蛋白科学SOP考核卷一大综合试题及答案.docx
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蛋白科学SOP考核卷一大综合试题及答案
蛋白科学SOP考核卷一——大综合试题及答案
1.A260/A280＞2.0，说明质粒大概率被（）污染[单选题]*
A、RNA（正确答案）
B、蛋白质
C、酒精
D、盐
2.A260/A280小于1.8，说明质粒大概率被（）污染[单选题]*
A、RNA
B、蛋白质（正确答案）
C、酒精
D、盐
3.CIP过程中MabselectSureLx通常使用NaOH浓度是多少？
[单选题]*
A、0.1M（正确答案）
B、0.5M
C、1M
D、2M
4.CIP过程中prismA通常使用NaOH浓度是多少？
[单选题]*
A、0.1M
B、0.5M（正确答案）
C、1M
D、2M
5.SDS-PAGE样品处理时，非原样品如何处理？
[单选题]*
A、加入5×non-reducingbuffer（正确答案）
B、加入5×reducingbuffer
C、加入5×reducingbuffer,100℃，加热4~10min
D、加入5×non-reducingbuffer,100℃，加热4~10min
6.SDS-PAGE样品处理时，还原样品如何处理？
[单选题]*
A、加入5×non-reducingbuffer
B、加入5×reducingbuffer
C、加入5×reducingbuffer,100℃，加热4~10min（正确答案）
D、加入5×non-reducingbuffer,100℃，加热4~10min
7.保存填料使用的试剂为（）。
[单选题]*
A、0.1MNaOH
B、20%乙醇（正确答案）
C、异丙醇
D、10%甘油
8.当质粒载体为pET28a,需要进行原核表达时，选用（）进行转化.[单选题]*
A、DH5α
B、TOP10
C、BL21DE3（正确答案）
9.电泳仪设置条件为电压多少？
时间多久？
[单选题]*
A、160V,20min
B、100V,20min
C、140V,35min（正确答案）
D、160,25min
10.灭菌参数（）[单选题]*
A、121℃20min（正确答案）
B、100℃20min
C、121℃50min
D、200℃15min
11.灭菌锅没水时应加什么水（）[单选题]*
A、自来水
B、超纯水（正确答案）
C、无菌水
D、重蒸水
12.为保证SDS-PAGE胶图条带清晰，样品上样量通常为（）μg。
[单选题]*
A、1（正确答案）
B、2
C、4
D、5
13.无titer的上清上样量通常为（）μl。
[单选题]*
A、10
B、20（正确答案）
C、40
D、50
14.以下哪种情况可以打开灭菌器拿出培养基（）[单选题]*
A:
设置的灭菌时间到了就可以拿出
B:
随时可以拿出
C:
温度70℃左右，压力表显示为0时（正确答案）
15.预制胶拆封后首先要做的步骤是（）。
[单选题]*
A、拔梳子
B、撕密封条（正确答案）
C、装胶板
D、加样
16.转化后培养时间应小于（）h[单选题]*
A、24
B、20
C、16（正确答案）
D、8
17.转化后涂布的平板放置方式：
[单选题]*
A、倒置（正确答案）
B、盖子朝上
C、都可以
18.His标签蛋白纯化时，洗脱液配方包括哪些？
*
A、500mMNaCl（正确答案）
B、50mMNaCl
C、20mMPB（正确答案）
D、40~100mM咪唑（正确答案）
19.MOPS缓冲液适用于哪些情况？
*
A、180kDa以内蛋白
B、分子量大的蛋白（正确答案）
C、IP156项目（正确答案）
D、PP062项目
E、IP153
20.电泳胶进行染色时，染色时长一般为多久？
*
A、30min（正确答案）
B、10min
C、染上色就可以（正确答案）
21.配置1LLB培养基，以下哪些预混干粉的重量在允许范围内（）*
A、25.2g（正确答案）
B、24.5g（正确答案）
C、26g
D、25.8g
22.实验室常备了三种感受态细胞，分别是A:
DH5α、B:
TOP10、C:
BL21DE3，当构建质粒时，选用（）.*
A、DH5α（正确答案）
B、TOP10（正确答案）
C、BL21DE3
23.使用超滤离心管时，说法正确的有*
A、最大离心力为4000g（正确答案）
B、可以把离心管装满
C、离心温度一般设为4℃（正确答案）
D、使用时，可以不用看规格
24.加入LYS后如果还是有白色絮状物该怎么办[填空题]*
_________________________________（答案：
再加入几毫升的LYS混合直至无白色絮状物，然后NEU的体积也相对于增加，保持LYS和NEU体积相等。
）
25.某样品浓度为3.5mg/ml，理论分子量230kd需对其进行非还原处理。
请写出计算步骤，并写明使用试剂种类与用量。
[填空题]*
_________________________________
26.培养完成的细胞料液需要做哪些处理，请按顺序写[填空题]*
_________________________________（答案：
a）测活率，密度，titer;b）洗离心杯，离心过滤细胞液;c）贴好标签放入4℃冰箱;d）置于4℃保存，暂存时间不超过3天）
27.请简述保菌流程[填空题]*
_________________________________（答案：
超净台中取300μL60%甘油于冻存管；取700μL新鲜菌液混匀；贴上标签，登记入库，-20℃冻存）
28.请简述质粒转化的流程[填空题]*
_________________________________（答案：
取50μL感受态细胞，超净台中加入10ng质粒；冰浴30min；热激90s；立即冰浴2min；加入450μL无抗LB，37℃培养45-60min；1000rpm离心3min，超净台中去除300μL上清液，混匀，取100μL涂布于ampLB平板；37℃培养箱倒置培养15h）
29.请写出LB固体培养基配方[填空题]*
_________________________________（答案：
25g/LLBBroth+1.5%-2%琼脂粉）
30.请写出LB液体培养基配方[填空题]*
_________________________________（答案：
25g/LLBBroth或5g/L酵母浸粉、10g/L胰蛋白胨、10g/L氯化钠）
31.瞬转的核心材料有哪些？
[填空题]*
_________________________________（答案：
a）瞬转细胞;b）150mMNaCl,Feed,VPA,抗结团剂;c）瞬转试剂（Fectorpro，PEI）;d）瞬转质粒）
32.瞬转的目的是什么？
[填空题]*
_________________________________（答案：
看瞬转表达量，提高瞬转蛋白通量，获得瞬转蛋白）
33.瞬转中（表达中）的细胞需要做哪些处理？
[填空题]*
_________________________________（答案：
a）测Glu，测Gln;b）测titer,测活率密度;c）补料;d）加抗结团剂）
34.细菌接种后需要做哪些处理（用于大抽），请按顺序写[填空题]*
_________________________________（答案：
a）若没有库存甘油菌，应先保种;b）洗离心杯;c）菌液离心去上清;d）测菌的湿重）
35.现有10μL质粒，浓度为20ng/μL，请给一个合理的质粒稀释方案以达到SOP中质粒转化的浓度要求。
[填空题]*
_________________________________（答案：
取5μL质粒与5μL超纯水混匀）
36.质粒抽完后需要做哪些事情[填空题]*
_________________________________（答案：
打标签，贴标签，登记入库，出大抽报告单）
37.His标签的蛋白洗脱后能用1MTris调节pH。
[判断题]*
对
错（正确答案）
38.pI指的是等电点，调节pH时一定要调到7.[判断题]*
对
错（正确答案）
39.293瞬转第二天细胞补料添加______[填空题]*
空1答案：
5%Feed
40.293细胞比较适宜的瞬转密度是（~）x106cells/ml[填空题]*
_________________________________（答案：
1.5~2）
41.293细胞传代的密度应在_________x 106 cells/ml，活率 ______ 以上[填空题]*
空1答案：
1~2
空2答案：
98%
42.AC是指______[填空题]*
空1答案：
亲和色谱层析
43.CHO细胞比较适宜的瞬转密度是（~）x106cells/ml[填空题]*
_________________________________（答案：
2.5~3）
44.CHO细胞传代的密度应在 ______ x 106 cells/ml，活率 ______ 以上[填空题]*
空1答案：
2~3
空2答案：
98%
45.CHO细胞瞬转第二天补料添加______[填空题]*
空1答案：
10%Feed
46.CV指的是什么？
[填空题]*
_________________________________（答案：
柱体积）
47.传代前先加培养基，培养基要 ______ ，然后加入细胞[填空题]*
空1答案：
先预热
48.传代中的细胞是否需要补料？
___[填空题]*
空1答案：
不需要
49.纯化需要当天配制适量的平衡液以及洗脱液，当使用2根5ml prisma预装柱进行纯化时，至少需要配制的平衡液和洗脱液多少？
[填空题]*
_________________________________（答案：
150ml和50ml）
50.大抽试剂使用前检查溶液是否有______，如果有，放在______℃水浴锅里加热[填空题]*
空1答案：
沉淀
空2答案：
37
51.富集细菌用于大抽或超声破碎的离心条件是______g，______min[填空题]*
空1答案：
5000
空2答案：
30
52.加入NEU后需离心______g，______min[填空题]*
空1答案：
8228
空2答案：
10
53.检测质粒浓度时，可以从结果中得出两个关于质粒质量的信息，分别是什么？
[填空题]*
_________________________________（答案：
浓度、纯度）
54.将收获液（细胞料液）离心以收集上清的离心条件是______rpm，______min[填空题]*
空1答案：
1000
空2答案：
30
55.每瓶培养基中谷氨酰胺加 ______ ml，大约在 ______ mmol/L[填空题]*
空1答案：
15
空2答案：
4
56.灭菌时，摇瓶装液量不宜超过摇瓶体积的多少?
[填空题]*
_________________________________（答案：
50%）
57.培养基库存小于 ______瓶时需申购，补料小于 ______ 瓶时需申购[填空题]*
空1答案：
10
空2答案：
2
58.亲和纯化流程--10步[填空题]*
_________________________________（答案：
CIP,冲洗，平衡，上样，平衡，洗脱，CIP，冲洗，平衡，保存。
）
59.试剂______放在______℃水浴锅里加热会更有利于质粒洗脱下来[填空题]*
空1答案：
Elution（洗脱液）
空2答案：
60
60.试剂LYS加入后______现象，加入NEU后______现象[填空题]*
空1答案：
溶液变蓝色
空2答案：
白色絮状物
61.瞬转过程中测糖结果需×______，最终范围在______mmol/L[填空题]*
空1答案：
0.16
空2答案：
4~6
62.细胞复苏在水浴锅时长 ______， 复苏至少______ 以上可以扩大培养[填空题]*
空1答案：
小于2min
空2答案：
3代
63.细胞建库中将细胞沉降且对细胞损伤最小的离心条件是 ______ g， ______ min[填空题]*
空1答案：
350
空2答案：
10
64.细胞摇瓶的最佳使用容量是总体积的 ______[填空题]*
空1答案：
三分之一
65.新开封的RES需加入______，然后放在______保存[填空题]*
空1答案：
RNA酶
空2答案：
4℃冰箱
66.一般情况下，培养基的工作体积为摇瓶体积的多少?
[填空题]*
_________________________________（答案：
三分之一）
67.一只细胞用 ______月后需重新复苏新的细胞[填空题]*
空1答案：
3
68.异丙醇体积加______[填空题]*
空1答案：
溶液体积的70%
69.质粒转化热激温度,时间分别是多少？
[填空题]*
_________________________________（答案：
42℃，90s）
70.转化时，在感受态细胞中加入质粒后，需要冰浴多久？
[填空题]*
_________________________________（答案：
30min）
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