第十五章碳水化合物分析.ppt

第十五章碳水化合物分析.ppt

《第十五章碳水化合物分析.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第十五章碳水化合物分析.ppt（20页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

第十五章碳水化合物分析,Y,概述,总碳水化合物（100%）=100-（水分+粗蛋白质+粗灰分+粗脂肪）%,总碳水化合物,有效碳水合物,无效碳水合物,单糖、双糖、低聚糖、糊精、淀粉、糖原,果胶、半纤维素、纤维素、木质素,糖的分析方法：

物理法旋光法。

物理化学法3,5-二硝基水杨酸比色法、钼蓝法、蒽酮比色法、纸层析色谱法、液相色谱法。

化学方法斐林氏法、高锰酸钾法、碘量法、铁氰化钾法酶化学分析法。

第一节水溶性糖的测定,

（一）水溶性糖的提取热水浸提；75%乙醇浸提。

澄清与除干扰物（蛋白质、氨基酸、多糖与色素）试剂：

澄清剂要求：

除去干扰物，不吸附糖，不改变糖比旋光度。

中性乙酸铅色浅植物性样品；碱性乙酸铅色深样品；乙酸锌-亚铁氰化钾色浅富含蛋白质样品。

新型无铅沉淀剂,碱式氯化铝溶液：

称取50gAlCI36H2O，溶于适量的水，加入氨水至不再产生沉淀，真空抽滤，以蒸馏水洗涤沉淀至无Cl-，转人三角瓶，加24.5mll:

1盐酸，加热至溶解，最后调整溶液体积为100mL。

（二）水溶性单糖（还原糖）的测定,1、铜还的直接滴定法LaneEynonsmethod方法原理糖+斐林试剂糖酸+Cu2O+H2O亚甲基蓝指示剂：

氧化态为蓝色；还原态为无色。

用标准糖液滴定至无色。

方法要点：

严格按操作要求进行；“约测”与“精测”；滴定要在有水汽保护下进行，防烫伤；糖的含量可查表或从标准糖的滴定中求出。

2、高锰酸钾容量法Munson-Walkersmethod,方法原理糖+斐林试剂糖酸+Cu2O+H2O可测定Cu2O的量，计算糖的含量。

5Cu2O+Fe2（SO4）3+H2SO4CuSO4+FeSO4+H2O10FeSO4+2K2MnO4+8H2SO45Fe2（SO4）3+2MnSO4+K2SO4+8H2O上反应式可知10mol铜相当于2mol高锰酸钾，则每毫升摩尔浓度为1/5mol/LK2MnO4溶液相当的Cu量（x）为：

X=63.6mg,3、半微量法Shaffer-Somogysmethod,方法原理糖+斐林试剂糖酸+Cu2O+H2O用H2SO4酸化时，Cu2O溶解为Cu+。

索姆吉试剂中的和与在酸化同时发生如下反应：

KIO2+KI+3H2SO4K2SO4+3I2+3H2O试剂中KIO2的是定量加入的，所以生成的I2也是一定量的。

生成的I2与Cu+发生氧化还原反应消耗部分I2。

2Cu+I22Cu2+2I-溶液中的I2以淀粉为指示剂用Na2S4O6标准溶液滴定。

I2+2S2O32-2S4O62-+2I-实验同时做空白试验，则样品应消耗的Na2S2O3毫升数=V空白-V实测查表或用标准糖测量值比较计算糖含量。

本法适用于含糖量不太高的植物组织样品。

4、氰化盐碘量法常量法,方法原理还原糖与已知过量的铁氰化钾碱性溶液作用，生成亚铁氰化钾和糖酸：

糖+碱性铁氰化钾糖酸+亚铁氰化钾+H2O过量的铁氰化钾在HOAc存在下与KI作用，生成游离太的I2：

2Fe（CN）63-+2I-I2+2Fe（CN）64-加入硫酸锌，使生成的亚铁氰化钾形成白色沉淀亚铁氰化锌，以利反应进行。

2Fe（CN）64-+2Zn2+Zn2Fe（CN）6（白色）溶液中的I2以淀粉为指示剂用Na2S4O6标准溶液滴定。

I2+2S2O32-2S4O62-+2I-实验同时做空白试验，则样品应消耗的K3Fe（CN）6毫升数=V空白-V实测查表或用标准糖测量值比较计算糖含量。

5、蒽酮比色法微量法,方法原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水生成糖醛或羟甲基糠醛，可与蒽酮试剂反应生成蓝绿色的糠醛衍生物，用比色法测定（630nm）。

戊糖,已糖,浓H2SO4,-H2O,糠醛,羟甲基糠醛,蒽酮试剂,蓝绿色糠醛衍生物,方法评述方法的专一性差，所有糖类均有此反应，注意排除非糖的干扰。

不同糖与蒽酮试剂的显色深度不同，显色深浅顺序为：

果糖葡萄糖半乳糖，甘露糖五碳糖，注意不同糖的组成其显色深度不同。

6、3,5-二硝基水杨酸法,方法原理还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以，所得的结果乘以0.9。

方法评述方法的专一性差，所有糖类均有此反应，注意排除非糖的干扰。

7、苯酚比色法微量法,方法原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水生成糖醛或羟甲基糠醛，可与苯酚试剂反应生成橙红色的化合生生物，10100mg范围用比色法测定（480nm）。

方法评述方法的专一性差，所有糖类均有此反应，注意排除非糖的干扰。

颜色可稳定160min以上。

方法原理糖+斐林试剂糖酸+Cu2O+H2O蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比，可在590nm处比色测定。

8、斐林试剂比色法微量法,方法原理还原糖是具有羰基（C=O）的糖，能将其它物质还原而其本身被氧化。

（1）还原糖在碱性条件及有酒石酸钾钠存在下加热，可以定量地还原二价铜离子为一价铜离子，产生砖红色的氧化亚铜沉淀，其本身被氧化。

具体反应如下：

9、砷/磷钼酸比色法,

（2）氧化亚铜在酸性条件下，可将钼酸铵还原，还原型的钼酸铵再与砷酸氢二钠起作用，生成一种蓝色复合物（砷/磷）钼蓝，其颜色深浅在一定范围内与还原糖的含量（即被还原的Cu2O量）成正比，用标准葡萄糖与砷钼酸作用，比色后做标准，就可测得样品还原糖含量。

（三）糖料作物中蔗糖的测定旋光法,比旋20D指100mL溶液中含100g旋光物质，通过液层厚度（即管长l）为1分米（1dm）,在温度为20，钠光源（D=589.3nm）偏振面所旋转的角度。

蔗糖=+66.5;葡萄糖=+52.8;果糖=-92.8;麦芽糖=+118。

方法原理糖分子具有不对称碳原子，可使通过的偏振光的偏振面旋转。

当光的波长、温度和液层厚度一定时，溶液中蔗糖的浓度与偏振光面旋转角度成正比。

计算,偏振光面旋转角度。

0.75=常数K=100/（220D）；当糖的浓度以g/100mL表示时。

第二节淀粉的测定,

（一）淀粉测定待测液的制备酸水解法淀粉糖化酶-酸水解。

淀粉水解的中间产物以及与碘的呈色反应。

淀粉蓝糊精红糊精无色糊精麦崖糖葡萄糖碳链长度：

12612621氯化钙-乙酸浸提-比旋法测定（指定比旋20D=203）

（二）测定（略）,第三节粗纤维的测定,膳食纤维难以被人分解吸收，但对人健康有重要作用的一类物质。

纤维素：

由葡萄糖以-1，4糖苷键连接以成的多多糖，是细胞壁的主要成分，可吸持相当于自重1524%水。

耐稀酸，可溶于72%以上浓硫酸并部分水解。

半纤维素：

指细胞壁中不溶于，可溶于冷稀碱中的多糖；与稀酸共热时，比纤维素易水解。

水解产物有木糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖等。

木质素：

复杂芳香族聚合物，不是碳水化合物，但与纤维素伴随。

难以被化学或酶法降解，缓慢溶于有机溶剂如二恶烷中。

用72%硫酸处理所得不溶性残留物便是木质素。

果胶类物质：

一种充满细胞间隙、细胞壁间隙的植物胶。

粗纤维,粗纤维测定的方法,容量法用2%盐酸溶液除去可溶性糖、淀粉、和半纤维素后，用80%硫酸使纤维素溶解并加热水解为葡萄糖而测定之，再换算为纤维素含量。

纤维素%=葡萄糖%0.9。

酸碱水解法样品脱脂后，分别用稀酸和稀碱处理除支糖及蛋白质，再用丙酮除去单宁、色素和残余脂肪，秘得残渣重减去粗灰分即为粗纤维。

酸性洗涤剂法在稀酸溶液中，季胺盐类物质如十六烷基三四基溴化铵（cetyltrimethlyammoniumbromide简称CTAB）能有效地除去动力饲料中的蛋白质多糖、核酸等，而纤维素和木质素很少水解。

用此溶液水解、洗涤、烘干后所得的植物残渣即粗纤维。

第四节果胶物质的测定,果胶物质一种均多糖。

由半乳糖醛酸本与鼠李糖所组成的杂多糖，如阿拉伯胶、聚半乳糖、阿拉伯半乳糖等。

可作治肠胃溃疡和解重金属中毒药。

测定方法质量法样品经热水浸提后，用氢氧化钠皂化（脱去甲氧基，生成果胶酸钠），加入氯化钙，使其形成果胶酸钙沉淀，沉淀经过滤、烘干后称重，经换算后即得果胶酸钙或果胶酸的重量。

咔唑比色法果胶酸的提取液经除去糖后，用盐酸水解面生成半乳糖醛酸。

在强酸介质中，半乳糖醛酸与咔唑起缩合反应，生成紫红色化合物，用比色的方法测定。