液体活检技术比较Word文档下载推荐.docx

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⚫标本获取容易；

⚫检测周期短、价格低、连续性好；

⚫覆盖病种多，能监测多种癌症；

基于尿液、唾液、脑脊液的肿瘤液体活检仅适用于某一类或某一种癌症，在此不再赘述。

而传统的基于外周血蛋白类标志物，如前列腺特异抗原PSA、癌胚抗原CEA、甲胎蛋白AFP、糖蛋白CA等，同样只能检测一种或少数几种癌症，而且与肿瘤负荷的相关度低，不能在症状出现前对肿瘤发病、转移、复发做出预警，因此不能满足肿瘤负荷监控的需求。

本节主要比较基于外周血的循环肿瘤细胞（CTCCTCs）、循环肿瘤DNA（ct-DNA）和游离DNA（cf-DNA）三种新型热门外周血肿瘤标志物，分析它们用于评估肿瘤负的优势和不足。

1、循环肿瘤细胞（circulatingtumorcell，CTCCTCs）：

是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。

随着实体肿瘤的生长，在病灶周围微环境发生特定变化时，将促使一部分肿瘤细胞获得异常的活动能力，这些细胞从原发肿瘤上脱落，搭乘血液系统或淋巴系统去往身体各处，在身体里寻找新的落脚点。

这些搭乘血液、淋巴快线的脱落肿瘤细胞就被称为循环肿瘤细胞（CTCs），同时也包含侵袭、手术操作等外部因素导致的进入血液循环的肿瘤细胞。

它CTC

CTCs以不同形态存在于外周血中，既有游离的单个CTC，也有聚集成团的细胞团。

早在1869年，Ashworth就在肿瘤患者的血液中发现了肿瘤细胞的存在。

但由于肿瘤患者血液中的CTCs数目极少（5-10ml外周血中CTCs数量级仅为个位数），直到最近十五年细胞捕获技术取得突破进展后，CTCs才成为研究热点。

2012年，来自武汉同济的Zhang研究团队对1990年1月至2012年1月所有CTCs与肿瘤预后相关的文章进行荟萃分析，结果显示CTCs检测可用于早期和转移性乳腺癌患者的预后判断。

Nole等研究显示，治疗前CTCs数目超出5/7.5ml的转移性乳腺癌患者，约一半患者的CTCs数目可在治疗中降低。

若CTCs数目无变化或增高，则可能暗示治疗的无效或失败，提示临床医生对患者的治疗进行早期干预。

以上研究证实，对外周血中的CTCs进行计数评估肿瘤负荷具有一定的临床价值。

这一策略的关键在于如何有效、精准捕获CTCs并正确判断获取的信号。

目前常用的CTCs获取方法大多是根据其生物学特性或者物理学特性进行捕获，然而，由于外周血中存在一定量未被认知的肿瘤细胞、CTCs细胞表面缺乏足够有效的标志物、数量稀少、形态大小不均一、细胞类型不单一等等因素的存在，现有的技术不仅对CTCs捕获准确率不足，而且缺乏生物学活性的评价作为质控标准。

因此，CTCs计数结果对于评估肿瘤负荷,判断疗效和预后都明显不可靠。

CTCs是具有活性的细胞，生物特性最接近于实体肿瘤，其最大价值和研究方向在于药物伴随检测，指导临床用药。

现有捕获和计数技术的局限性使得CTCs现阶段不适合作为肿瘤负荷监测的理想标靶。

2、循环肿瘤DNA（circulatingtumorDNA，ct-DNA）：

指坏死或凋亡的肿瘤细胞释放到外周血中的肿瘤DNA片段，其带有肿瘤特异性突变或表观遗传学改变。

从概念上可看出，它被包含在游离DNA（cf-DNA）当中，是肿瘤患者cf-DNA中的一部分。

从ct-DNA被发现至今，研究人员不断探索和评估其在肿瘤负荷方面的价值。

2007年，Shinozaki等6研究者们在不同分级分期的黑色素瘤患者中检测血清B-RAF基因突变（V600E），结果显示血清中突变B-RAF的含量可反映疗效，且B-RAF的突变状态与患者总生存率密切相关。

这是第一篇关于ct-DNA突变检测在肿瘤临床疗效监测中的意义的报道。

随后，关于ct-DNA甲基化与肿瘤诊断和预后判断7；

ct-DNA微卫星的改变与肿瘤进展、转移复发的关系8；

ct-DNA基因突变与肿瘤疗效评估和转移复发监测9的研究层出不穷。

因ct-DNA具有肿瘤特异性突变或表观遗传学改变，其获取通常需要预先对手术切除的肿瘤组织进行测序，或者直接对游离DNA（cf-DNA）做肿瘤基因组大范围捕获测序，以确认ct-DNA的存在及含量。

基因检测测序技术百花齐放，以聚合酶链式反应（PCR）为核心技术的检测方法仅能检测已知突变位点，灵敏度高，但对未知突变不可检出，若采用该方法通过ct-DNA含量去评估肿瘤负荷，势必将漏检掉未知突变对肿瘤负荷的影响。

以高通量测序为核心技术的方法可以获取血液中全部的游离DNA（cf-DNA）序列信息，筛选出更多未知的突变ct-DNA并获取含量，但是其其灵敏度不及PCR方法，并且而且随着测序深度增加，灵敏度不断下降，检测成本也急速增加。

因此，受灵敏度和测序深度影响，高通量检测ct-DNA该方法检测作为应用于动态监控肿瘤负荷的动态监控的临床一致性将受限。

，同时昂贵的高通量测序成本也让患者难以接受。

ct-DNA目前最成熟的应用是在通过对已知位点的检测，筛选出有效的靶向治疗药物，也可通过深度测序寻找出未知突变位点，从而筛选更新的靶向治疗药物。

3、游离DNA（circulating-freecellDNA，cf-DNA）：

又称循环DNA或无细胞DNA，是指存在于血浆或血清的细胞外DNA。

早在1948年，Mandel等首次在人类血液中检测到游离DNA的存在，但当时并没有引起科学界的关注。

1977年，Leon等10首先报道肿瘤患者外周血中存在较高水平的游离DNA，随后众多学者研究了肿瘤患者血液循环中的游离DNA。

关于cf-DNA与肿瘤负荷的关系，及其在肿瘤负荷监控的应用，后续章节将予以详细介绍。

以上便是对当前3种最热门的液体活检标靶应用于肿瘤负荷监控方面的简单介绍。

CTCCTCs是存在于肿瘤患者血液中完整的肿瘤细胞，其临床价值与研究方向在于药物伴随治疗。

目前，若应用于肿瘤负荷监控受限于细胞的捕获技术，临床一致性不足，参考意义一般。

ct-DNA/cf-DNA是血清或血浆中的游离DNA，其检测无需捕获或富集步骤，在现有技术条件下，评估肿瘤负荷的可靠性优于CTCCTCs。

ct-DNA需要测序获取，未知突变基因直接影响到检测结果与临床的一致性。

cf-DNA只需进行整体定量检测，不论已知突变与未知突变的有多少含量，其总量的变化即可反应出全身所有病灶的平均水平，更能反映肿瘤负荷的整体状况，是肿瘤负荷监控的理想最佳标靶。