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检验毕业论文
毕业论文
题目血培养病原菌变化趋势分析及药敏分析
专业医学检验
学生姓名窦亚军
学号*********
血培养病原菌变化趋势分析及药敏分析
医学检验
学生窦亚军学号*********
【摘要】
目的：
回顾性分析血培养标本各病原菌变化趋势及主要病原菌对抗菌药物的敏感性，为临床合理选择抗菌药物提供依据。
方法：
2013年1月至2015年12月,我院门诊和住院病人的血液和骨髓标本4743份，不同患者选择合适的需氧瓶、厌氧瓶及儿童专用培养瓶，采用Bact/Alert3D全自动血培养仪进行培养用传统手工方法和Vitek-32全自动微生物仪及其鉴定卡对病原菌进行鉴定，采用K-B法和Vitek-32全自动微生物仪进行药敏。
结果：
共检出病原菌635株，其中革兰阳性菌247株（38.9%）；革兰阴性菌322株（50.7%）；真菌66株（10.4%）。
前几位病原菌依次为表皮葡萄球菌（118株，18.6%）、大肠埃希菌（118株，18.6%）、甲型副伤寒沙门菌（109株，17.2%）、金黄色葡萄球菌（32株，5.0%）。
结论：
革兰阳性菌呈逐年上升趋势，真菌也有较大上升幅度。
临床医生应及时了解血培养阳性病原菌的分布特征及耐药情况，合理使用抗生素，减少医院感染。
关键词：
血培养，病原菌，分布趋势，敏感性，抗菌药物
前言............................................................................................................................4
1.材料与方法...........................................................................................................4
1.1标本、仪器与试剂.............................................................................................4
1.1.1标本来源..........................................................................................................4
1.1.2仪器与试剂......................................................................................................4
1.2方法.....................................................................................................................4
1.2.1Bact/Alert全自动血培养仪上机检测..............................................................4
1.2.2细菌的鉴定.......................................................................................................4
1.2.3细菌的药敏.......................................................................................................5
1.2.4统计方法...........................................................................................................5
2.结果........................................................................................................................5
2.1病原菌的分布情况..............................................................................................5
2.2病原菌药敏分析..................................................................................................7
2.2.1葡萄球菌对抗菌药物的敏感率.......................................................................7
2.2.2主要革兰阴性菌对抗菌药物的敏感率...........................................................8
2.2.3真菌的药物敏感率...........................................................................................9
3.讨论........................................................................................................................9
4.结论.......................................................................................................................10
参考文献....................................................................................................................11
略缩词........................................................................................................................11
附：
综述....................................................................................................................12
前言
败血症是严重威胁人们健康的疾病之一，尤其是耐药株的增加，使这些感染的治疗更加困难。
败血症无特异的临床表现，目前血培养阳性仍是诊断本病的金标准。
为了解菌血症和败血症患者病原菌的分布及对常用抗生素的耐药情况，为及时准确地选择抗生素提供资料，尤其是为早期选用抗生素提供用药依据，因此对3年来送检的血培养标本病原菌分布、药敏特征进行了回顾性分析。
1.资料与方法
1.1标本、仪器与试剂法
1.1.1标本来源
2013年1月至2015年12月我院门诊和住院病人的血液和骨髓标本4743份，严格无菌方法采血,儿童3-5ml，成人采血5-10ml,注入Bact/Alert3D配套的血培养瓶中送检。
标本尽量在抗生素使用前和高热时采集。
1.1.2仪器与试剂
Bact/Alert3D全自动血培养仪及其配套的血培养瓶,Vitek-32全自动微生物仪及其鉴定卡,均为法国梅里埃公司产品。
血平板与巧克力平板购自广州迪景公司。
质控菌株:
大肠埃希菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC25923,铜绿假单胞菌ATCC27853。
1.2方法
1.2.1Bact/Alert3D全自动血培养仪上机检测
严格按照说明书操作,仪器给出阳性信号时及时取出培养瓶,转种血平板与巧克力平板（CO2环境）,放置35℃孵箱孵18-24小时,同时进行涂片、革兰染色、镜检。
仪器设置的培养时间为5天,满5天未检测到细菌生长的,仪器发出阴性信号,及时取出阴性瓶,盲种血平板与巧克力平板,同时进行涂片、革兰染色、镜检。
1.2.2细菌的鉴定
用Vitek-32全自动微生物仪及其鉴定卡鉴定。
1.2.3细菌的药敏
用K—B法和Vitek-32全自动微生物仪进行药敏。
1.2.4统计方法
两组阳性率以及阳性百分比用卡方检验，P<0.05认为有统计学意义。
数据采用SPSS11.5统计软件包进行计算。
2.结果
2.1病原菌的分布情况
2013年1月-2015年12月期间，从血标本中共分离病原菌株635株，阳性率13.3%。
其中革兰阳性菌247株（占38.9%），呈上升趋势；革兰阴性菌322株（占50.7%），也呈上升趋势。
肠杆菌科中甲型副伤寒由06年的80株减低到08年13株，呈下降趋势；真菌66株（占10.4%），由06年的2.9%上升至08年的15.9%，上升幅度较大。
革兰阳性菌以葡萄球菌属的细菌为主，其中表皮葡萄球菌最多，共118株，占18.6%。
肠杆菌科的细菌是最常见的革兰阴性菌，其中大肠埃希菌最多，共118株，占18.6%。
整体分布情况见表1。
表12013年-2015年血培养病原菌分布
Table1Distributionofpathogenduring2013-2015
201320142015
细菌名称
株数（百分率）
株数（百分率）
株数（百分率）
2
X
P值
葡萄球菌属
23（16.5%）90（44.6%）
91（30.8%）
30.027
0
金黄色葡萄
9
16
7
表皮葡萄球
13
59
46
其它葡萄球
1
15
38
肠球菌属
0（0.0%）
11（5.45）
10（3.4%）
7.661
0.022
屎肠球菌
0
6
7
粪肠球菌
0
6
7
链球菌属
2（2.2%）
12（5.9%）
7
5.444
0.066
A群溶血性链球菌
0
2
2
甲型溶血性链球菌
2
8
4
肺炎链球菌
0
2
1
肠杆菌科
105（75.5%）
65（32.2%）
129（43.7%）
64.53
0
甲型副伤寒
80
16
13
伤寒
4
10
8
大肠埃希氏菌
13
27
78
肺炎克雷伯菌
6
4
12
其它肠杆菌
2
8
18
非发酵菌
4（2.9%）
8（4.0%）
11（3.7%）
0.297
0.862
铜绿假单胞菌
3
6
9
不动杆菌属
1
2
2
其它非发酵菌
0
0
0
革兰阳性杆菌
0
0
0
棒状杆菌
0
0
0
真菌
4（2.9%）
15（7.4%）
47（15.9%）
20.086
0
白色假丝酵母菌
3
6
12
近平滑假丝酵母菌
0
3
1
热带假丝酵母菌
1
1
11
新型隐球菌
0
0
0
光滑假丝酵母菌
0
5
7
其它假丝酵母菌
0
0
16
合计
138
202
295
2.2病原菌药敏分析
2.2.1葡萄球菌对抗菌药物的敏感率
葡萄球菌是检出株数最多的革兰阳性菌,金黄色葡萄球菌对青霉素G,四环素敏感率较低（<40%）。
呋喃妥因、万古霉素和利奈唑烷的敏感率较高，分别为100%、100%、96.7%；凝固酶阴性葡萄球菌对氨苄西林/舒巴坦、苯唑西林、复方新诺明、红霉素、青霉素G、头孢唑林的敏感率较低（<40%）,对呋喃妥因、万古霉素和利奈唑烷的敏感率高,分别为91.9%、100%、83.1%。
金黄色葡萄球菌对大多数药物的敏感率均较凝固酶阴性葡萄球菌高。
MRSA（耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌）与MRCNS（耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌）分别为48.3%、83.3%。
（见表2）
表2葡萄球菌对抗菌药物的敏感率
Table2SensitivityrateofStaphylococcustocommonlyusedantimicrobialagents
抗生素/细菌
金黄色葡萄球菌
凝固酶阴性葡萄球菌
株数
敏感率（%）
株数
敏感率（%）
氨苄西林/舒巴坦
31
51.7
160
13.1
苯唑西林
29
51.7
156
16.7
呋喃妥因
30
100.0
160
91.9
复方新诺明
30
70.0
157
24.2
红霉素
30
53.3
163
12.9
克林霉素
29
58.6
157
42.0
利奈唑烷
30
96.7
154
83.1
莫西沙星
29
69.0
155
54.2
青霉素G
29
20.7
159
3.8
庆大霉素
32
75.0
170
62.4
四环素
31
38.7
160
40.0
头孢唑啉
26
51.7
115
17.4
万古霉素
31
100.0
169
100.0
左旋氧氟沙星
32
71.9
167
53.3
2.2.2主要革兰阴性菌对抗菌药物的敏感率
大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是主要产ESBLs的菌株，其产ESBLs阳性率分别为39.9%、17.8%。
大肠埃希菌是检出株数最多的革兰阴性菌，其对氨苄西林/舒巴坦、复方新诺明、头孢唑林、左旋氧氟沙星、头孢呋辛的敏感率较低（<40%）,对亚胺培南、美洛培南、头孢西丁的敏感率较高，分别为99.2%、98.4%、95.1%。
肺炎克雷伯菌对氨苄西林/舒巴坦、复方新诺明的敏感率较低，对阿米卡星、亚胺培南、美洛培南、头孢西丁的敏感率较高，分别为85.7%、90.9%、85.7%、85.7%。
铜绿假单胞菌对氨苄西林/舒巴坦、呋喃妥因、复方新诺明、头孢曲松、头孢唑啉、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯敏感率较低（<40%）,对阿米卡星、环丙沙星、妥布霉素的敏感率较高,分别为100%、88.9%、88.9%。
（见表3）
表3主要革兰阴性菌对抗菌药物的敏感率
Table3Sensitivityrateofthreecommongram-negativetocommonlyusedantimicrobialagents
抗生素/细菌
大肠埃希菌
肺炎克雷伯菌
铜绿假单胞菌
株数
敏感率（%）
株数
敏感率（%）
株数
敏感率（%）
阿米卡星
117
88.9
21
85.7
18
100.0
氨苄西林
115
13.0
20
0.0
18
0.0
氨苄西林/舒巴坦
54
16.7
13
19.0
9
0.0
呋喃妥因
54
90.7
13
46.2
9
11.1
复方新诺明
57
22.8
13
23.1
9
11.1
环丙沙星
56
46.4
13
69.2
9
88.9
哌拉西林/他唑巴坦
116
83.6
21
71.4
18
50.0
庆大霉素
115
40.0
22
59.1
18
72.2
头孢吡肟
118
49.2
22
50.0
18
50.0
头孢曲松
54
51.9
13
53.8
9
11.1
头孢他啶
118
55.1
22
50.0
18
46.7
头孢唑林
115
38.3
20
45.0
18
0.0
妥布霉素
57
42.1
15
60.0
9
88.9
亚胺培南
117
99.2
22
90.9
18
61.1
左旋氧氟沙星
116
37.1
22
72.7
18
66.7
美洛培南
64
98.4
7
85.7
9
77.8
头孢呋辛钠
61
32.8
7
42.9
9
0.0
头孢呋辛酯
60
33.3
7
42.9
9
0.0
头孢西丁
61
95.1
7
85.7
-
-
ESBL（+）
47
39.9
4
17.8
2.2.3真菌的药物敏感率（见表4）
表4真菌的药物敏感率
Table4Sensitivityrateoffungaltocommonlyusedantimicrobialagents
抗生素/年份
株数
2013年
株数
2014年
株数
2015年
5-氟胞嘧啶
4
100.00
15
100.00
47
97.96
两性霉素B
4
100.00
15
100.00
47
100.00
氟康唑
4
100.00
15
73.33
47
71.42
伊曲康唑
4
100.00
15
74.12
47
71.33
伏立康唑
-
-
15
86.67
47
97.96
3.讨论
本研究中2013年至2015年血培养共分离病原菌635株，革兰阳性菌247株，占38.9%；革兰阴性菌322株，占50.7%。
革兰阳性菌13年16.5%上升至30.8%，呈逐年上升趋势，与文献[1]报道相似，条件致病菌表皮葡萄球菌的比例超过了金黄色葡萄球菌，跃居于首位，与文献报道相符[2]。
本研究中甲型副伤寒由13年的80株减低到15年13株，呈下降趋势，说明本地区对其控制较好。
研究中真菌的分离株数和种类逐年增加，由13年的2.9%上升至15年的15.9%，与解晓珍等[3]报道相近，上升幅度较大。
真菌检出比例占病原菌总数的4.6%，以白色念珠菌多见。
真菌的分离株数和种类逐年增加，可能是由于大剂量的抗生素、免疫抑制剂和激素的广泛应用而导致人体免疫力的下降所致[4],且联合应用抗菌药物或长期应用广谱抗生素的现象极其普遍,致使由真菌引起的二重感染逐年增多,临床多见于引起下呼吸道感染和血液感染,真菌血症常威胁生命,患者死亡率较高[5]。
革兰阳性菌检出株数最多的是葡萄球菌,葡萄球菌对呋喃妥因、万古霉素、利奈唑烷的敏感率高，未出现万古霉素耐药株。
金黄色葡萄球菌对大多数药物的敏感率均较凝固酶阴性葡萄球菌高。
MRSA与MRCNSA分别为48.3%、83.3%，高于顾兵等的报道[6]。
由于目前临床上治疗MRSA感染的主要抗菌药为糖肽类（如万古霉素）,因而耐万古霉素金葡菌（VRSA）的出现及传播尤其值得关注,最近已报道发现了携带VanA基因的VRSA[7]，我国目前虽尚未见耐万古霉素VRSA的报道，但应当警惕这类菌株的出现。
主要革兰阴性菌对抗菌药物的敏感率，大肠埃希菌是血培养分离最多的革兰阴性杆菌，共118株，ESBLs阳性率为39.9%。
其对亚胺培南均敏感，对呋喃妥因、阿米卡星、美洛培南、哌拉西林敏感性较好，对其它抗生素的耐药率达45%以上。
肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率为17.8%，对阿米卡星、亚胺培南、美洛培南、头孢西丁的敏感率较高。
铜绿假单胞菌对阿米卡星、环丙沙星、妥布霉素的敏感率较高。
由此可见阿米卡星可作为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌的首选用药之一。
本实验产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分别为39.9%、17.8%,产ESBLs菌株对头孢类抗生素的敏感率低,虽然ESBLs在各地区、各医院间检出率差异明显不同[8]，但通过本组资料仍可看出ESBLs菌株的检测是非常必要的。
真菌对氟康唑和伊曲康唑的敏感性较低，对其它抗真菌药较敏感（≥90%）。
目前,抗真菌药物种类少,不能凭经验用药,应根据药敏结果选择合适的抗菌药。
4.结论
3年来,血培养分离的葡萄球菌、肠杆菌科细菌（除沙门氏菌外）呈上升趋势,真菌也有较大上升幅度,沙门氏菌呈下降趋势。
血培养分离的病原菌呈现了多样性,临床医生应及时了解血培养病原菌的分布特征及耐药情况，并及时送检血液做细菌培养及药敏试验，根据药敏结果合理选择抗菌药物，避免抗生素滥用。
合理使用抗生素，减少医院感染。
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略缩词
超广谱β-内酰胺酶：
ExtendedspectrumbetalactamasesESBLs
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌：
MethicillinresistantstaphylococcusaureusMRSA
耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球：
MethicillinresistantcoagulasenegativestaphylococcusMRCNSA
耐万古霉素金葡
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