行为学具体标准操作方法及注意事项Word格式.docx

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⑤当实验开始时，提前分离CD1雌鼠，取挫败组C57小鼠一只，直接放入陌生CD1雄性小鼠（8-9周）饲养笼中，使C57小鼠遭受雄性CD1小鼠持续性攻击约5-10mino

⑥然后将两只小鼠用带有密集小孔的透明塑料隔板隔开，使两只小鼠彼此仍能互视和闻嗅但是无法接触，运用这种方法持续到下次进行攻击前为止，完成该过程后即为第一天应激。

⑦第二天再将该C57鼠放入另一不同的CD1雄性鼠的笼中，使C57小鼠受到相同程度的应激；

第三天再放入到第三只CD1雄性鼠的笼中，同样使C57小鼠受到同样程度的应激。

如此连续应激10天，并保证每天同一只C57小鼠受到不同CD1雄性鼠的攻击。

在此期间，对照组和挫败组C57小鼠均维持正常饮食饮水，而对照组则保持2只一笼，每天相互更换接触不同的小鼠⑵。

⑧10天连续应激结束后即开始行为学测试。

最初的社会挫败模型是由Tornatzky和Miczek于1993年在大鼠中建立的。

模型建立过程如下：

选取一批月龄、体重均较大的雄性啮齿动物为居住者，即攻击者，使其能在斗争中占主导地位。

因体重和月龄的差异，二者存在从属关系，居住者会对入侵者进行攻击，当入侵者出现顺从、投降姿势、发出痛苦的叫声时，直到攻击过程结束⑶。

然后将入侵者放入带孔、透明的保护笼中，再置于居住者笼中，此过程允许存在嗅觉、视觉、触觉接触，但无直接接触。

而上述两攻击鼠对实验鼠攻击的两个过程进行的时间随着实验方式及实验动物的改变而进行调整。

与其他应激一样，社会挫败同样能引起动物长期的行为学改变。

当进行2-4d连续的社会挫败应激，大鼠自发活动和探索行为显著性降低心］,攻击性和性需求减弱，更易于屈服和焦虑⑹。

而且，如果进行更多天数的社会挫败，会导致一系列的抑郁相关行为改变⑺o

二、糖水偏好实验（Sucroseintaketest）:

①1%糖水和清水适应三天，一天半的时候将糖水和清水互换位置，以防C57小鼠产生位置差异。

②禁食禁水一天，并提前配制好1%糖水和清水。

③测糖水和清水的初质量，并给C57小鼠上糖水、清水和鼠粮。

④24小时后，测量糖水和清水的剩质量，计算出糖水消耗量A（g）和清水消耗量B（g）,利用公式A/（A+B）*100%,即得到糖水偏好率。

注意事项：

1、测量时一定要将瓶表面残留的水擦干净，为了测量，应在糖水实验前一天准备好糖水和清水，并将瓶分开放，以便瓶表面的水份蒸发。

2、给小鼠上糖水喝清水时，应注意动作要轻要慢，尽可能地减少误差，避免糖水和清水漏出。

糖水偏好测试是检测抑郁症快感缺失的经典方法。

另有文献测试前采用每12h将糖水和白水互换位置的方式来防止C57模型鼠产生位置偏好，消耗量采用lh来计算糖水偏好率⑴，也有采用2小时的闾。

此外也有同时采用2瓶饮用水，供其选择性饮用，适应2d后，再换成2瓶1%的蔗糖溶液，同样再选择性地适应2d的方式⑼。

糖水摄入量或偏好指数的降低表示动物出现快感缺乏状态，糖水偏好率的值与动物的快感程度呈正相关，其值越小则表明动物快感缺失越严重。

三、旷场实验（Openfieldtest）:

①实验在安静的环境下进行，将小鼠置于（44*44cin）的旷场中心处。

②同时进行摄影（5分半）和计时，前30s为小鼠适应阶段，后5分钟记录小鼠的站立次数、排便颗粒数、梳毛次数（双前脚梳毛为准），并收集每只小鼠的大便，放至冰块处保存（若没有大便，采用人工按压腹部的方法）。

③测完一只后，用酒精清洗旷场箱的内壁及底面，以免上次动物余留的信息（大小便、气味等）影响下次的测试。

1、若小鼠数量较多，可考虑同时用两个或四个箱子。

2、最终要分析5niiri内的相关数据，加上前期的30s适应时间和放小鼠的时间，所以每只小鼠要录5分半以上。

3、放小鼠时要将小鼠轻轻放在箱子的中央位置。

4、做完一只小鼠后，要用沾有酒精的抹布擦拭箱子的底部，小鼠停留较久的区域要着重擦拭,以去除上一只小鼠气味对后一只小鼠的影响。

5、取放小鼠时动作幅度要小，避免碰到摄像头。

旷箱的大小我们采用的是（44*44cm）,但也有文献报道采用42cm*42cm*25cm的旷场箱子⑼和50*50*50cni的旷场箱子听。

徐东宝等人网采用记录小鼠5min内的行为变化，包括垂直运动（两前爪腾空或攀附墙壁）嗅探（连续嗅闻2s以上）水平运动（身体一半以上进入另一格）次数来研究单纯心理应激动物实验的模型,并在实验完成后找3名对实验设计不熟悉的人员进行评分，求平均值。

四、社会接触实验（Socialinteractiontest）[1]：

①打开软件和摄像头后将实验笼放置到合适的位置，并不断地调整保证充分的视角，最后进行软件的设置。

②交互区域内放置一个10.4cm*6.6cm*18.1cm的布满小孔的塑料透明小盒，盒内不放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后开始计时，时间设定为

2.5min,最后得到接触区和非接触区的累积时间，此阶段为Targetabsento

③间隔30s后，放入陌生的CD1小鼠，然后放入C57小鼠，然后开始计时，时间设定为2.5min,最后得到接触区和非接触区的累积时间，此阶段为Targetpresent□

④酒精清洗方箱内壁和底面，擦干后，更换小鼠C57,继续实验。

备注:

挫败后的行为学社会接触实验，另外加一组交互区域放入C57小鼠的实验。

该实验方法主要用于检测小鼠对陌生目标的靠近，探索和躲避行为皿。

正常的喷齿类动物是社会性动物，当正常鼠与陌生鼠相遇后会与陌生鼠频繁接触；

而遭受过社会挫败应激的小鼠则会产生孤立和逃避接触的行为，该行为一般判定为抑郁样行为；

而相比之下，在一定的时间内，正常鼠在单位时间内与正常鼠接触的时间明显长于模型鼠在单位时间内与正常鼠接触的时间，因此，在规定时间内计算出模型鼠与攻击鼠接触的时间能反应出模型鼠的抑郁程度购。

张飞龙等人采用42cm*42cm*25cni的接触场，3cm*6cm*25cm的塑料透明小盒％

五、强迫游泳实验（Forcedswimmingtest）:

①打开软件和摄像头后将实验桶放置到合适的位置，并不断地调整保证充分的视角，最后进行软件的设置。

②录像前，将实验C57小鼠提前一分钟左右打湿，以防实验中小鼠一直漂浮在水面上。

③可同时进行4只小鼠实验，录像6分钟，前1分钟为适应，后5分钟为正式实验测试，每测3次换水一次。

1、若小鼠数量较多，可考虑同时用多个桶。

2、若用两个以上的桶,则要保持放小鼠时动作的同一性。

3、录完一次后（我们采用录完3次后），要及时更换水，并要调整水温和水面高度。

4、录完后，要及时用纸和毛巾擦干小鼠身上的水分，并放到温暖处，防止小鼠感冒。

ElizaldeN[13'

在强迫游泳实验中采用高24cm,直径13cm,水深14cm,水温在22-23°

C,并在6分钟的录像中记录最后4分钟的不动时间"

妇。

六、悬尾实验（Tailsuspensiontest）[1]：

①打开软件和摄像头后将实验架子放置到合适的位置，并不断地调整保证充分的视角，最后进行软件的设置。

②将悬尾实验架子放置于安静的实验环境中，用白色绳子做好小圈，用纸胶布缠住离小鼠尾尖1-2顷处，然后另一端缠在事先准备好的白绳上。

③将绳子挂在架子的挂钩上，使小鼠倒吊于架子上，小鼠为克服不正常体位而挣扎活动，在此期间记录小鼠的不动时间。

④录像总共时间6min,开始Imin为适应时间，随后5min为记录时间。

1、若小鼠数量较多，可考虑同时用多个箱子。

2、在开始录制视频前最好保持小鼠在平面上，不要将其提起来。

3、挂小鼠时动作一定要轻，以免开始时不是小鼠的真实运动状态。

3、小鼠鼻子离箱底的高度最好保持一致，若同时录制多只小鼠，期间一只脱落，则不管，保证另一只的录制效果。

4、录完一只小鼠后，将箱子底部的小鼠屎擦掉，或提前在架子底部上准备好纸巾接屎。

七、十字高架迷宫实验（Elevatedplusmaze）:

①打开软件和摄像头后将十字高架放置到合适的位置，并不断地调整保证充分的视角，最后进行软件的设置。

②将实验小鼠轻轻地放置在十字迷宫的中央位置，面朝开放臂方向。

③每只小鼠录像总时长为5分半，30s为适应，5分钟为测试。

1、放小鼠时要将小鼠轻轻放在箱子的中央位置，面朝开放臂方向。

2、做完一只小鼠后，要用沾有酒精的抹布擦拭箱子的底部，小鼠停留较久的区域要着重擦拭，以去除上一只小鼠气味对后一只小鼠的影响。

由于空间较小，擦拭时要小心。

Venzala,E[16]等人十字高架采用的是30X5cm的高架，中央区域为5X5cm,高为38.5cmo我们的实验采用的是30X6cm的高架，中央区域为6X6cm。

八、 Y迷宫实验（T-mazeexperiment）:

①打开软件和摄像头后将Y迷宫放置到合适的位置，并不断地调整保证充分的视角，最后进行软件的设置。

②将实验小鼠轻轻地放置在Y迷宫的中央位置，面朝向同一个方向。

③每只小鼠录像总时长为8分钟。

备注：

录像结束后在电脑上分析小鼠的路径，记录小鼠的路径顺序和次数。

1、保持实验室环境的安静。

2、放小鼠时要将小鼠轻轻放在箱子的中央位置，面朝向同一个方向。

3、做完一只小鼠后，要用沾有酒精的抹布擦拭箱子的底部，小鼠停留较久的区域要着重擦拭，以去除上一只小鼠气味对后一只小鼠的影响。

九、 明暗箱实验（Light-darkboxtest）:

①打开软件和摄像头后将明暗箱放置到合适的位置，并不断地调整保证充分的视角，最后进行软件的设置。

②将实验小鼠轻轻地放置到明暗箱中，面朝向同一个方向，背对黑洞放。

③每只小鼠录像总时长为5分钟。

录像结束后在电脑上分析小鼠的路径，记录小鼠穿梭明暗箱的次数。

2、放小鼠时要将小鼠轻轻放在明暗箱中,面朝向同一个方向，背对黑洞放。

3、每做完一只小鼠后，要用沾有酒精的抹布擦拭箱子的底部，小鼠停留较久的区域要着重擦拭，以去除上一只小鼠气味对后一只小鼠的影响。

Y迷宫实验和明暗箱实验计次数的标准是，以小鼠的四只脚穿过区域线为准。

附件：

SMART行为学分析相关设置

1、 交互实验

时间：

始00：

00测：

02：

30

边长44cm*44cm

一区44cm*44cm

二区26cm*14cm

三区7cm*7cm小了