树突细胞联合IL-2对肝癌治疗作用的研究Word下载.doc
《树突细胞联合IL-2对肝癌治疗作用的研究Word下载.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《树突细胞联合IL-2对肝癌治疗作用的研究Word下载.doc（7页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
技
项
目（课题）
名称
研究领域
生物与医药
国民经济行业
卫生
课题代码
关键词
树突状细胞；
IL-2；
肝癌
起止年月
2012.1-2013.12
申请金额
负
责
人
姓名
钟秋明
性别
男
出生年月
7
6
年
9
月
技术职务
主管药师
单位
赣南医学院第一附属医院
专业
药学
特长
临床药学
课情
题
组况
总人数
高级
中级
初级
研究生
辅助人员
2
3
1
承担单位数
协作单位数
协作人员数
主
要
研
究
内
容
和
意
义
摘
许多肿瘤细胞为弱免疫原性，呈现MHC分子与共刺激分子的表达低下或缺如，使肿瘤抗原不能得到有效提呈，不能激活体内特异性的杀伤机制，诱导机体有效的抗肿瘤免疫应答。
肿瘤细胞经福尔马林固定后其抗原性和免疫原性得以保留，致癌性大为减弱，与树突细胞（dendriticcell，DC）共孵育后可有效提呈抗原。
IL-2是体内功能最强的淋巴细胞增殖因子，它被认为是最有效的具有抗肿瘤作用的细胞因子。
两者联合可激发体内抗肿瘤免疫反应，抑制肿瘤生长。
本研究通过建立小鼠H22细胞皮下移植瘤模型,应用IL-2和DC对其进行免疫治疗，以观察其联合作用时的抗肿瘤效应。
此项研究对肿瘤治疗，有极大的经济效益和社会效益。
预
期
成
果
水
平
表
达
形
式
预期成果水平：
预期结果：
B组试验动物肿瘤生长速度最慢，生存期最长，抑瘤率明显。
体外试验表明致敏DC联合IL-2组与其他组相比，具有更强的激发T细胞增殖能力，且B组的CTL表现出很强的杀伤自体肝癌细胞的细胞毒活性。
在动物整体水平阐明DC细胞联合IL-2对肝癌的治疗作用。
表达形式：
发表核心期刊论文1-2篇，培养1名科技骨干。
你单位申请的项目（课题）已列入赣州市科技局年指导性科技计划，项目（课题）应在二O年月前完成。
请你们按计划要求组织实施。
项目（课题）完成后按计划任务（合同）书的指标进行鉴定，验收。
年月日
一、项目（课题）的科学价值及成果水平，表达形式：
许多肿瘤细胞为弱免疫原性，呈现MHC分子与共刺激分子的表达低下或缺如，使肿瘤抗原不能得到有效提呈，不能激活体内特异性的杀伤机制，诱导机体有效的抗肿瘤免疫应答。
通过本试验研究，预计B组试验动物肿瘤生长速度最慢，生存期最长，抑瘤率明显。
在2年的研究周期中，在动物整体水平阐明DC细胞联合IL-2对肝癌的治疗作用。
在国内发表核心期刊论文1-2篇，培养1名科技骨干。
二、项目（课题）计划进度：
起止年月
计划要求
2012年1月-2012年6月：
1）订购试验用的细胞株、药品、试剂和小鼠。
2）分离DC并制备肿瘤抗原冲击致敏的DC。
2012年7月-2012年12月：
1）建立小鼠肝癌皮下移植瘤模型。
2）对实验动物进行治疗，绘制肿瘤生长曲线及抑瘤率。
2013年1月-2013年6月：
进行体外试验，验证相关试验数据。
2013年7月-2013年12月：
全部试验数据的统计分析，撰写论文。
三、项目（课题）主要经济技术指标、社会效益：
（一）经济指标：
（二）技术指标：
（1）DC的体外培养：
将环磷酰胺按200mg/kg体质量由小鼠尾静脉注射，8d后颈椎脱位处死小鼠，750ml/L乙醇浸泡10min，无菌条件下用镊子取出脾脏移入放在平皿的100目钼钢网上，剔除脾周围的结缔组织，剪碎研磨后收集滤过的细胞悬液，离心800r/min，7min，加Tris-NH4Cl3ml，溶除红细胞，获取细胞悬液，以完全培养基悬浮为1×
109/L细胞，37℃，50mL/LCO2孵箱培养。
3d后，吸弃全部培养基及悬浮细胞，加GM-CSF和IFN-γ条件培养基，3d后半量换液并补加等量的条件培养基，第7天吹打下疏松贴壁的增殖性细胞聚集体，次日收集悬浮细胞即为富集的DC。
（2）肿瘤抗原的制备：
取对数生长期的H22细胞以福尔马林固定2小时，并分别用70%酒精和磷酸盐缓冲液（phosphatebufferedsaline，PBS）洗涤离心两次，转速为1000转/分．弃上清，沉淀用RPMI1640重悬后，放置于细胞培养箱内以除去残余的福尔马林，以免干扰试验结果。
48h后离心，弃上清，沉淀用PBS重悬并调整细胞浓度至106/mL，储存于无菌EP管内备用。
（3）制备肿瘤抗原冲击致敏的DC：
在DC培养的第7天加入按上述方法制备的肿瘤抗原，两者共孵育24小时后收集DC，即为肝癌抗原冲击致敏的DC。
（4）荷瘤小鼠治疗方案：
H22荷瘤小鼠模型构建成功后，对瘤体进行注射试验，观察肿瘤生长的影响。
试验分4组每组10只小鼠。
A：
生理盐水组；
B：
致敏DC＋IL-2联合治疗组；
C：
DC组；
D：
IL-2组，各组试验动物一周注射2两次，共注射四次，隔日用游标卡尺测量肿瘤直径，至试验结束。
（5）体内体外抗肿瘤作用的检测：
绘制荷瘤小鼠皮下瘤生长曲线。
两周后处死动物，称瘤重，绘制肿瘤生长曲线，按公式：
抑瘤率＝〔1－（治疗组开始平均瘤体积－治疗组结束平均瘤体积）／对照组开始平均瘤体积〕×
100％计算结果。
体外检测抗原致敏DC刺激自体T细胞增殖的能力，DC刺激自体T细胞增殖分化为CTL的能力。
技术线路表
（三）社会效益：
目前肿瘤疫苗种类多样，基本点还是建立在增强疫苗原性，最大限度地提高机体主动免疫功能，从而达到杀伤肿瘤细胞目的。
以DC为基础的肿瘤疫苗能激活免疫系统产生主动免疫，可以预见肝癌疫苗在不远的将来能成为肝癌治疗的重要手段之一。
四、项目（课题）的承担单位、协作单位及主要研究人员：
协作单位：
无
项目（课题）负责人：
姓名
年龄
业务专业
为本课题
工作时间
（%）
在课题中分担的任务
所在单位
35岁
40
课题负责人
主要研究人员：
刘瑶
女
30
主治医师
临床医学
动物试验
曾小斌
35
主管护士
护理
8
数据记录整理
钟星明
45
副主任药师
试验药品准备
王祥才
43
副主任医师
试验仪器、动物准备
吴先群
29
助教
高教
资料收集整理
各单位分工：
五、共同条款：
1、在计划项目（课题）实施期间。
承担单位（乙方）须每半年向赣州市科技局（甲方）提交项目（课题）进展情况报告，填报科技计划统计报表。
2、在计划项目（课题）实施过程中，如需修改本计划任务（合同）书中某项内容，乙方须先提出书面报告，由甲乙双方共同商定，并由甲乙方通知课题承担单位主管部门（丙方）。
3、项目（课题）完成后，乙方须按本计划任务（合同）书规定的内容将项目（课题）实施的总报告、完整的技术资料于鉴定前一个月报送甲方有关业务科审查。
4、课题鉴定按《科技部科技成果鉴定办法》执行。
5、凡因不可抗力不能履行规定的义务时，应及时通知有关方面。
经调查核实后决定继续、中止、总结等处理办法。
6、本计划任务（合同）书一式二份。
7、其他条款：
六、有关各方：
赣州市科技局（甲方）：
（盖章）
年月日
承担单位（乙方）：
课题负责人：
法人代表：
（盖章）
年月日
保证单位（丙方）：
（盖章）
年月日
升级会员 