Agilent LC色谱及色谱柱疑难解答.docx

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AgilentLC色谱及色谱柱疑难解答

∙AgilentLC色谱及色谱柱疑难解答

出现倒峰的原因：

1.常为溶剂峰,流动相的紫外吸收大于样品的溶剂的紫外吸收,就产生倒峰.

2.样品中的杂质没有紫处吸收或吸收很小,而流动相紫外吸收大,如用甲醇时波长设定在220nm以下时,常出现这种现象.

3.进样过程中进入了空气也会导致的.

4.如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，会产生倒峰，必须用高纯度的溶剂作为流动相。

5.检测器的极性接反了，也会出现倒峰。

第一，用的是什么检测器？

如果是示差折光，那很正常；

第二，倒峰在什么位置？

如果是溶剂峰，也很正常，要去除的话，溶剂改用流动相；

第三，如果是紫外检测器（MWD,ORDAD）,有没有加参比波长？

如果有，去掉参比波长或另选合适的参比波长；

第四，如果是紫外检测器，流量池里是否有气泡产生？

1.抽滤或超声去除流动相里的气泡；2.检查在线脱气机（如果有的话）；3.调节背压；

第五，流动相是否在该波长（用紫外检测器的话）有较大的背景？

1.检查你用的溶剂的等级；2.检查色谱条件的合理性。

我认为是参比波长设置的问题，试着换个参比波长看看

多半是因为样品的ＰＨ值与流动相的ＰＨ值不一致造成的，解决办法：

加大盐的浓度，用流动相溶解样品即可．

流动相背景吸收波长低于检测波长

1.    组分的吸收小于流动相的背景吸收，可能原因是流动相中加入截止波长较大的成分或波长选择不合适

2.二极管阵列检测器中参比波长处吸收大于组分吸收；

１、    首先确定是还是柱还是检测器的问题：

换下柱看是否仍存在倒峰，如果不行再换检测器，以确定是否检测器或者柱的问题。

或者什么都不要换单纯换个其他化学成分，看是否是因为你的样品存在问题。

2、如果都做了，还是不行，就考虑是否流动相问题，一般DAD存在有规律倒峰的现象还真的不是很好解释，看您意思好象是倒峰只是跟着你的主成分走，这样你可以首先进个空白溶剂样品，看是否还有倒峰存在，如果空白样品没有倒峰那么就是你样品问题，是否你样品处理的有问题，

一般液相对流动相的PH控制在大概2.5-7.5范围，如果过酸或过碱会导致填料被破坏引起成分在柱上的洗拖保留发生变化而导致规律倒峰出现也有可能，测下您的流动相PH以保证这个没问题。

样品中残留的一点酸或碱应该没问题，因为酸碱在柱上基本没有保留，且量小应该没影响

倒峰的出现，我个人认为是色谱柱的残余硅羟基所致，同一个色谱条件，我曾经分别用非端基封尾柱和端基封尾柱考察，前者即便是进流动相也会出现负峰，后者则没有，推断应为残余硅羟基对进样样品中的部分离子造成吸附，使进样部分的液体与流动相产生差异，由于溶质离子经过检测器时，紫外吸收信号减小，所以形成负方向的色谱峰。

1.样品引入

2.样品与流动相反应所致

3.检测条件不合适,建议换二极管阵列查找

4.外部引入的污染

  最后一点几率很小,但也会存在的,就是仪器设备的系统误差

∙

∙如何避免基线飘移？

基线向上飘移表明系统中有污染。

请冲洗色谱柱，净化样品，然后使用新溶剂。

向下飘移通常是由于检测室或柱箱中的温度波动的原因。

减小室温变化，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管保温隔热。

向下飘移也可能由于溶剂的纯度不是HPLC级别的溶剂而且此纯度低的溶剂在紫外有吸收。

∙如何减少基线噪音？

无规律噪音可能与污染有关。

请冲洗色谱柱，对样品做合适的前处理以避免污染，并使用HPLC级别的溶剂。

连续噪音有可能由检测器或泵造成。

要确定问题是否发生在检测器还是在泵，请先关泵停掉流量，监测基线。

如果此时基线平稳，则噪音可能与泵有关系。

使用ChemStation在线诊断或LC手持控制器检查泵方面的故障。

如果停泵后噪音继续存在，则说明噪音与检测器有关。

首先，请尝试更换灯。

如果问题依然存在，则请与安捷伦科技公司联系。

在中国，请拨打8008203278。

∙什么原因导致基线毛刺？

这很有可能是流动池内有气泡。

请先停泵来进行确认,如果毛剌消失，则很有可能是由于流动池内有气泡。

需要冲洗流动池。

如果毛剌仍然存在，则需检查检测器本身的电噪音有关。

如果需要更多帮助，则请致电安捷伦科技公司。

在中国，请拨打8008203278。

∙什么原因导致基线波动？

基线波动有可能与实验室的温度及湿度变化有关系。

需确保室温及湿度稳定，将仪器从通风橱中取出，并将色谱柱和毛细管进行隔热保温。

∙我的色谱图上的峰有拖尾现象。

如何改善峰形？

可能的原因：

1.系统内的死体积大

2.样品在色谱柱上有吸附

3.色谱柱适用时间很长

建议用户：

1.尽量减少流动相管线的死体积，确保管线接头的连接合适减小死体积，由于不同生产厂家的管线的接头和密封垫圈有可能不一样，尽量使用安捷伦公司的管线接头和密封垫圈。

2.使用洗脱更强的流动相

3.更换新色谱柱

∙如何排除流动相中的气泡？

如何排出流动池中的气泡？

避免流动相中产生气泡的最佳方式是将流动相经脱气装置进行脱气。

如果没有脱气装置，则可以在流动相溶剂瓶中通入氦气进行脱气。

也可以在检测器的出口端加一根细管线以调节流动池中的背压，但必须注意不要超过流动池的最大压力，否则会造成流动池漏液或流动池损坏。

如果流动池中出现气泡，则先摘下色谱柱，用一根管线直接将流动相接入检测器的入口。

将异丙醇以较大的流速注入流动池。

直到基线上看不到毛刺为止。

气泡就应该清除掉了。

∙把甲苯（toluene）用作衡量GPC色谱柱效率的标准是否恰当？

是的，比较恰当。

如果选择这种评估标准，小分子甲苯不会与填料发生相互作用，但是会扩散到GPC色谱柱填料的所有细孔中。

通过这种实验，能够通过洗脱峰宽度评定填料微粒大小以及柱床填充效果如何。

这些是衡量效率时需要了解的内容。

大多数制造商通常推荐用这个样品来实验这些色谱柱的效率。

还能通过其它标准来确定GPC色谱柱的其它特征，例如排斥体积。

∙HPLC色谱中的峰板（peakplate）有什么作用？

这些峰板（peak plate）可以让您比较不同色谱柱的效率，衡量方法是对比色谱图中的峰宽和保留的峰宽。

一般而言，对于相同的保留时间，峰越窄，色谱柱的效率越高，效率越高，色谱柱就有越多的峰板（peak plate）。

HPLC 仪器一般通过测量峰宽（通常是半高）来确定色谱板或效率，采用的公式如下：

N = efficiency = plates = 5.54（tR/w1/2）2 

w1/2 = peak width at half-height in min.

tR = retention time in min.

色谱柱制造商会提供色谱柱的效率，通常包含在色谱柱报告中。

有关色谱板和色谱柱效率与分离度和被分析物之间关系的详细讨论，请参考文本 Practical HPLC Method Development（微粒HPLC方法开发），作者是Lloyd R. Snyder、Joseph J. Kirkland和 Joseph L. Glajch， Wiley-Interscience ，第二版，1997年。

∙HPLC中为什么会出现有节奏的波浪状基线？

这通常不是色谱柱的问题。

最可能的原因是泵系统出了故障。

a） 如果您有一个等度泵，那么泵密封圈可能已磨损。

通常您的泵会有两个活塞和密封圈。

其中一个密封圈可能比另一个磨损得更厉害，这会导致流速和压力发生非常有节奏的变化，检测器同样能看到这个变化。

通过改变流速，可以确认泵密封圈是否已磨损。

如果泵密封圈已磨损，基线波动频率（以时间为单位）会与流速的增加/降低成比例。

解决方法就是更换泵密封圈。

b） 如果您有多个泵系统（二元、三元或者四元），那么可能是泵密封圈出了问题，但也可能是混合不充分或比例阀出了故障。

增加一根混合色谱柱可以解决混合不充分的问题（让制造商提供建议）， 比例阀出故障的话就呼叫维修中心。

另一个可能的原因就是泵老化，尽管这些信号波动的周期性并不足以证明泵出了故障。

通过上面介绍的流速实验可以确认是否泵出现故障。

如果流速变化时，信号波动频率（以时间为单位）没有发生变化，那么可能是泵出了故障。

∙什么时候会看到伸舌峰（peakfronting）？

如何排除故障？

伸舌峰（peak fronting）可能由多种情况引起。

最有可能导致伸舌峰（peak fronting）的情况是色谱柱过载。

在这种情况下，通常会发现峰保留时间稍稍缩短。

这也是最简单的检查方法，因为只要注射少量样品并检查峰形就能发现问题。

但是至少还有其它四种原因导致伸舌峰（peak fronting）。

这四种原因分别是色谱柱沟流、被分析物和硅之间的离子干扰、被分析物在流动相中溶解性差以及流动相和键合相之间的湿润性问题。

色谱柱沟流会导致所有的峰都变为伸舌峰（peak fronting），或者至少让色谱图中最大的峰变成伸舌峰（peak fronting）（如果其它峰过于小的话）。

如果出现这种问题，需要更换色谱柱。

用一根新色谱柱来研究这个问题。

增加缓冲液离子强度或者改变流动相的pH值，通常能改善引发伸舌峰（peak fronting）的离子相互作用。

增加离子强度能够降低硅和离子被分析物之间的相互作用，而改变pH值能起到同样的效果。

需要评定溶解性，尽力提高被分析物的溶解性并评估最后的色谱图。

例如，可以增加样品的声处理时间并把它重新注入或者让它溶解在溶剂中（在该溶剂中样品具有很好的溶解性），然后稀释并注入流动相。

此外，所有怀疑出现溶解性问题的样品都应进行过滤。

还可以通过脱机方式混合样品和流动相，观察在流动相中是否明显溶解。

湿润性是指流动相完全渗透键合相的能力，在这种情况下，被分析物能与所有的键合相发生相互作用。

如果C18色谱柱结合使用高度水性的流动相，可能不会到达完全的湿润性。

键合相会自己折叠起来。

结果就可能会丢失保留时间并导致峰变形。

如果可能的话，增加流动相中的有机量并重新评估峰形。

否则，您可能需要考虑选择专门为极高水性流动相而设计的色谱柱。

这些是导致伸舌峰（peak fronting）的主要原因及其解决方法。

请注意，这些问题可能会导致峰拖尾，解决方法与伸舌峰（peak fronting）的解决方法相同。

∙HPLC样品过滤得最好的膜过滤器是什么?

"再生纤维素"过滤器时推荐的HPLC样品过滤器，因为这种过滤器提供能防止样品过滤问题的单一、近乎通用的膜过滤方法.

安捷伦的再生纤维素注射器过滤器产品有如下很多优点

1.是化学惰性和化学稳定性高的过滤器，提供改善的流速和最大的回收率.

2.提供一种类型的过滤器取代多种滤膜的方法—效率不降低.

3.对于生物样品，在流行的示售膜中安捷伦的膜过滤器具有最低的蛋白键合性能.

4.经过HPLC分析验证，具有低的可萃取性，包含一份分析证明.

∙如何选择液相色谱保护柱？

保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞,及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。

为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在1:

15至1:

25之间。

在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。

尽量使保护柱与分析柱近似。

在我们的目录里，将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。

∙色谱图上出现鬼峰。

如何消除？

可能的原因：

1.上次进样遗留组分产生

2.有污染

3.有气泡

4.色谱柱问题

5.保护柱失效

建议用户：

1.做样品后应保证有足够时间冲洗色谱柱,。

有必要的话在运行结束后使用更强溶剂冲洗色谱柱。

2.洗脱原色谱柱中的原有污染。

3.为确保系统中没有气泡，只使用彻底脱气后的溶剂。

4.更换色谱柱。

5.更换保护柱。

6.检查流动相纯度。

7.检查样品中的其他成分。

∙为什么HPLC分析的样品要过滤?

1.样品过滤保护您的色谱柱,特别是新的5微米以下粒径填料的色谱柱,毛细管柱和柱入口筛板,以防止样品中的颗粒物堵塞色谱柱.延长柱寿命.

2.它防止您的进样阀组件被样品颗粒物损坏、刻划或增加磨损.最小化仪器的停机时间.

∙怎样知道液相分离对流动相的pH值敏感？

测试方法对流动相pH值变化的灵敏度。

不是所有的组分，也不是所有的方法对流动相的pH值敏感。

中性组分的保留不受流动相pH值的影响。

然而，离子化的组分的保留—碱性的和酸性的组分—在pH值变化时明显地变化。

碱性组分的保留变化最明显，pH值超过5，而酸性组分的保留变化在pH值3到5之间。

因此，如果有碱或酸性组分，则建立一个健全的方法，需要在几个不同的pH值之间，分别作出评价。

在保持所有其它条件不变时，改变流动相的pH值，并且测试对分离的影响。

∙如何减小方法对pH值敏感的复制问题？

1.尝试在低的pH下建立方法。

例如,如果你正在分离碱性组分，使流动相的pH值低于3，此时因pH值的小的变化，其保留受影响很小。

通常要使分离不敏感，改变流动相pH值时，至少不超过分析物的pKa的1个pH单位。

2.选择流动相pH值适当的缓冲液。

适当的缓冲液的选择，是缓冲液的pH值的范围，与所需要的流动相的pH值相匹配。

也就是说，使用适当含量的缓冲液，通常为25到50mM,具有良好的缓冲能力。

3.一定要用同样方式准备流动相，也一定要用同样的方式测试流动相的pH值。

例如

∙反相HPLC色谱柱的推荐再生步骤是什么？

 1. 取下色谱柱，然后重新连接到色谱仪上，让液体/气体反方向流过色谱柱。

 2. 用HPLC 级水冲洗掉盐/缓冲液。

以1毫升/分钟的速度把 25 毫升水泵入色谱柱。

 3. 用 25 毫升异丙醇冲洗色谱柱。

 4. 用 25 毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。

 5. 用 25 毫升正己烷冲洗色谱柱。

 6. 再次用25毫升二氯甲烷冲洗色谱柱。

 7. 用25毫升异丙醇冲洗色谱柱。

 8. 按正确的流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上。

用不含缓冲液的流动相冲洗色谱柱，然后重新倒入缓冲液。

 9. 用 25 到 50 毫升流动相平衡色谱柱。

10. 注入标准物或样品，检查性能是否恢复。

注释：

对于某些污染色谱柱的残留化合物，二甲基甲酰胺 

∙正相HPLC色谱柱的推荐再生步骤是什么？

1. 按相反的流动方向，把色谱柱连接到色谱上。

2. 用50毫升 50:

50 甲醇：

氯仿（methanol:

chloroform）溶液冲洗色谱柱。

3. 用50毫升乙酸乙酯（ethyl acetate）冲洗色谱柱。

4. 按正确的流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上。

5. 用 50 毫升流动相平衡色谱柱。

6. 注入标准物或样品，检查性能是否恢复。

小心：

总的来说，在考虑更换滤头之前，用适当的溶剂清洁和反冲HPLC色谱柱值得一试。

总是存在这样的风险，就是更换滤头的时候可能会丢失少量的填料，这会降低色谱柱的效率。

此外，极力推荐用 0.5?

m串联过滤器捕获微粒材料并且使用适当的强溶剂来清洗色谱柱。

∙如何正确清洁GPCHPLC色谱柱（安全的方法）？

反方向冲洗色谱柱，冲洗期间不要连接到检测器并且采用二分之一的推荐流速进行冲洗（让压力保持在推荐最大值以下）。

首先，选择一种可以溶解色谱柱中污染物的溶剂。

大多数 GPC 色谱柱是 PS-DVB ，在使用溶剂之前需要检查溶剂兼容性。

与常规洗提溶剂相比，许多清洁溶剂具有较高的黏性，因此必须采用较低的流速并且需要特别注意压力。

阴离子样品能吸附到 PS-DVB上，如果这些样品污染了您的GPC色谱柱，那么建议您使用含盐的清洁溶剂。

查看这种色谱柱适合使用哪类盐。

在某些情况下，根据吸附材料的极性，清洗的时候可能需要使用经过能与有机溶剂相溶的酸性物（蚁酸或醋酸）或碱性物（三羟乙基胺）（检查pH范围）或一些水改性后的有机溶剂。

如果更多的疏水性材料被保留，推荐提高温度并使用适当的有机溶剂。

您需要再一次核对色谱柱允许的最大温度范围。

如果仔细地进行清洗，色谱柱不会因为溶剂转换而导致性能下降。

∙哪类色谱柱会在高于pH7的酸碱度环境下溶解？

市面上销售的许多硅基HPLC填料会在pH 7 条件下溶解，因为硅会在pH 7 条件下溶解。

因此，安捷伦开发出一种技术，可以显著降低硅溶解并且扩展硅基色谱柱的可用pH值范围。

ZORBAX Extend-C18 可以在高于pH 8 （甚至高达pH 11.5）的条件下使用。

双齿键合是增强稳定性的关键，同时确保只有硅才能提供的高效率。

∙如何估计是否出现色谱柱塌陷？

首选检查您的方法并确定色谱柱的操作pH值是否超过推荐标准。

这可能是色谱柱塌陷的主要原因，因为硅会溶解，从而导致色谱柱塌陷。

此时需要考虑样品注射溶剂以及流动相。

如果出现色谱柱塌陷，您会看到色谱图中的每个峰值上，峰形都会发生变化（峰拖尾、加宽或分叉）。

色谱柱塌陷通常不会只让色谱图中的一个峰值发生变化。

此外，通常也不会导致分析物保留度发生变化。

您还可以转动色谱柱，如果出现色谱柱塌陷，那么峰形也应发生变化。

检查是否出现色谱柱塌陷的最有效方法就是打开色谱柱，但是这是排除色谱柱故障时最后才能采取的方法。

∙如果色谱图中的一个峰出现拖尾，但是其它峰正常，可能出现什么故障？

由于我不了解样品的化学性和有关流动相或色谱柱的详细情况，所以我很难回答这个问题。

峰拖尾可能由多种原因引起，在回答您的问题之前，我想问您几个有关样品的问题。

由于您色谱图中大多数峰的形状都是完好的，只有一个峰出现拖尾，我猜想色谱柱和样品的化学性引起二次反应，从而导致峰拖尾。

更改流动相或选择另一个HPLC色谱柱能够减少这些二次反应。

∙能否用一些洗涤剂来清洁HPLC色谱柱？

不推荐用洗涤剂来清洁反相（RP）HPLC色谱柱。

离子洗涤剂通常是一端带一个离子化基团的长链碳化合物，一般用作离子配对试剂。

因为这些长碳链能与反相色谱柱的键合相很牢固地结合起来（例如，C18反相色谱柱柱的键合相能牢固地保留洗涤剂的长碳链）, 因此很难清除洗涤剂。

∙有些制造商说可以倒过来使用（较新的）色谱柱，这样能去从色谱柱前面清除堵塞物？

这是不是常规推荐方法？

或者是否取决于色谱柱？

HPLC 色谱柱比以前更有效并且填充得更好，因此，通常建议大多少倒相和正相硅基色谱柱采用这个方法。

当色谱柱入口出现高压，可以通过这个方法从色谱柱滤头去除微粒，但是并不是每次都起作用。

由于这不需要打开色谱柱，所以值得一试。

采用这个方法时，一定要从检测器上拆下色谱柱，这样能确保堵塞色谱柱的微粒不会从HPLC系统进入，或者您可以把滤头插到色谱柱的后端，但这可能无法再放回去。

还可以把色谱柱倒转过来，然后用强溶剂清洗/清洁色谱柱，以便去除吸附材料。

这样做有一个好处，就是色谱柱的其余部分不会受污染物影响。

在这个过程中，不要把色谱柱连接到检测器上。

∙H3PO4清洗HPLC色谱柱有什么目的？

经证明，磷酸洗涤剂能有效减少由于样品与HPLC系统中的金属络合而导致的拖尾。

一般建议用1%磷酸来清洗系统和色谱柱，以此消除这种拖尾现象，这很有效。

在安捷伦ZORBAXStableBond反相HPLC产品上使用这些推荐的清洗条件会取得非常理想的效果。

StableBondHPLC色谱柱在低PH条件下性能非常稳定-SB-C18色谱柱在0.8PH值和90度条件下可保持稳定。

如何肯定峰拖尾是由于金属络合而引起的？

只要辨别N或O原子上的孤对电子能否与金属螯合并形成5或者6元环。

金属络合物是一个普遍被忽视的峰拖尾成因，每个HPLC系统中都存在金属。

∙能否提供一种与我使用的LC色谱柱相同的色谱柱？

即使用同一种固定相，不同厂商的液相色谱柱也可能具有不同的保留时间。

虽然这里提供了一些不同厂商的色谱柱的参考数据，但这些数据在不同的色谱条件下会有所不同。

我们通常根据您的应用情况，向您推荐一种其它的色谱柱。

在此之前，我们需要您提供以下信息：

1.分析物的详细信息（样品的成分和要分析的成分）；

2.是否可以接受液相色谱条件的改变；

3.能否对您的方法进行一些调整。

如果您不能接受分析条件和/或保留时间的改变，则应该继续使用目前的色谱柱。

∙如何选择液相色谱保护柱？

保护柱的作用是用来防止分析柱被一些微粒物质堵塞,及在色谱柱上强吸附组分在色谱柱上吸附。

为防止样品的杂质不进入色谱分析柱,不出现不必要的峰展宽，保护柱与分析柱的体积比应在1:

15至1:

25之间。

在理想的情况下，保护柱的填料应与分析柱相同，以确保得到分析柱较好的色谱图。

尽量使保护柱与分析柱近似。

在我们的目录里，将分析柱和与其配套的保护柱列在一起。

∙改变填料颗粒大小和色谱柱的长度对液相色谱分离有什么影响？

如果填料颗粒大小减半，则理论塔板数加倍（假设柱长不变）。

如果填料颗粒大小减半，则柱压增加为原来的四倍。

如果柱长加倍，则理论塔板数加倍。

如果柱长加倍，则分析时间加倍。

随着柱长增加，柱压也线性地增加。

以下是一个根据上述信息选择色谱柱的示例：

一个装填10um填料的长度为200mm的色谱柱可生成6000块理论塔板，这是在很多情况下能提供比较适当的分离的色谱柱效率。

将颗粒大小由10um减小到5um，柱长仍为200mm，则可生成12000块理论塔板。

然而，这个色谱柱可生成相当于原来四倍的柱压。

通常情况下不需要生成12000块塔板，因此柱长可减半至100mm，结果生成6000块塔板，同时分析时间也缩短一半；柱压仅比最初装填10um填料的长度为200mm的色谱柱高两倍。

∙改变色谱柱直径对液相色谱分析有什么影响？

如果色谱柱直径减半，则灵敏性增加四到五倍（假设进样量不变）。

例如，等量的样品进样到内径为2.1mm的色谱柱比进样到内径为4.6mm的色谱柱所生成的峰高5倍左右。

只要线性流动保持不变，则柱效率、理论塔板数、反压和分析时间等参数均与色谱柱内径的减小无关。

∙改变填料孔径大小对液相色谱分离有什么影响？

填料孔径越小，允许的流动相线速度越高。

最佳流动相线速度取决于固定相的颗粒大小。

在最佳线速度时，色谱柱生成的理论塔板数最多。

对于内径为4.6mm的色谱柱，10um的颗粒流动相线速度为0.75ml/min或5um的颗粒流动相线速度为1.5ml/min时，塔板数最多。

∙什么原因导致柱效（理论塔板数）下降？

与色谱柱有关的原因：

原因

处理方法

色谱柱出现间断

使用类似的填料填充空隙或更换色谱柱

保护柱无法再用

更换保护柱

其他可能的原因：

柱外体积大、进样的样品量大、样品溶剂强度比流动相大、流动相的改变。

∙什么原因导致液相色谱分析的“神秘峰”？

与色谱柱相关的原因：

原因

处理方法

色谱柱污染

清洗或更换色谱柱

保护柱失效

更换保护柱

与色谱柱无关的原因：

流动相不纯、样品里有其他成分、系统里有气泡、电路问题。

∙如何避免峰拖尾和峰分叉？

与色谱柱相关的原因：

原因

处理方法

色谱柱污染

清洗或更换色谱柱

色谱柱填料有问题

反冲色谱柱

或更换进样口过滤片

色谱柱出现间断

更换色谱柱或填充空隙

保护柱失效

更换保护柱

样品分布差

改进色谱柱进样口的设计

与色谱柱无关的原因：

超柱体积过大、样