犬猫贫血的实验室诊断Word文档下载推荐.docx
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红细胞压积(PCV)是指红细胞总数(RBCs)所占全血中的体积比。
PCV测量:
通过离心微量红细胞压积管后,人工判读数据,并记录为占血液总量百分比。
血细胞压积(HcT)通过自动血液分析仪在细胞大小和数量的基础上判定。
红细胞总数可使用自动化仪器,或血细胞计数器在镜下计数来获得,用RBC×
1012/l表示。
血液中的血红蛋白(Hb)含量同样也可以使用自动化仪器判定,记录为g/dl。
Hb(血红蛋白)的含量测定受血液样本中存在脂血症、红细胞溶解症或胆红素血的影响。
一个检验结果精确性的简单方法:
3×
Hb=Ht(血细胞压积)。
检测到的数值要参照“正常围值”来比较,但要明确“正常围值”并不适用于所有情况。
举例来说,初生或者怀孕动物可能会呈现数值偏差,并且某些动物也存在品种效应(例如,视觉猎犬(sighthounds)就呈现高PCV值和低嗜中性粒细胞计数)。
PCV,RBC计数和HB都反映了红细胞质量,并且这三个参数之间通常具有相关性,所以简单的测定PCV值即是一个良好的临床指征。
PCV值通常被用于描述贫血的严重程度。
犬PCV近似参考值:
轻度贫血30-36%,中度贫血18-29%,重度贫血<
18%。
猫PCV近似参考值:
轻度贫血20-24%,中度贫血15-19%,重度贫血<
14%。
红细胞指数
红细胞指数由红细胞的各项参数计算得出,它有效提供了红细胞的大小和血红蛋白浓度的数据。
平均红细胞容积(MCV)表示单个红细胞的体积,
MCV计算公式:
PCV×
10
RBC×
1012/l
MCV记录单位是“毫微微升”(fl),当其数值上升时,预示“大红细胞症”,其数值下降时,预示“小红细胞症”。
当血液样本被冷藏或邮寄至实验室时,MCV数值可能会被人为升高。
大红细胞症也见于再生性贫血反应、叶酸缺乏、造血功能异常和部分FeLV(猫白血病病毒)感染病例。
小红细胞症是某些犬种(如日本秋田犬,沙皮犬,柴犬)的正常现象,也可能是缺铁反应或肝门静脉短路症。
平均红细胞血红蛋白含量(MCH)是指单个红细胞中所含的血红蛋白量,单位是皮克(pg)。
MCH计算公式:
Hb×
10
MCH值上升时,预示红细胞着色加深;
其值下降时,预示红细胞着色变浅(最常见的原因是铁元素缺乏)。
平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)指血红蛋白在总红细胞数量中所占的百分比(单位g/dl),
MCHC计算公式:
100
PCV
仅当MCHC值下降时才具有临床意义,因为在生理学中并不存在MCHC值升高的现象。
MCH值升高的原因是与红细胞破裂、脂血症或出现海因茨小体有关的人为因素。
血涂片
制备一优质血涂片对于贫血的诊断非常有必要。
通常将一滴用EDTA处理的血液滴在载玻片上,用另一块载玻片连续而流畅地向前推动,涂片的尾部会出现“羽毛状的边缘”。
血涂片经空气干燥后用diff-quik染色。
在血涂片的羽毛状尾部,血细胞呈单层分布,这个区域适合在低倍和高倍镜下进行系统观测。
所有细胞谱都应被评定。
红细胞形态学
正常的红细胞呈“两面凹陷的圆盘状”,中间为浅着色区。
犬红细胞直径大约为7mm,猫红细胞直径稍小(6mm)。
临床上可观察到一系列红细胞形态学变化,在评估血涂片的基础上对此鉴别很重要,因为它们提供了必要的诊断信息。
钱串红细胞
在纤维蛋白原浓度升高或球蛋白变性的高蛋白血浆中,红细胞常常堆砌在一起,形如一串钱币。
这种现象在马的血液中属正常,在猫的血液中偶见。
在犬上,钱串红细胞通常发生在炎症或肿瘤疾病中。
在红细胞凝集(见下文)的情况下,鉴别钱串红细胞的结构很重要。
红细胞凝集
红细胞凝集指红细胞的聚集(葡萄串状),这种情况也许可在EDTA处理的抗凝血中肉眼可见或通过镜检发现。
红细胞凝集由抗体(通常为IgM)介导,并且强有力的指示了免疫介导的溶血性贫血。
红细胞大小不均等症
红细胞大小不均等症简单说来就是出现了红细胞大小不一的变化,正常血细胞中混有大红细胞或小红细胞。
大红细胞通常呈多染色性,并且可能属于网织红细胞。
小红细胞是缺铁性贫血的特征,在球形红细胞症中(见下文),红细胞也比正常时小。
红细胞多染色性
红细胞多染色性是指红细胞染色性质的变异,通常出现浅蓝色的染色特征。
这些细胞通常为大红细胞,并且可能是网织红细胞。
红细胞多染色性伴随MCV值上升时,强烈提示再生性贫血反应。
红细胞低染
红细胞低染在镜下可见到红细胞中央的浅着色区扩大,这正如缺铁性贫血中可见的血红蛋白浓度降低。
异形红细胞症
异形红细胞症简单说来就是红细胞的形状发生了异常变化。
球形红细胞症
球形红细胞指小而圆,深染且中央浅着色区消失的红细胞。
球形红细胞是被部分吞噬的红细胞:
被抗体(和补体)结合的红细胞通过肝脏或脾脏时,附近的吞噬细胞移除了一部分的红细胞膜。
红细胞能“自我修复”,并且继续以体积变小的红细胞存在于循环血液当中。
球形红细胞指示抗体的出现,但是却不能辨别免疫介导性溶血症是原发性,或是继发性。
偶尔情况下,球形红细胞可能形成于非免疫介导性血管疾病。
同时,球形红细胞在犬上易见。
但猫的红细胞正常时体积偏小,所以不能确实分辨球形细胞。
裂红细胞
裂红细胞是伴随着红细胞外伤性裂解产生的细胞碎片。
这种情况等同于出现了血管阻塞(例如寄生虫或血栓),这通常也是犬脾脏血管肉瘤的临床特征。
裂红细胞也可见于血管弥漫性凝血(DIC)、充血性心力衰竭、淋巴瘤或肾小球性肾炎的情况。
棘红细胞
棘红细胞表示红细胞表面不同位置出现不同长度的突起。
棘红细胞可能形成于红细胞膜的胆固醇或磷脂异常,也可能是红细胞的机械性损伤(例如DIC或血管肉瘤),偶见于淋巴瘤、肝脏疾病、脾功能亢进或肾小球性肾炎。
锯齿状红细胞
锯齿状红细胞表示红细胞表面出现大面积短而平滑的突起。
通常是人为因素导致,预示EDTA过量(当采血量没有达到采血管的标注容量时),但也偶见于新代谢异常(例如丙酮激酸酶缺乏)或肾脏疾病。
嗜碱性彩斑
嗜碱性彩斑指示有RNA的残留物,在牛的血液中属正常,偶见于猫的贫血病例。
这也是犬铅中毒的特征(铅通过破坏亚铁血红素和球蛋白合成,从而妨碍红细胞生成)
豪威尔氏体
豪威尔氏体是细胞核的残留物,在正常的猫血液中可见,或见于对贫血的应答反应中。
豪威尔氏体也可在脾切除的动物血液中见到。
海因茨小体
海因茨小体是出现在红细胞膜表面的变性血红蛋白聚集物,最佳观测方式是配合使用活体染色剂观察(Leishman’s染色或新亚甲基蓝染色)。
正常猫血液中大约有5-10%的红细胞含有海因茨小体。
当发生严重的氧化损伤时,可能会出现相关的偏心细胞。
有核红细胞
有核红细胞并不存于正常血液中,但在再生障碍性贫血中常见,随着对红细胞需求的增加,可从髓或髓外的造血机制中被释放出来。
轻度骨髓基质损伤时也可能允许释放有核红细胞。
健康的小型雪纳瑞犬和腊肠犬的循环血液中也可见一些有核红细胞。
红细胞寄生虫
在血涂片检查中,可能发现一系列红细胞相关的病原生物。
在高寄生虫血症时,大体型犬巴贝斯虫尤其容易被发现。
小体型犬巴贝斯虫和表面支原体(血液支原体)通常难以发现,PCR实验对确诊此类感染具有高度敏感性。
血小板评估
血涂片用于血小板评估比较准确,因为大部分的自动仪器会对血小板凝集效应的计数不准。
在血涂片中(通常在边缘部分)可见血小板凝集,这也预示着假性机器低读数。
猫的红细胞与血小板在体积上相似,这也加大了机器读数的误差。
血小板减少症需要用血涂片计算平均血小板值来判定:
在100倍镜下(油镜头,即最终放大率为1000倍),取10个视野计数的平均值。
猫:
平均血小板值×
20=血小板数×
109/l
犬:
15=血小板数×
109/l
白细胞评估
血涂片常用于手工白细胞分类计数,通过测定一定数目白细胞的各谱系细胞百分比来确定。
通过血液分析仪或用血细胞计数板手工计数后,各白细胞百分比数值需转化为绝对值来表示结果(×
109/l)。
白细胞计数近似值,也可以通过镜下评估血涂片得出。
平均白细胞计数方法:
40倍物镜下,取10个视野中的平均计数值(即在10倍目镜下获得400倍的放大率),乘以1500,等于白细胞数×
109/l。
白细胞形态学异常也要检查,同时要评估杆状或早期粒细胞所占比例。
白细胞中的中毒颗粒物和空泡,以及非典型单核细胞的出现,这些也要熟悉判定。
网织红细胞计数
网织红细胞计数对确诊再生性贫血反应是最为准确的。
在犬猫临床上,网织红细胞过多症与红细胞多染性存在普遍关联。
网织红细胞仅能够通过活体染色法(例如新甲基蓝或亮甲酚蓝)来辨别,这时聚集的核糖体RNA显露。
网织红细胞在形态学上分集结状或点状。
犬仅存在集结状网织红细胞,但猫二者都有。
在犬上,网织红细胞百分比(在红细胞中)需要表示为绝对值(×
网织红细胞计数>
60×
109/l是再生性贫血反应的象征,>
400×
109/表示显著的再生。
作为另外一个选择,网织红细胞生成指数(RPI)也可能需要确定。
RPI对“校正”贫血程度的评估和网织红细胞寿命有重要价值。
1)贫血程度校正
校正值%(或计数值)=绝对值%(或计数值)×
PCV值/正常PCV值(45)
2)网织红细胞寿命校正
RPI=校正值%×
1/血液成熟时间
血液成熟时间取决于PCV值:
PCV45%1天
35%1.5天
25%2天
15%2.5天
RPI>
2.5时,表示再生性贫血反应。
猫集结状网织红细胞最初从骨髓中被释放,在经过10-12天的成熟期后,转变为点状网织红细胞。
相比之下,点状网织红细胞在循环血液中出现需要3-4周。
在猫上,集结状网织红细胞计数可判定再生性贫血,它反映骨髓再生活跃程度,而点状红细胞计数代表累积再生贫血。
集结状红细胞计数>
40×
109/l表示再生性贫血,>
200×
109/l时表示显著再生性贫血。
骨髓评估
对于非再生性贫血的病例,骨髓评估是诊断过程的一个重要步骤。
可能需要采集两种样本:
抽取骨髓容物或用骨髓针穿刺活检。
前一种样本给临床病理学专家分析,而后一种样本给组织病理学专家分析。
骨髓穿刺针的优点是病理组织可得到更好的评估,但要获得优质的穿刺活检物却具有挑战性。
将穿刺活检物放入福尔马林溶液固定之前先做压片。
通常在股骨干骨(猫)或髂骨嵴(犬)来获得样本。
在大型犬,肋骨或胸骨节是骨髓抽取的备用位置。
抽取的骨髓样本应放入EDTA或ACD(可从采血袋中获得)抗凝血剂中保存,同时至少要制备10压片,迅速空气干燥后染色。
主要的谱系细胞应该按照成熟程度、所占的相对比例、粒细胞和红细胞比例的顺序依次确定。
同时应该检测异常细胞(肿瘤细胞)。
LECTURE2.LABORATORYDIAGNOSISOFANAEMIA
INTRODUCTION
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