼠H K ATP酶及壁细胞胃泌素受体作用的影响Word下载.docx

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结果健脾活血组壁细胞胃泌素受体结合位点数低于正常大鼠（P0.05），胃液总酸度及H+,K+-ATP酶活性升高（P0.05）；

奥美拉唑组壁细胞胃泌素受体结合位点数明显高于正常大鼠（P0.05），胃液总酸度及H+,K+-ATP酶活性明显降低（P0.05）；

中西药组壁细胞胃泌素受体结合位点数、胃液总酸度及H+,K+-ATP酶活性与正常大鼠比较无显著性差异（P0.05）。

结论健脾活血中药平缓地抑制胃壁细胞的H+,K+-ATP酶活性，降低胃酸的分泌；

同时，不影响胃泌素受体结合位点数，防止停药后反跳性过多泌酸。

【关键词】胃溃疡；

壁细胞胃泌素受体；

H+，K+-ATP酶；

健脾活血中药　　Abstract：

ObjectiveToobservetheeffectsofJianpiHuoxueRecipeontheactivitiesofH+，K+-ATPaseandgastrinreceptoringastricparietalcellsofgastriculcerinrats.MethodsTheligand-bindingnumberofgastrinreceptorsonparietalcellswasanalysedinradioligandbindingassay.Totalacidityofgastriculcer，andH+，K+-ATPaseactivitiesweremeasured．ResultsThegastrinreceptorbindingsitesofparietalcellsinJianpiHuoxuegroupwereobviouslylowerthanthatinthenormalgroup，thetotalacidityofgastricjuiceandtheactivitiesofH+，K+-ATPasewereobviouslyhigherthanthatinthenormalgroup.ThegastrinreceptorbindingsitesofparietalcellsinOmeprazolegroupwereobviouslyhigherthanthatinthenormalgroup.ThetotalacidityofgastricjuiceandtheactivitiesofH+，K+-ATPaseinOmeprazolegroupwereobviouslylowerthanthatinthenormalgroup.Thegastrinreceptorbindingsitesofparietalcells,thetotalaciditiesofgastricjuiceandH+，K+-ATPaseactivityofparietalcellsincombinedgroupandinthenormalgrouphadnosignificance.ConclusionJianpiHuoxueRecipecaninhibittheactivitiesofH+，K+-ATPaseandthesecretionofgastricacidgently.Atthesametime,thebindingcapacityofgastrinreceptoringastricparietalcellshasnoeffect,soitcanpreventexcessivesecretionofacidafterdrugwithdrawal.　　Keywords：

Gastriculcer;

Gastrinreceptoronparietalcells;

H+,K+ATPase;

JianpiHuoxueRecipe　　中医药与中西医结合对消化性溃疡防治复发与保证其远期疗效取得了较好的成效。

健脾活血法针对消化性溃疡的脾虚血瘀的特点，具有较好的临床远期效应的优势。

为探讨其作用机制，特设计本实验。

现报道如下。

　　1材料　　1.1动物及主要试剂SD♂大鼠，体质量（200±

20）g，由广东省卫生厅实验动物中心提供。

125I-胃泌素购自中国原子能科学研究院，比活度为1700ci/mmol，放化纯度大于95%。

胃泌素标准品及链霉蛋白酶由北京鼎国试剂公司提供（Sigma生产）。

H+，K+-ATP酶活性测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

　　1.2主要仪器及设备5500型γ计数器（Beckman），HYS-4多头细胞收集器（上海跃进医疗器械厂），HZS-H恒温水浴振荡器（哈尔滨东联电子有限公司），XDS-1倒置显微镜（重庆光电仪器厂），TDZ5-WS自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器公司），多头磁力搅拌器（常州国华电器厂）；

LDZ5-2低速离心机（北京医用离心机厂）。

　　2方法　　2.1药物、模型的制备及动物分组　　健脾活血方以四君子汤为主方，配合活血药物而成：

党参20g，白术15g，茯苓30g，三七10g，赤芍20g，丹参15g，黄芪30g，白及30g等。

药材经生药学鉴定，常规水煎2次，浓缩至100%，使每毫升含生药1g。

大鼠胃溃疡模型制备采用乙酸大鼠胃溃疡模型［1］。

大鼠造模苏醒后，按完全随机设计法将大鼠分为5组。

①正常对照组：

10只，系非造模大鼠，喂生理盐水0.09g／（kg·

d）；

②模型组：

10只，造模3d开始喂生理盐水0.09g／（kg·

③奥美拉唑组：

10只，造模3d开始喂奥美拉唑2mg／（kg·

④健脾活血组：

10只，造模3d开始喂健脾活血药物1.0g／（kg·

⑤中西治疗组：

d）+奥美拉唑2mg／（kg·

d）。

于第22天断头处死。

　　2.2大鼠胃壁细胞的分离与纯化　　参照文献建立方法［2］。

大鼠脱颈椎处死，剖腹取胃，结扎贲门和幽门。

在胃底部做一小切口，用玻璃棒将胃袋翻转，用玻璃片刮下部分胃黏膜作H+，K+-ATP酶活性测定。

然后在胃底与胃体之间结扎，弃去胃底，用生理盐水将胃袋冲洗干净。

把预先配制好的链酶蛋白酶（Pronase）液约2.5ml（1g/L）注入胃袋。

然后将胃袋放入预先通氧的A液（NaH2PO4，Na2HPO4，NaHCO3，NaCl，KCl，HEPES，Glucose，BSA，EDTAMA）中，在37℃水浴消化30min后转入B液（NaH2PO4，Na2HPO4，NaHCO3，NaCl，KCl，HEPES，Glucose，BSA，CaCl2，MgCl2）中，用磁力搅拌器搅拌两次，各10min，收集每次B液中打下的细胞悬液。

此过程重复3次。

所有收集到的细胞悬液均用200目尼龙网过滤，过滤液4℃，1000r/min，离心5min，倾出上清液，沉淀用C液（B液+DTT）混悬以供纯化。

孵育过程皆充以950ml/L的O2+50ml/L的CO2。

取10ml专用离心管，用吸管在管底分别铺2ml预先配制好的60%和40%Percoll液制成不连续密度梯度分离液，将细胞悬液1ml左右铺在最上层，然后4℃，2000r/min，离心20min进行纯化，收集40%与60%Percoll交界面处的壁细胞，C液洗两次，再用C液混悬备用。

　　2.3胃泌素受体测定　　根据预试（多点饱和实验）确定125I-胃泌素放射配基的近饱和终浓度为100pmol/L，并以此为基础做单点结合实验，加样顺序如下（表1）。

表1胃泌素受体放射配基结合实验的加样顺序（略）　　加样后37℃孵育30min，加冰冷的C液720ml终止反应，迅速用多头细胞收集器收集至玻璃纤维滤膜3次。

烘干滤膜后，置于γ计数器测量放射性。

特异性结合（SB）=总结合（TB）-非特异性结合（NSB）。

以上均各做3个复管。

特异结合位点数由以下公式求出:

位点数（单个细胞）=（特异结合×

6.022×

1023）/（计数效率×

2.2×

106×

放射比活度×

放化纯度×

109×

细胞总数）。

　　2.4H+，K+-ATP酶活性及胃液总酸度测定　　用玻璃片刮下胃黏膜放入冻存管内，于-70℃保存待测，用于测定H+，K+-ATP酶活性。

将已制备的胃黏膜准确称重后加49倍生理盐水，用组织匀浆机制成2%组织匀浆。

按照H+，K+-ATP酶活性测定试剂盒说明进行操作。

取胃时将全部胃液抽出置于离心管中离心，3000r/min,20min取上清液，用0.1mol/LNaOH溶液滴定测量胃液的总酸度。

　　2.5统计学处理　　采用统计软件SPSS11.0分析，实验数据均以±

s表示，用t检验处理，P0.05为有统计学差异。

　　3结果　　3.1健脾活血药物对胃溃疡大鼠壁细胞胃泌素受体结合容量的影响溃疡大鼠壁细胞胃泌素受体结合容量明显低于正常大鼠（P0.01），奥美拉唑组、健脾活血组及中西治疗组结合位点数明显回升，与溃疡组比较有非常显著性差异（P0.01），奥美拉唑组结合位点数与正常组比较升高，有显著性差异（P0.05）。

见表2。

表2大鼠离体壁细胞胃泌素受体结合位点数（略）　　3.2健脾活血药物对胃溃疡大鼠胃液总酸度及壁细胞H+，K+-ATP酶活性的影响　　溃疡模型组大鼠胃液总酸度较正常对照组明显升高（P0.01）,壁细胞H+，K+-ATP酶活性亦明显升高（P0.01）；

奥美拉唑组大鼠胃液总酸度较正常对照组降低（P0.05）,壁细胞H+，K+-ATP酶活性亦下降（P0.05）；

健脾活血组大鼠胃液总酸度较正常对照组升高（P0.05）,壁细胞H+，K+-ATP酶活性亦升高（P0.05）；

中西治疗组与正常组比较，其总酸度及H+，K+-ATP酶活性无明显差异（P0.05）。

结果见表3。

表3各组胃液总酸度及壁细胞H+，K+-ATP酶活性的测定结果（略）　　4讨论　　胃泌素是与胃酸分泌功能密切相关的激素，由胃窦G细胞所分泌，作用于壁细胞膜上的胃泌素受体（壁细胞是胃泌素的主要靶细胞），而促使胃壁细胞的泌酸作用。

胃泌素可直接作用于细胞而促进胃肠道粘膜的生长作用（特别是胃泌酸区粘膜）和刺激胃肠胰蛋白质、RNA、DNA合成增加，维持胃黏膜的完整性，是胃粘膜的主要保护因子之一［3］；

另一方面又能作为胃酸分泌的主要刺激因子而刺激酸分泌。

胃泌素与其受体的正常结合和受体的良好介导是壁细胞泌酸功能得以正常发挥的前提和保证［4，5］。

　　胃泌素的生物学效应由胃泌素受体介导，壁细胞膜上胃泌素受体水平直接影响到胃酸的分泌的性质，因此，单纯研究胃泌素水平的意义是有限的，还需要结合胃泌素受体、受体后信号转导的变化规律研究。

　　H2受体拮抗剂、质子泵抑制剂的使用，胃腔内pH值的升高，可以反馈性地刺激胃泌素分泌增加，在高血清胃泌素水平的作用下，肠嗜铬样细胞（ECLcell）激活与增殖，分泌过多的组胺，一起作用于胃壁细胞产生反跳性酸分泌增加［6～9］；

同时，胃壁细胞H+,K+-ATP酶活性被抑制，反刺激胃壁细胞膜上过多地表达胃泌素受体等