花鱼骨唇鱼骨杂交子一代胚胎发育研究doc.docx

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花鱼骨唇鱼骨杂交子一代胚胎发育研究doc

花鱼骨（♀）×唇鱼骨（♂）杂交子一代胚胎发育研究

摘要：

采用人工催产和干法授精技术，在ｚｏｏｍ６４５ｓ解剖镜下对花鱼骨（ｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｍａｃｕｌａｔｕｓ）（♀）×唇鱼骨（ｈ．ｌａｂｅｏ）（♂）杂交子一代（f1）胚胎发育过程中各发育时期的发育时序和形态特征进行了观察。

结果表明，受精卵为强黏性卵，卵径为１．６０～１．８０ｍｍ。

在孵化水温为（２０±１）℃条件下，受精后１ｈ胚盘隆起；１ｈ２０ｍｉｎ进入卵裂期；６ｈ２０ｍｉｎ进入桑椹期；８ｈ２０ｍｉｎ进入囊胚期；１３ｈ１０ｍｉｎ进入原肠期；１６ｈ２０ｍｉｎ进入神经胚期；受精后１８ｈ进入胚孔封闭期；２１ｈ３０ｍｉｎ进入肌节出现期；２７ｈ２０ｍｉｎ进入眼基出现期；２８ｈ４０ｍｉｎ进入眼囊期；３０ｈ４０ｍｉｎ进入尾芽期；３２ｈ３０ｍｉｎ进入晶体出现期；３４ｈ４０ｍｉｎ进入肌肉效应期；３６ｈ４０ｍｉｎ进入耳石出现期；４４ｈ进入心跳期；５３ｈ４０ｍｉｎ进入眼色素形成期；６０ｈ４０ｍｉｎ进入血液循环期；６８ｈ３０ｍｉｎ后开始出膜。

杂交f1胚胎发育时序及形态特征均偏向母本花鱼骨。

关键词：

花鱼骨（ｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｍａｃｕｌａｔｕｓ）；唇鱼骨（ｈ．ｌａｂｅｏ）；杂交子一代；胚胎发育

ｓｔｕｄｙｏｎｅｍｂｒｙｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｃｒｏｓｓｂｒｅｅｄｆ１ｂｙｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｍａｃｕｌａｔｅｓ（♀）×ｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｌａｂｅｏ（♂）

ｌｉａｎｑｉｎｇ－ｐｉｎｇ１，ｍｉｇｕｏ－ｑｉａｎｇ１，ｈｕｔｉｎｇ－ｊｉａｎ１，ｗａｎｇｙｕ－ｃｈｅｎ１，ｙａｏｚｉ－ｌｉａｎｇ２，ｑｉｎｄａｎ３

（１．ｚｈｅｊｉａｎｇｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｆｒｅｓｈｗａｔｅｒｆｉｓｈｅｒｉｅｓ，ｈｕｚｈｏｕ３１３００１，ｚｈｅｊｉａｎｇ，ｃｈｉｎａ；２．ｌｉｓｈｕｉｆｉｓｈｅｒｙｔｅｃｈｎｉｃａｌｅｘｔｅｎｓｉｏｎｓｔａｔｉｏｎ，ｌｉｓｈｕｉ３２３０００，ｚｈｅｊｉａｎｇ，ｃｈｉｎａ；３．ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ｗｕｈａｎｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ｗｕｈａｎ４３０４１５，ｃｈｉｎａ）

ａｂｓｔｒａｃｔ：

ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｄｅｇｇｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｔｈｅｃｒｏｓｓｉｎｇｏｆｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｍａｃｕｌａｔｅｓ（♀）×ｈ.ｌａｂｅｏ（♂）ｗｉｔｈａｒｔｉｆｉｃｉａｌｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｍｂｒｙｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｓｉｎｇｚｏｏｍ６４５ｓｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｆｅｒｔｉｌｉｚｅｄｅｇｇｓwereｓｔｒｏｎｇｓｔｉｃｋｙｗｉｔｈｄｉａｍｅｔｅｒ１．６0~１．８0ｍｍ．ｕｎｄｅｒｔｈｅｗａｔｅｒｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅof（２０±１）℃，ｔｈｅｆｅｒｔｉｌｉｚｅｄｅｇｇｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｔｏｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｂｌａｓｔｏｄｅｒｍａｆｔｅｒ１ｈｏｕｒｆｅｒｔｉｌｉｚｉｎｇ，ｃｌｅａｖａｇｅｓｔａｇｅａｆｔｅｒ１ｈｏｕｒａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｍｏｒｕｌａｓｔａｇｅａｆｔｅｒ６ｈｏｕｒｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｂｌａｓｔｕｌａｓｔａｇｅａｆｔｅｒ８ｈｏｕｒｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｇａｓｔｒｕｌａｓｔａｇｅａｆｔｅｒ１３ｈｏｕｒｓａｎｄ１０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｎｅｕｒｕｌａｓｔａｇｅａｆｔｅｒ１６ｈｏｕｒｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｂｌａｓｔｏｐｏｒｅｃｌｏｓｉｎｇｓｔａｇｅａｆｔｅｒ１８ｈｏｕｒｓ，ｍｙｏｃｏｍａｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｔａｇｅａｆｔｅｒ２１ｈｏｕｒｓａｎｄ３０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｏｐｔｉｃｒｕｄｉｍｅｎｔｓｔａｇｅａｆｔｅｒ２７ｈｏｕｒｓａｎｄ２０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｅｙｅｃａｐｓｕｌｅｓｔａｇｅａｆｔｅｒ２８ｈｏｕｒｓａｎｄ４０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｔａｉｌ－ｂｕｄｓｔａｇｅａｆｔｅｒ３０ｈｏｕｒｓａｎｄ４０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｅｙｅｌｅｎｓｆｏｒｍｅｄｓｔａｇｅａｆｔｅｒ３２ｈｏｕｒｓａｎｄ３０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｍｕｓｃｕｌａｒｅｆｆｅｃｔｓｔａｇｅａｆｔｅｒ３４ｈｏｕｒｓａｎｄ４０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｏｔｏｌｉｔｈｅｓｓｔａｇｅａｆｔｅｒ３６ｈｏｕｒｓａｎｄ４０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｈｅａｒｔｗｏｒｋｉｎｇｓｔａｇｅａｆｔｅｒ４４ｈｏｕｒｓ，ｅｙｅｐｉｇｍｅｎｔｉｎｇｓｔａｇｅａｆｔｅｒ５３ｈｏｕｒｓａｎｄ４０ｍｉｎｕｔｅｓ，ｂｌｏｏｄｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｓｔａｇｅａｆｔｅｒ６０ｈｏｕｒｓａｎｄ４０ｍｉｎｕｔｅｓ，ａｎｄｆｒｙｂｅｇａｎｔｏｂｅｈａｔｃｈｅｄｏｕｔａｆｔｅｒ６８ｈｏｕｒｓａｎｄ３０ｍｉｎｕｔｅｓ．ｔｈｅｅｍｂｒｙｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｐｒｏｃｅｓｓａｎｄｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆｈｙｂｒｉｄｆ１ｗｅｒｅｍｏｒｅｓｉmｉｌａｒｔｏｔｈｏｓｅｏｆｉｔｓｍａｔｅｒｎａｌｆｉｓｈ．

ｋｅｙｗｏｒｄｓ：

ｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｍａｃｕｌａｔｅｓ；ｈ．ｌａｂｅｏ；ｈｙｂｒｉｄｆ１；ｅｍｂｒｙｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ

鱼类是最容易发生远缘杂交的脊椎动物［１］。

在育种和生产实践中，适当杂交不仅可使不同类型亲本的优良性状进行简单的结合，而且能产生亲本所从未有过的超亲代的优良性状，从而能够获得具有杂种优势的群体，其生长速度、肌肉品质、抗病能力等比亲本有显著的提高。

远缘杂交是产生杂交优势的重要手段之一［２］，许多学者进行了种间杂交试验并取得了成功［３－１０］。

花鱼骨（ｈｅｍｉｂａｒｂｕｓｍａｃｕｌａｔｕｓ）和唇鱼骨（ｈ．ｌａｂｅｏ）同属鲤形目鲤科鱼骨亚科鱼骨属［１１］。

对于花鱼骨和唇鱼骨的研究目前主要集中在其分布、形态、人工繁殖、胚胎发育、营养成分、分子遗传等方面［１２－２４］，有关鱼骨属内杂交的研究目前未见报道。

本研究以花鱼骨为母本，唇鱼骨为父本，进行了种间的远缘杂交试验，并对花鱼骨（♀）和唇鱼骨（♂）杂交子一代（f1）胚胎发育过程的形态特征进行了观察，旨在为鱼骨属内的遗传育种、品种选育提供基础研究和技术参考。

１材料与方法

１．１亲鱼

花鱼骨母本来源于浙江省湖州市某养殖池塘，体重１００～１５０ｇ，年龄为２龄；唇鱼骨父本来源于浙江省千岛湖养殖网箱，体重１００～１５０ｇ，年龄为３龄。

１．２人工授精与孵化

试验于２００９年４月进行。

选取性腺成熟度好、体表无伤的亲鱼作为试验亲鱼，注射催产剂，催产后放入网箱中，用微流水刺激。

采用常规人工干法授精获得花鱼骨（♀）×唇鱼骨（♂）杂交ｆ１受精卵，取部分受精卵在室内静水孵化，孵化水温为（２０±１）℃。

１．３胚胎发育观察

对花鱼骨（♀）×唇鱼骨（♂）杂交ｆ１受精卵用０．１ｍｏｌ／ｌ的盐酸进行短时间浸泡，当胚胎内部结构清楚时，立即用清水稀释溶液至中性。

另外用质量分数为０．３％的胰蛋白酶和体积分数为１０％的甲醛溶液进行胚胎观察前处理对比试验。

利用ｚｏｏｍ６４５ｓ连续变倍体视显微镜对杂交ｆ１整个胚胎发育过程进行连续活体观察，并记录各个发育时期的形态特征，同时用ｃａｎｏｎａ７００型相机拍照，图片用ｐｈｏｔｏｓｈｏｐ进行处理。

２结果

２．1３种胚胎观察前处理方法效果比较

用０．１ｍｏｌ／ｌ的盐酸对杂交f1受精卵胚胎短时间浸泡处理，其胚胎透明效果好，但是浸泡时间需要控制好，且处理后受精卵胚胎会快速死亡；而用质量分数为０．３％的胰蛋白酶处理杂交f1受精卵胚胎，时间比较长，且透明效果不明显，出现胚胎局部透明，其他部分不透明的现象；用体积分数为１０％的甲醛溶液固定后进行卵膜的分离，在胚胎发育早期不易完成，这是因为早期胚胎含大量的卵黄，解剖针挑破卵膜后胚胎容易解体，无法得到完整的胚胎。

２．2胚胎发育时序

花鱼骨（♀）×唇鱼骨（♂）杂交ｆ１受精卵经过６８ｈ３０ｍｉｎ孵化出膜，胚胎发育进程见表１。

２．3胚胎发育过程中的外部形态特征

２．3．１受精卵受精卵为端黄卵，金黄色，呈圆球形，具沉性和强黏性，吸水膨胀后立即产生白色黏膜，遇外物即黏附其上。

随着卵膜继续吸水膨胀，出现了围绕卵黄的卵间隙。

卵径为１．６０～１．８０ｍｍ，卵膜不透明（图１－１）。

２．3．２胚盘期受精后１ｈ，原生质逐渐向动物极集中，形成如小丘状的胚盘，即胚盘期（图１－２）。

２．3．３卵裂期和桑椹期花鱼骨（♀）×唇鱼骨（♂）杂交ｆ１受精卵的卵裂方式与硬骨鱼类的卵裂方式相同，属于盘状卵裂。

受精后１ｈ２０ｍｉｎ，胚盘经裂为２个大小相等的分裂球，此时进入２细胞期（图１－３）；受精后２ｈ分裂球再次经裂，分裂沟与第一次分裂面垂直，形成４个大小相等的分裂球，此时进入４细胞期；随着细胞的不断分裂，细胞数目呈几何级数增长，经过８细胞、１６细胞、３２细胞、６４细胞期，……到后期各个分裂球分裂的速度不一致，造成细胞分裂球大小不整齐（图１－４，图１－５）；受精后６ｈ２０ｍｉｎ，分裂球越分越小，形成许多细胞的胚体，形状如桑椹状，此时进入桑椹期（图１－６）。

２．3．４囊胚期囊胚期可以分为早、中、晚三期。

受精后８ｈ２０ｍｉｎ，细胞进一步分裂，随着细胞分裂的继续，分裂球越分越小，细胞界线不清楚，由许多分裂球组成的囊胚层高高隆起，进入囊胚早期（图１－７）。

受精后１０ｈ进入囊胚中期，囊胚层高度较囊胚早期高度有所降低，细胞界线已经完全分不清楚。

受精后１１ｈ３０ｍｉｎ进入囊胚晚期，囊胚表面细胞开始向卵黄部分下包，囊胚层变扁，整个囊胚与稍微隆起的胚盘相似。

２．3．５原肠期按照胚体下包的程度，原肠期也可以分为早、中、晚三期。

受精后１３ｈ１０ｍｉｎ，胚层细胞下包卵黄囊，形成胚环，胚层下包约１／３，此时进入原肠早期。

受精后１４ｈ２０ｍｉｎ，胚层继续下包，胚环明显，并在胚环的一侧即未来胚胎的后端出现胚盾，胚层下包约１／２～２／３，此时进入原肠中期（图１－８）。

受精后１５ｈ１０ｍｉｎ，胚层下包约２／３～４／５，形成胚孔，此时为原肠晚期（图１－９）。

２．3．６神经胚期受精后１６ｈ２０ｍｉｎ进入神经胚期，此时胚层下包约为４／５，胚体侧卧，神经板形成，卵黄栓外露，胚体前端膨大。

２．3．７胚孔封闭期受精后１８ｈ进入胚孔封闭期，随着胚层的不断下包，卵黄栓消失，胚层完全包围卵黄囊，胚孔关闭，神经板中线下凹，胚盾非常明显（图１－１０）。

２．3．8肌节出现期受精后２１ｈ３０ｍｉｎ，胚胎发育进入器官形成期，此时胚体前部膨大，在胚体的中部形成４～５对肌节，神经板头端隆起（图１－１１）。

２．3．9眼基出现期受精后２７ｈ２０ｍｉｎ，在胚体头部出现一对肾形的突起，即眼的原基，此为眼基出现期（图１－１２）。

２．3．10眼囊期受精后２８ｈ４０ｍｉｎ，在胚体前端两侧出现长椭圆形的眼囊，此为眼囊期。

２．3．１1尾芽期受精后３０ｈ４０ｍｉｎ，尾芽出现在胚体后端腹面，呈圆锥形，尾芽末端开始游离，此为尾芽期（图１－１３）。

２．3．１2晶体出现期受精后３２ｈ３０ｍｉｎ，在眼杯口出现圆形的眼晶体，此为晶体出现期