气相色谱法在药典中的应用.docx

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气相色谱法在药典中的应用

气相色谱法在药典中的应用

摘要：

本文通过介绍气相色谱检验的操作过程，选取《中国药典》中的部分例子说明了气相色谱法在对药物的鉴别、检查、含量测定中的应用，还介绍了气相色谱法在乙醇量测定法；甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法；2-乙基己酸测定法；残留溶剂测定法中的运用以及气相色谱-质谱联用。

关键词：

气相色谱、中国药典、应用

气相色谱法（gaschromatography,GC）是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。

系采用气体为流动相（载气）流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。

物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用数据处理系统记录色谱信号。

采用高灵敏选择性检测器，使得它又具有分析灵敏度高、应用范围广等优点。

这是一种新的分离、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。

一气相色谱法检验标准操作规程[1]

（一）对仪器的一般要求

所用的仪器为气相色谱仪，由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成（如图1所示）。

进样部分、色谱柱和检测器的温度均应根据分析要求适当设定。

图1气相色谱仪示意图

1.载气源

气相色谱法的流动相为气体，称为载气，氦、氮和氢可用作载气，可由高压瓶或高纯度气体发生器提供，经过适当的减压装置，以一定的流速经过进样器和色谱柱；根据供试品的性质和检测器种类选择载气，除另有规定外，常用载气为氮气。

2.进样部分

进样方式一般可采用溶液直接进样、自动进样或顶空进样。

溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样；采用溶液直接进样或自动进样时，进样口温度应高于柱温30～50℃；进样量一般不超过数微升；柱径越细，进样量应越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。

顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。

将固态或液态的供试品制成供试液后，置于密闭小瓶中，在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在液态和气态达至平衡后，由进样器自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中（如图2所示）。

图2顶空进样过程示意图

3.色谱柱

色谱柱为填充柱或毛细管柱。

填充柱的材质为不锈钢或玻璃，内径为2～4mm，柱长为2～4m，内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体，粒径为0.18～0.25mm、0.15～0.18mm、或0.125～0.15mm。

常用载体为经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球，常用固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。

毛细管柱的材质为玻璃或石英，内壁或载体经涂渍或交联固定液，内径一般为0.25mm、0.32mm或0.53mm，柱长5～60m，固定液膜厚0.1～5.0μm，常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。

新填充柱和毛细管柱在使用前需老化处理，以除去残留溶剂及易流失的物质，色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。

4.柱温箱

由于柱温箱稳定的波动会影响色谱分析结果的重现性，因此柱温箱精度应在±1℃，且温度波动小于每小时0.1℃。

温度控制系统分为恒温和程序升温两种。

5.检测器

适合气相色谱法的检测器有火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、氮磷检测器（NPD）、火焰光度检测器（FPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等。

火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数的药物；氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高；火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高；电子捕获检测器适于含卤素的化合物；质谱检测器还能给出供试品某个成分相应的结构信息，可用于结构确证。

除另有规定外，一般用火焰离子化检测器，用氢气作为燃气，空气作为助燃气。

在使用火焰离子化检测器时，检测器的温度一般应高于柱温，并不得低于150℃，以免水汽凝结，通常为250～350℃。

6.数据处理系统

可分为记录仪、积分仪以及计算机工作站等。

各品种项下规定的色谱条件，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱柱材料不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并符合系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于30分钟内记录完毕。

（二）系统适用性试验

色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。

其中，分离度和重复性是尤为重要。

除另有规定外，按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。

1.色谱柱的理论板数（n）

用于评价色谱柱的分离效能。

由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。

在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和峰宽（W）或半高峰宽（Wh/2）,按n＝16（tR/W）2或n=5.54（tR/Wh/2）2计算色谱柱的理论板数。

2.分离度（R）

用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统效能的关键指标。

可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测组分与某一添加的指标性成分（内标物质或其他难分离物质）的分离度，或将供试品或对照品用适当的方法降解，通过测定待测组分与某一降解产物的分离度，对色谱系统进行评价与控制。

无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。

除另外有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5。

分离度的计算公式为：

R=

或R=

式中tR2为相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间；W1、W2及W1，h/2、W2,h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。

（如图3所示）

图3

当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）均以峰宽（W）的计算结果为准。

3.重复性

用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复性能。

采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％；采用内标法时，通常配制相当于80％、100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样2次，计算平均校正因子。

其相对标准偏差也应不大于2.0％。

4.拖尾因子（T）

用于评价色谱峰的对称性。

为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合各品种项下的规定。

拖尾因子计算公式为：

T=

式中W0.05h为0.05峰高处的峰宽；d1为峰极大至峰前沿之间的距离。

（如图4所示）

图4

除另有规定外，峰高法定量时T应在0.95～1.05之间。

峰面积法测定时，若拖尾严重，将影响峰面积的准确测量。

必要时，应在各品种项下对拖尾因子作出规定。

（三）测定法

1.内标法

按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。

取一定量注入仪器，记录色谱图。

测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：

校正因子（f）=

式中AS为内标物质的峰面积或峰高；

AR为对照品的峰面积或峰高；

CS为内标物质的浓度；

CR为对照品的浓度。

再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：

含量（cx）＝f•

式中AX为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；

CX为供试品（或其杂质）的浓度；

A’S为内标物质的峰面积或峰高；

c’S为内标物质的浓度；

f为较正因子。

采用内标法，可避免因样品前处理及进样体积误差对测定结果的影响。

2.外标法

按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：

含量（cX）=cR

式中CR为对照品的浓度；

AR为对照品的峰面积或峰高；

AX为供试品（或其杂质）峰面积或峰高。

由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中成分或杂质含量时，以定量环或自动进样器进样为好。

3.面积归一法

按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图。

测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。

用于杂质检查时，由于峰面积归一化法测定误差大，因此，通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。

除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。

5.标准溶液加入法

精密称（量）取某个杂质或待测成分对照品含量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定杂质或主成分含量，再扣除加入的对照品溶液含量，即得供试液溶液中某个杂质和主成分含量。

也可按下述公式进行计算，加入对照品溶液前后校正因子应相同，即：

=

则待测组分的浓度cx可通过如下公式进行计算：

cX=

式中cX为供试品中组分X的浓度；

AX为供试品中组分X的色谱峰面积；

△cX为所加入的已知浓度的待测组分对照品的浓度；

Ais为加入对照品后组分X的色谱峰面积。

由于气相色谱法的进样量一般仅数微升，为减小进样误差，尤其当采用手工进样时，由于留针时间和室温等对进样量也有影响，故以采用内标法定量为宜；当采用自动进样器时，由于进样重复性的提高，在保证分析误差的前提下，也可采用外标法定量。

当采用顶空进样时，由于供试品和对照品处于不完全相同的基质中，故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响；当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。

二气相色谱法在鉴别中的应用

按各药品项下规定配置对照品溶液与供试品溶液，各取一定量，注入气相色谱仪，供试品溶液色谱中应呈现与对照品溶液色谱峰保留时间一致的色谱峰。

如在鉴别中药乳香中的索马里乳香[2]，取[含量测定]项下挥发油适量，加无水乙醇制成每1mL含2.5mL的溶液，作为供试品溶液。

另取对照品溶液。

照气相色谱法（附录ⅥE）试验，以聚乙二醇（PEG-20M）毛细管柱，程序升温；初始温度50℃，保持3分钟，以每分钟25℃的速率升温至200℃，保持1分钟；进样口温度为200℃，检测器温度为220℃，分流比为20：

1。

理论板数俺α-蒎烯峰计算不低于7000，分别取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，供试品溶液色谱中应呈现与对照品溶液色谱峰保留时间一致的色谱峰。

又如丙戊酸钠片的鉴别[3]，临用新制，取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，取细粉适量（约相当于丙戊酸钠0.5g）,置分液漏斗中，加水10mL，加稀硫酸5mL，振摇使溶解，用二氯甲烷提取3次，每次20mL，合并二氯甲烷液，加无水硫酸钠适量，振摇，滤过，滤液置旋转蒸发器上蒸干（温度不超过30℃），加二氯甲烷适量，振摇使残渣溶解，定量转移至100mL量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试品溶液1mL，置10mL量瓶中，用二氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

另取丙戊酸钠对照品约10mg，置分液漏斗中，加水10mL，加稀硫酸5mL，振摇，用二氯甲烷提取3次，每次20mL，合并二氯甲烷液，加无水硫酸钠适量，振摇，滤过，滤液置旋转蒸发器上蒸干（温度不超过30°C），精密加入二氯甲烷20mL，振摇使残渣溶解，摇匀，作为对照品溶液。

照有关物质项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与对照品溶液各1μL，分别注入气相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

三气相色谱法在检查中的应用

（一）内标法（内标校正因子法和内标工作曲线法）

可消除进样量不准确误差，GC进样量一般为1μL，液相是10μL、20μL，GC更易出现进样误差，自动进样器准确度可满足要求，手动进样最好用内标法定量。

需要内标物。

按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液。

取一定量注入仪器，记录色谱图。

测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按按本文第二部分所述方法计算结果。

如检查二甲基亚砜中德二甲基砜[4]，取本品，精密称定，用内标溶液（0.025%二苯甲烷的丙酮溶液）稀释制成50%，作为供试品溶液；取二甲基砜对照品适量，精密称定，用上述内标溶液稀释制成0.050%的溶液，作为对照品溶液，照气相色谱法（附录ⅤE）试验，以10%聚乙二醇20M为周定液，柱温为150℃，理论板数按二甲基砜峰计算不低于1500，二甲基砜峰与内标峰的分离度应大于2.0。

精密量取供试品溶液与对照品溶液各2µ1，分别注入气相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液中二甲基砜与二苯甲烷峰面积的比值，不得大于对照品溶液中二甲基砜与二苯甲烷峰面积的比值。

（二）外标法（外标一点法和工作曲线法）

按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按本文第二部分所述方法计算结果。

如检查艾片（左旋龙脑）中异龙脑和樟脑[5]，取本品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含15mg的溶液，作为供试品溶液。

另取异龙脑对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。

照气相色谱法（附录ⅥE）试验色谱条件与系统适用性试验聚乙二醇20000（PEG一20M）毛细管柱（柱长为30m，内径为0.53mm，膜厚度为1.0μm），柱温为170℃。

理论板数按龙脑峰计算应不低于3000。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

本品含异龙脑（C10H18O）不得过5.0％。

樟脑取[检查]异龙脑项下的供试品溶液作为供试品溶液。

另取樟脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

照前述方法测定，计算，即得。

本品含樟脑（C10H16O）不得过10.0％。

（三）面积归一法

粗略考察，需全部出峰且都被检测到，溶剂峰去掉，不易用于微量杂质的检查，一般用于同系物的含量测定。

如甘油（供注射用）检查中二甘醇、乙二醇与其他杂质[6]，取本品约10g，精密称定，置25mL量瓶中，精密加入内标溶液（每1mL中含0.5mg正己醇的甲醇溶液）5mL，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液。

取二甘醇、乙二醇适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每1mL,中含二甘醇、乙二醇各0.5mg的溶液。

精密量取5mL，置25mL量瓶中，精密加入内标溶液5mL,用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。

另取二甘醇、乙二醇、正己醇和甘油适量，精密称定，用甲醇溶解并稀释制成每1mL中含甘油400mg、二甘醇、乙二醇、正己醇各0.lmg的溶液，作为系统适用性试验溶液。

照气相色谱法（附录VE），用（6%）氰丙基苯基-（94%）二甲基聚硅氧烷为固定液（或极性相近的固定液）的毛细管柱，程序升温，起始温度为10CTC,维持4分钟，以每分钟50°C的速率升温至120°C，维持10分钟，再以每分钟50°C的速率升温至220°C，维持6分钟；进样口温度为200°C;检测器温度为250°C；。

取系统适用性试验溶液1µL，注入气相色谱仪，记录色谱图，各组分色谱峰之间的分离度应符合要求。

取对照品溶液重复进样，二甘醇和乙二醇峰面积与内标峰面积比值的相对标准偏差均不得大于5%。

依次精密量取供试品溶液和对照品溶液各1µL，注入气相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算，供试品中含二甘醇与乙二醇均不得过0.025%;如有其他杂质峰，扣除内标峰按面积归一化法计算，单个未知杂质不得过0.1%;杂质总量（包含二甘醇、乙二醇）不得过1.0%。

又如硬脂酸镁检查中硬脂酸与棕榈酸相对含量测定[7]，取本品0.lg，精密称定，置锥形瓶中，加三氟化硼的甲醇溶液〔取三氟化硼一水合物或二水合物适量（相当于三氟化硼14g），加甲醇溶解并稀释至100mL，摇匀〕5mL，摇匀，加热回流10分钟使溶解，从冷凝管加正庚烷4mL，再回流10分钟，放冷后加饱和氯化钠溶液20mL，振摇，静置使分层，将正庚烷层通过装有无水硫酸钠0.lg（预先用正庚烷洗涤）的玻璃柱，移入烧杯中，作为供试品溶液。

照气相色谱法（附录VE）试验。

用聚乙二醇20M为固定相的毛细管柱，起始柱温70°C，维持2分钟，以每分钟5°C的速率升温至240°C，维持5分钟；进样口温度为220°C，检测器温度为260°C。

分别称取棕榈酸甲酯与硬脂酸甲酯对照品适量，加正庚烷制成每1mL中分别约含15mg与1Omg的溶液，取1μL注入气相色谱仪，棕榈酸甲酯峰与硬脂酸甲酯峰的分离度应大于3.0。

精密量取供试品溶液1mL，置100mL量瓶中，用正庚烷稀释至刻度，摇匀，取1μL注入气相色谱仪，调节检测灵敏度，使棕榈酸甲酯峰与硬脂酸甲酯峰应能检出。

再取供试品溶液1μL注入气相色谱仪，记录色谱图，按下式面积归一化法计算硬脂酸镁中硬脂酸在脂肪酸中的百分含量。

硬脂酸百分含量（％）=

*100%

式中A为供试品中硬脂酸甲酯的峰面积；

B为供试品中所有脂肪酸酯的峰面积。

同法计算硬脂酸镁中棕榈酸在总脂肪酸中的百分含量。

硬脂酸相对含量不得低于40%,硬脂酸与棕榈酸相对含量的总和不得低于90%。

（四）标准溶液加入法

如检查苯甲醇中的苯甲醛[8]，取本品作为供试品溶液；另取苯甲醛约50mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水振摇使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

照气相色谱法（附录VE）试验，以聚乙二醇20M为固定液，涂布浓度约为10%;进样口温度为200°C;检测器温度为250°C;柱温为130°C。

精密量取同体积的供试品溶液与对照品溶液，注入气相色谱仪，记录色谱图。

按外标法以峰面积计算，含苯甲醛不得过0.2%。

又如检查依托咪酯注射液中的1,2-丙二醇[9]，取正辛醇适量，用甲醇溶解并稀释制成每1mL中含0.2mg的溶液，作为内标溶液。

精密量取本品1mL置于100mL量瓶中，用内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取5mL，置50mL量瓶中，用内标溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另精密称取1，2-丙二醇对照品适量，用内标溶液定量稀释制成每1mL中含1,2-丙二醇0.35mg的溶液，作为对照品溶液。

照气相色谱法（附录VE）测定。

以聚乙二醇（或极性相近）为固定液；程序升温：

初始温度为120°C,维持3分钟，以每分钟10°C的速率升温至230°C,维持5分钟；进样口温度为220°C；检测器温度为250°C。

取1,2-丙二醇、1,3-丙二醇与二甘醇适量，用内标溶液溶解并稀释制成每1mL中分别含0.35mg的混合溶液，取1μL注入气相色谱仪，记录色谱图。

出峰顺序依次为内标物、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇与二甘醇，各相邻峰之间的分离度均大于2.0。

理论板数按1,2-丙二醇峰计算不低于5000。

再分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各注入气相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算，每1mL中含1,2-丙二醇应为315mg～385mg。

四气相色谱法在含量测定中的应用

（一）内标法（内标校正因子法和内标工作曲线法）

如扑米酮片的含量测定[10]，照气相色谱法（附录VE）测定。

色谱条件与系统适用性试验以硅酮（或极性相近）为固定相；涂布浓度为3%；柱温为260°C。

扑米酮峰与内标物质峰的分离度应符合要求。

校正因子测定,取N-苯基咔唑适量，用甲醇溶解并制成每1mL中含2.4mg的溶液作为内标溶液。

取扑米酮对照品约0.15g，精密称定，置50mL量瓶中，精密加入内标溶液25mL,振摇使扑米酮溶解（必要时加热使溶解），用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取对照品溶液1μL，注入气相色谱仪，计算校正因子。

测定法,取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（相当于扑米酮0.15g），置50mL量瓶中，精密加入内标溶液25mL和甲醇10mL,水浴上加热5分钟，并时时振摇，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1μL，注入气相色谱仪，按内标法以峰面积计算，即得。

（二）外标法（外标一点法和工作曲线法）

如小儿感冒口服液中百秋李醇的含量测定[11]，照气相色谱法（附录ⅦE）测定。

色谱条件与系统适用性试验以甲基聚珪氧烷为固定相的毛细管柱（柱长为30m,内径为0.22mm，膜厚度为0.25μm）；柱温为程序升温，初始温度110°C，以每分钟5°C的速率升温至160°C，保持20分钟；分流进样。

理论板数按百秋李醇峰计算应不低于50000。

对照品溶液的制备,取百秋李醇对照品适量，精密称定，加正己烷制成每1mL含0.lmg的溶液，即得。

供试品溶液的制备精密量取本品100mL，照挥发油测定法（附录XD）试验，自测定器上端加水至充满刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，再加正己烷5mL,连接回流冷凝管，加热并保持微沸4小时，放冷，待溶液分层清晰后，分取正己烷液，置10mL量瓶中，用少量正己烷分次洗涤挥发油测定器内壁，正己烷洗液并同一量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，即得。

测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

本品每1mL含广藿香以百秋李醇（C15H26O）计，不得少于8.5μg。

又如丙二醇的含量测定[12]，照气相色谱法（附录VE）测定。

色谱条件与系统适用性试验以聚乙二醇20M为固定相；起始温度为130°C，维持1分钟，以每分钟10°C的速率升温至240°C，维持1分钟，进样口温度230°C，检测器温度250°C。

理论板数按丙二醇峰计算不低于10000。

测定法取本品，精密称定，用无水乙醇稀释制成每1mL中约含1mg的溶液，精密量取1μL注入气相色谱仪，记录色谱图；另取丙二醇对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

（三）面积归一法

如硬脂酸的含量测定[13]，照气相色谱法（附录VE）测定。

色谱条件与系统适用性试验用聚乙二醇20M为固定液的毛细管柱；起始温度为170°C，维持2分钟，再以每分钟10°C的速率升温至240°C，维持数分钟，使色谱图记录至除溶剂峰外的第二个主峰保留时间的3倍；进样口温度为250°C；检测器温度为260°C。

硬脂酸甲酯峰与棕榈酸甲酯峰的分离度应大于5.0。

测定法，取本品约O.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加三氟化硼的甲醇溶液（13%〜15%）5mL振摇使溶解，置水浴中回流20分钟，放冷，用正己烷10〜15mL转移并洗涤至分液漏斗中，加水10mL与氯化钠饱和溶液10mL，振摇分层，弃去下层（水层），正己烷层加无水硫酸钠6g干燥除去水分后置25mL量瓶中，用正已烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取硬脂酸对照品约50mg与棕榈酸对照品约50mg，同上法操作制得对照

品溶液。

精密量取供试品溶液与对照品溶液各1（J注入气相色谱仪，记录色谱图。

按面积归一化法以峰面积计算供试品中硬脂酸（C18H3602）与棕榈酸（C16H3202）的含量。

药典中还有许多药物的检测运用了气相