超声波法提取香菇多糖实验报告.docx

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超声波法提取香菇多糖实验报告

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超声波法提取香菇多糖实验报告

　　篇一：

超声波提取香菇多糖汇报

　　项目名称：

　　超声波提取香菇多糖

　　【工作汇报】

　　超声波提取香菇多糖

　　操作者姓名：

王岚

　　班级技术102

　　专业生物技术

　　前言

　　1、实训的背景、目的和意义：

　　实训背景：

　　香菇（Lentinulaedodes）是侧耳科的

　　担子菌,味道鲜美,药食两用,具有较好的保健作用。

香菇多糖是香菇中的重要营

　　养成分和有效药用组分,具有抗病毒、抗

　　肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能,香菇还原糖对于人体糖分的补充也起着重要作用

　　测定蛋白质的方法可分为两大类：

一类是利用蛋白质的物理化学性质来推算，如密度、折射率、紫外吸收、荧光性等；另一类是利用化学方法来计算，如定氮、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂反应等

　　主要测定方法有：

双缩脲法、染料结合法、酚试剂法、紫外分光光度法、水扬酸比色法、折光法、旋光法、近红外光谱法.

　　目前蛋白质测定最常用的方法是凯氏定氮法，是通过测总氮量来确定蛋白质含量的方法。

　　实训目的及意义：

　　1、

　　2、

　　2、实训要解决的问题：

　　掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的原理。

熟练掌握微量凯氏定氮仪测定蛋白质含量的操作技术。

　　1、微量凯氏定氮法与常量法的同点？

　　2、根据08年国标，样品消化完全一小时之后，需要冷却后加20ml水，为什么会有晶体析出，成分是什么，为什么会析出？

　　3、香菇多糖的主要成分是什么？

如何脱蛋白？

　　3、实训操作关键技能

　　1．在蒸馏过程中，切勿关闭电炉，否则会引起硼酸液的倒吸。

　　2．环境中氨气的含量要低。

　　3．定氮仪各连接处绝对不能漏气。

　　4．所用橡皮塞、管用前均需处理。

其方法是：

浸在10％氢氧化钠溶液中煮沸约10min，再经水洗和水煮10min，最后冲洗数次。

　　材料及方法

　　1、实训材料及配制、预处理技术

　　干香菇，蒸馏水；

　　电热恒温鼓风干燥箱

　　组织粉碎机

　　圆底烧瓶，铁架台，温度计

　　超声波发生器（带加热功能）

　　真空泵，漏斗，滤纸，滤布，烧杯，量筒，玻璃棒等

　　微量凯氏定氮蒸馏装置一套、三角烧瓶、酸式滴定管、容量瓶溶液的配制

　　1．浓硫酸：

分析纯，95.5%

　　2．80%苯酚：

80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

　　3．6%苯酚：

临用前以80%苯酚配制。

（每次测定均需现配）

　　4．6mol/L氢氧化钠：

120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

　　5．6mol/L盐酸

　　6.40%naoh

　　7.2%硼酸溶液：

取100：

1的体积比加入混合指示剂，摇匀后溶液呈紫红色即可

　　8.混合指示剂：

取200ml0.2%溴甲酚绿酒精溶液与1份0.2%甲基红酒精溶液混合，贮于棕色瓶中。

9.0.010mol/L的标准盐酸溶液10.蛋白质消化液：

待测硫酸氨溶液2、实验技术流程路线：

1.香菇预先烘干粉碎200ml热水700c超声波发生器（水预热在600c提取45min（中间停顿2次，每次过滤700c滤渣等滤液体积提取30min（中间超声波停2次，每次5min）滤合并滤液滤液量体积标识贮藏备用

　　将多糖浓缩液的ph值调至8～9，加热至85℃，加入氯化钙使浓度达5%（w/v），搅拌，冷却，过滤，得脱蛋白多糖液。

　　1.取去完蛋白的样液5ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,

　　摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。

请将吸光度控制在0.2-0.8制作标准曲线：

准确吸取1mg/ml葡萄糖标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于50ml容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

　　结果与分析

　　标准曲线：

y=0.035x+0.2767

　　R2=0.9735

　　测得：

　　篇二：

香菇多糖提取实验汇报

　　超声波法提取香菇多糖

　　研究背景：

　　香菇多糖的性质：

香菇多糖以β~1，3葡聚糖为主，含有少量的木糖和甘露糖，具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等功能

　　用途：

抗肿瘤药。

为化、放疗辅助药。

主要用于胃癌、肺癌、乳腺癌。

　　生产技术状况：

因为香菇多糖的用途广泛，提取比较方便，越来越多的人投身于这方面的研究，是的提取技术方面的大幅度提升。

状况良好。

　　操作过程：

　　方案设计：

香菇多糖的提取

　　香菇预先烘干→称取干香菇15克→粉碎→圆底烧瓶→200ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右）→提取45min（中间停顿2次，每次5min）→过滤→滤渣→等滤液体积热水70℃→提取30min（中间超声波停2次，每次5min）→过滤→合并滤液→抽滤→滤液→量体积标识贮藏备用

　　香菇多糖的测定：

1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：

采用氯化钙法：

将溶液ph调节至8---9，加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5%（w/v），搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。

　　2.制作标准曲线：

准确吸取1mg/ml葡萄糖标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置于50ml容量瓶定容，准确吸取该系列溶液各2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

　　3.样品的测定：

取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度。

将吸光度控制在0.2-0.8人员分工：

我们分成两组来完成实验，因为有两组待测夜要进行测定。

然后标准溶液是由第一大组完成。

由于操作比较简单，我们就一起完成。

1人对溶液进行去蛋白，2人制作待测液，1人对待测液进行测定，并记录数据。

　　实验现象：

配置待测液时，加入浓硫酸后溶液变成橙黄色。

从而可来额定吸光度。

（附照片）总结分析

　　实验结果：

标准曲线

　　两组待测液所得的吸光度：

稀释100倍后

　　组一：

　　平均吸光度：

0.392浓度：

0.0492

　　组二

　　平均吸光度：

0.345浓度0.0423

　　实验遇到问题及解决方法

　　遇到问题：

1.开始提取香菇多糖时对香菇要进行如何处理不是很懂。

　　经过学习知道要先对香菇进行粉碎，但是又不能多余粉碎。

过细的香菇会对后期的过滤产生一定的影响。

不易过滤。

　　2.在测定香菇多糖的含量之前要对香菇进行曲蛋白质，加入的是氯化钙，但对于要加多少的氯化钙不是很了解。

以为是每组多加一定的量的。

通过向老师询问，知道加入的量是根据原香菇多糖的溶液的多少，计算出的溶度应该是5%即液体的总体积×5%

　　3.制作待测液时，当加入浓硫酸后，发现液体全部变为黑色了。

　　询问老师得知里面的香菇多糖全部碳化，因为其浓度过高，应稀释50-100倍。

我们就将其稀释了100倍在进行测定。

　　4.测定吸光度时，将待测液到入比色皿中时发现溶液变成了红色。

　　因为我们是第一组做的实验，比色皿中存在水分。

溶液遇到水时就变成了红色，对比色皿进行润洗几次，即可，否则会对实验照成较大影响。

　　5.测定其吸光度时发现有一个特别小，而另一组有一个特别大。

　　存在原因很多：

特别小可能是因为比色皿中的水分将其稀释。

特别大可能是稀释过程中存在的误差。

也有可能仪器存在的误差。

计算时应避免这种数据。

　　收获建议

　　实训收获：

　　1.学会掌握用超声波法提取香菇多糖。

　　2.知道如何去除香菇多糖中的蛋白质，有多种方法。

　　3．团队协作能力的提升。

　　4．对于实验中碰到的一些小问题，能够自己进行解决。

　　5.对香菇多糖的作用有了一定的了解。

　　经验教训

　　1.因为疏忽大意，在配置待测液时，加浓硫酸时，将试管拿在了手里，加入的速度过快，

　　导致试管温度迅速上升，试管内液体差点喷出。

给我们组的人教训很大，以后在加入这些有毒，或强腐蚀性的液体时，一定要小心谨慎，代号手套，可将试管放在烧杯中，在安全的情况下仔细的加。

　　改进建议

　　1.苯酚是一种有毒的物质，是否有其他方法，或其他试剂代替苯酚。

可以使实验更具有

　　安全性。

　　2.用超声波提取香菇多糖时，对于各种影响因素是否是最合理的不是很清楚，可以进行

　　分组实验寻找最合理的因素。

　　3.对于去蛋白这步操作中，是否完全的去除了蛋白并不是完全的清楚，应该找一个方法

　　进行检测。

　　篇三：

超声波法提取食用菌多糖

　　超声波法提取食用菌多糖

　　超声波法提取食用菌多糖是利』fj超声波的高频振荡、超声波的空化效应和机械剪切效应，通过强化固体微粒向液体的传质，促进提取剂向同·液界面扩散。

另外，空化作朋产生的冲击波和射流可破坏植物细胞壁和细胞膜结构．并除去部分妨碍酶与底物接触的物质，从而增加细胞内容物通过细胞膜的穿透能力同体微粒和缔合水分子也被粉碎．变成微小的质团，从而提高lr有效成分溶出的速度ll7I，即可提高多糖的得牢。

王萍等I】81考察了超声波辅助法提取滑菇多糖的效果，寻找最佳的工艺条件，分别对液料比、超声处理时问、超声功率及水浴浸提时间4个因素进行了单因素和正交试验。

具体操作步骤为称取预处理的滑菇干燥粉碎粉末．按一定料液比加蒸馏水．在0~c环境下进行超声波处理特定时问后．于80℃水浴锅中浸提特定时间，取出后离心，抽滤。

采用苯酚一硫酸法测定多糖含量。

通过正交试验得到超声波辅助法提取滑菇多糖最佳工艺条件为：

料液比为22mL·g～，超声波时问40min，超声波功率700w，水提时间0．5h。

在此条件下滑菇多糖粗品得率达13．5％。

而常规水浴浸提法提取滑菇多糖的提取时间长达6h，且去蛋白后多糖得率也只为11．24％。

超波法提取时间短，提取效率高，并且提取过程可以在低温下进行，有效成分损失较传统方法小得多。

但超声时问不宦过长，否则可能使多糖发生断裂而降低多糖的得率。

近年来，酶法结合超声波法提取食用菌多糖的方法也得到广泛应用。

早年的研究报道认为，较高强度的超声波会致使酶失活口91。

但近年来的研究发现，适当强度的超声波不但不会使酶失活，还会增强酶的活性。

原因是超声波促进底物与酶催化部位的结合，同时促进产物进入介质，表现出酶催化活性的提高。

其次，超声波空化作用产生的冲击波改变酶分子的构象，使其更易与底物结合，提高酶催化效率l2】。

　　廖伟玲等[捌采用纤维素酶协同超声波法提取香菇多糖，得到最佳提取T艺条件为：

酶加量1．0％，料液比1：

15．超声功率为1500w，超声时间为60min。

按此方法提取香菇样品中多糖，平均得率为6．64％。

正交试验结果表明酶加量的改变对香菇多糖得率的影响最大。

而在谢红旗等∞J自勺香菇多糖提取试验中．考察纤维（:

超声波法提取香菇多糖实验报告）素酶对香菇多糖的提取率的影响，加酶量为1％．单一使用纤维素酶的多糖提取率为5．50％，可见超声波辅助酶法较单一酶解法提取多糖有更好的效果。

唐娟等[241也利用超声波结合纤维素

　　酶法对黑木耳多糖进行提取,通过单因素和正交试验得到，二者结合提取木耳多糖的最佳工艺条件为：

超声波功率40w、ph值为4．5、提取时间2．5h，提取温度为45℃，此实验纤维素酶的加量为300Iu·g～。