试验真菌和细菌的分离培养和鉴定病理学研究方法Word文件下载.docx
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实验八、草地植物病害的早期诊断技术和昆虫饲养与鉴定(榆中校区病虫普查)15
实验九、榆中校区草地植物病害调查18
实验十、榆中校区害虫调查20
实验十一、啮齿类动物外部形态观察22
实验十二、啮齿类动物的内部构造解剖观察25
参考文献28
说明
一、总体目的:
通过亲自观察,增加对草地有害生物的感性认识,达到认识有害生物的目的;
掌握相关研究方法;
通过实践环节,将理论知识转化为实践技能。
二、实验要求:
实验指导每人1份或2人1份;
实验前阅读实验指导,熟悉实验内容;
认真听取老师的讲解;
根据实验内容,参考教材或相关资料,亲自观察、动手操作,完成实验报告。
每班由班长和学习委员负责,每组由组长负责统一领取实验器材,实验结束后统一收缴,破坏或丢失责任自负。
严格考勤,缺席者无本次实验成绩,实验成绩统一计入学期总成绩。
不迟到、不早退。
实验台卫生由每组自己完成,实验结束后,将桌面收拾整齐,拔掉显微镜和解剖镜光源,清洗培养皿、烧杯、载玻片、盖玻片等玻璃器材,整齐晾于实验台上,经指导老师同意后离开。
实验室地面、超净工作台和水槽等处的卫生由班级统一安排(每次1个组,共5组),完成后请实验室管理员验收。
对于未履行职责的小组,多安排1次卫生清理任务。
三、学时分配:
共12个实验,每实验3学时,总计36学时,其中病虫部分30学时,啮齿类动物6学时。
四、时间安排:
共开设6周(第5周~第10周),每周6学时。
五、指导老师的职责:
实验操作讲解与示范。
六、实验辅助人员的职责:
实验准备、操作示范和学生管理。
实验一、草地植物病害症状观察(肉眼直接观察)
一、目的要求
植物病害症状是诊断植物病害的主要依据之一。
诊断病害是病害研究的最基本内容。
植物病害症状要根据病害的发生过程加以全面描述和记载。
认识植物病害的各种症状,为病害诊断打好基础。
二、仪器及用具
解剖镜、扩大镜、镊子
三、实验材料
苜蓿锈病、沙打旺白粉病、红豆草匐柄霉轮纹病(Onobrychisviciifola)、矮柱花草炭疽病(Colletotrichumtuifolii)、苏丹草云纹病(Rhynchosporiumsecalis)、赖草香柱病(Epichloetyphina)、老芒麦秆锈病(Pucciniagraminis)玉米大斑病、小麦根腐病、小麦秆锈病、小麦叶锈病、小麦黄矮病、小麦粒线虫
四、内容与方法
1、用肉眼观察各类植物病害的蜡叶标本,或在体视显微镜下或用放大镜观察,根据症状的特点,描述病害症状。
植物侵染性病害
植物真菌性病害标本(植物病害中90%为真菌性病害):
病状和病征:
所有植物病害均有病状,即植物的异常生长或叶、茎、花、穗、果等器官的变色、斑点、坏死、腐烂等。
真菌性病害也不例外,而且通常可见病征,即病原真菌本事。
病征是鉴定病害最可靠的依据,而病状没有特异性。
真菌性病害的典型病征为:
粉状物(白粉病的无性孢子、锈病的夏孢子堆和冬孢子堆)、霉状物(各类各色霉层)、颗粒状物(分生孢子器、菌核等)。
苜蓿霜霉病(Peronosporaastivalis)
苜蓿黑茎病(Cerosporadavisii)
苜蓿锈病(UromycesstriatusSchroot)
猫尾草霜霉病(Sclerophthoramacrospora)
猫尾草长蠕孢叶斑病(Helininthosporumsativum)
草木樨夏季黑茎病(Cercosporadavisii)
草木樨白粉病(Erysiphepolygoni)
红豆草匐柄霉轮纹病(Onobrychisviciifola)
老芒麦秆锈病(Pucciniagraminis)
矮柱花草炭疽病(Colletotrichumtuifolii)
苏丹草云纹病(Rhynchosporiumsecalis)
赖草香柱病(Epichloetyphina)
植物细菌性病害标本:
病征为菌脓、菌溢、菌痂,病状为萎蔫、叶斑等。
植物病毒病害标本:
无病征,病状为花叶、矮化、黄化等
寄生性种子植物:
病征即为寄生性种子植物本身,病状为:
寄主植物生长不良,叶片变黄
植物非侵染性病害(生理性病害):
缺素症、沤根、冻害等
害虫造成的为害称为害状,不属于病害,区别咀嚼式口器和刺吸式口器的害虫造成的害状。
人为和动物造成的伤害也不属于病害。
观察并掌握各种病害标本的病状类型的特点。
1、病状类型
1.1变色chlorosis,病毒病
1.2坏死necrosis,各类叶斑病
1.3腐烂rot,各类根腐病
1.4萎蔫wilt,沙打旺黄矮病
1.5畸形distoration,包括丛枝、矮化、徒长、肿瘤、叶片畸形
2、病征类型
2.1絮状物腐霉
2.2霉状物如青霉、灰霉、赤霉、霜霉等,主要有真菌的菌丝体和孢子梗组成。
霜霉病
2.3粉状物白粉病
2.4锈状物锈病、白锈病
2.5点粒状物白粉病的有性阶段闭囊壳、菌核、
2.6脓状物细菌性病害
2、植物病害的描述与记载常识
症状描述和记载根据:
发病部位、病斑大小、病斑颜色等。
采集的病害标本要压制成蜡叶标本,并注明:
寄主、病害名、病原、采集时间、采集地点、采集人等。
五、实验作业
分别列出5种病害的病征和病状
受害植物-寄主
病害名称
发病部位
症状类型
症状特点(病状,有病征则写出病征特点)
病害1
病害2
病害3
病害4
病害5
实验三准备:
实验接受后每组清洗培养皿30套、200~250ml三角瓶4个,晾于桌面,待下次使用。
实验辅助人员准备马铃薯3斤。
实验二、草地植物病原菌主要类群及其形态观察(借助显微镜观察)
了解植物病原真菌和病原细菌,以及线虫和寄生性种子植物种类。
重点观察植物病原真菌的形态特征。
显微镜、解剖镜、载玻片、盖玻片、蒸馏水、解剖刀、扩大镜、镊子、纱布、单面刀片及记载用具
1真菌性病害:
1.1霜霉病:
16猫尾草霜霉病、25小麦霜霉病、39黄瓜霜霉病、大豆霜霉病、马铃薯晚疫病、甘蓝霜霉病、萝卜白锈病、莴苣霜霉病
1.2子囊菌病害:
6沙打旺白粉病、34梨树白粉病、35苹果白粉病、41黄瓜白粉病、小麦全蚀病
1.3担子菌病害:
2披碱草黑穗病、17玉米丝黑穗、玉米瘤黑粉病、谷子黑穗病、高梁散黑穗病、高梁坚黑穗病、20小麦散黑穗病、21小麦秆黑粉病、22玉米黑粉病、23燕麦坚黑穗病、12苜蓿锈病、15老芒麦秆锈病(Pucciniagraminis)、19小麦秆锈病、50小麦叶锈病、小麦条锈病
1.4半知菌病害:
1草木樨夏季黑茎病、3矮柱花草炭疽病(Colletotrichumtuifolii)、4苏丹草云纹病(Rhynchosporiumsecalis)、5赖草香柱病(Epichloetyphina)、7蚕豆赤斑病、8猫尾草长蠕孢病害、9蚕豆轮纹病、10蚕豆褐斑病、11红豆草匍柄霉轮纹病、14苜蓿黑茎病18玉米小斑病、24小麦黄矮病、26小麦根腐病、27莴苣霜霉病、28谷子白发病、29莴苣锈病、30赖草褐斑病、31高梁坚黑穗病、32杨树白粉病、33苹果腐烂病、37苹果褐斑病、40番茄叶霉病、42西葫芦黄萎病、43茄子早疫病、44芹菜斑枯病、45甜菜褐斑病、46番茄早疫病、49玉米大斑病、51红豆草轮纹病(Onobrychisviciifola)、
2细菌性病害:
47柑桔溃疡病、玉米茎基腐病
3病毒性病害:
36苹果花叶病、38辣椒花叶病、玉米病毒病、大豆花叶病
4线虫病:
48小麦粒线虫、
5寄生性种子植物:
13苜蓿菟丝子、
做水装片,观察以下病害的病原特征
1黑粉菌的观察-高龄黑穗病
2锈菌的观察-小麦锈病,蚕豆锈病
3白粉菌的观察-梨白粉病
4霜霉菌的观察-黄瓜霜霉病,莴苣霜霉病
5半知菌的观察-芹菜斑枯病(分生孢子器)、番茄早疫病(分生孢子丛)
6子囊菌的观察-白粉病的有性阶段
6线虫的观察-小麦粒线虫
7寄生性种子植物的观察-苜蓿菟丝子
8细菌菌落和形态观察
绘出5种真菌性病害的病原特征图
实验开始时同时准备下次实验,每组派2名同学,全班制作PDA培养基3000ml,准备无灭菌水2000ml。
实验三、真菌和细菌的分离、培养和鉴定(病理学研究方法)
通过对某些植物病原菌的分离培养的实验操作,初步学会一般的植病技术,为进一步鉴定病原,从事植物病理研究和生产微生物农药打基础。
1灭菌室、超净工作台、培养箱、电炉、天平、烧杯、量筒、培养皿、高压灭菌器、试管、三角瓶、漏斗、接种针、接种环、解剖刀、镊子、解剖剪、载玻片、盖玻片、挑针、纱布、瓶塞用的棉花、玻璃铅笔、酒精灯、滴管、滤纸
2马铃薯、琼脂、牛肉浸膏、蛋白胨、葡萄糖或蔗糖
3酒精、蒸馏水、升汞或漂白粉
4分离用的真菌和细菌病害标本,供接种试验用的盆栽幼苗、菌种和病菌孢子粉、滑石粉
真菌性病害-九转梅枝枯病(立枯丝核菌Rhzoctoniasolania)(新鲜标本)
沙打旺黄矮根腐病侵染的茎秆(沙打旺埃里砖格孢Embellisiaastragali)(腊叶标本)
红豆草黑秆病(校园采集的新鲜标本)
葱紫斑病(链格孢Alternariaalternata)(腊叶标本)
细菌性病害-黄瓜细菌性角斑病(细菌)(腊叶标本)
种子分离-沙打旺种子(多种种带真菌)
1玻璃器皿洗涤与灭菌
2载玻片、盖玻片的洗涤
3培养基的配制
3.1培养真菌常用的PDA配方:
马铃薯200g削皮切成小块,加水1000ml,煮沸30min,纱布过滤
加葡萄糖20g,琼脂17~20g,加足水总量至1000ml
分装在三角瓶试管中封口灭菌(121℃,30min)
分装在培养皿中,每皿10ml
3.2培养细菌常用的牛肉汁蛋白胨培养基配方:
牛肉浸膏5g蛋白胨5~10g食盐5g溶于1000ml水中
调节酸碱度到中性
加琼脂17~20g,融化后分装在试管或三角瓶中灭菌
分装在培养皿中
3.3分离培养
组织分离法(分离真菌常用方法)
病原材料的选择(非专性寄生菌,病健交接处)
组织表面消毒(70%酒精数秒,1%的NaClO2~5分钟,无菌水冲洗3~4遍)
用滤纸吸干无菌水
切成小块(2~3mm的组织块每皿5块)
置培养皿中,22~25度下的培养箱中培养
稀释划线分离法(分离细菌常用方法)
1ml的培养皿中加入1接种环从病组织中挤压出的细菌悬浮液,先用接种环蘸菌液在培养皿中划平行的5条线,再与此5条线垂直