常用试剂配制及显色方法.docx

常用试剂配制及显色方法.docx

《常用试剂配制及显色方法.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用试剂配制及显色方法.docx（14页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

常用试剂配制及显色方法

（一） 通用显色剂

1． 重铬酸钾——硫酸

一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。

喷洒剂：

5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。

喷洒后加热至150oC斑点出现。

2． 碘：

检查一般有机物

（1）碘蒸汽：

在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高显色的灵敏度。

（2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。

3．碘——碘化钾溶液：

很我有机物虽黄色（配法见后）。

4．5%——磷钼酸乙醇溶液：

喷后120oC烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。

5．20%磷酸乙醇溶液：

喷后120oC，还原性物质显兰色。

6碱性高锰酸钾试剂：

还原性物质在淡红背景上显黄色。

溶液I:

1%高锰酸钾溶液。

溶液II：

5%碳酸钠溶液。

溶液I和溶液II等量混合使用。

7．中性0.05%高锰酸钾溶液：

易还原性物质在淡红背景上显黄色。

8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105oC烤5~10分钟，还原性物质显黑色。

溶液I：

0.1N硝酸银溶液。

  溶液II：

氢氧化铵溶液。

临用前溶液I和溶液II以1：

5混合。

注意：

放久则形成爆炸性的叠氦化银。

9硝酸银——高锰酸钾试剂：

还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。

溶液I：

0.1N硝酸银溶液：

2N氢氧化铵溶液：

2N氢氧化钠（1：

1：

2）。

临用前配制。

溶液II：

高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。

10．四唑试剂：

还原性物质，在室温或微加热时显紫色。

   溶液I：

0.5%四唑兰甲醇溶液。

  溶液II：

6N氢氧化钠溶液。

临用前溶液I和溶液II等量混合。

11．铁氰化钾：

三氯化铁试剂：

还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。

   溶液I：

1%铁氰化钾溶液。

   溶液II：

2%三氯化铁溶液。

临用前溶液I和溶液II等量混合。

12．浓硫酸：

甲醇（1：

1）溶液，或5%硫酸的乙醇溶液，喷后100oC烤15分钟，各种不同物质显不同颜色。

13．萤光显色剂溶液：

试喷以下一溶液，不同的物质财富在萤光背景上可能显黑色或其他萤光斑点。

A：

0.2%2.7——二氯萤光素乙醇溶液。

B：

0.01萤光素乙醇液

C：

0.1%桑色素乙醇溶液

D：

0.05罗丹明B乙醇溶液

E：

萤光素一溴，检不饱和化合物。

（1）0.1%萤光素乙醇溶液

（2）5%溴的CCL4溶液。

喷洒

（1）以后，放置

（2）溶液的缸内，可在UV光下检查萤光，萤光素与溴化合成曙红（ensln）（无萤光），而光饱和化合物则与溴加成，保留了原来的萤光；若点样量较多，则成黄色斑点，底板成红色。

14．碱式醋酸铅试剂（可做喷洒或沉淀试剂，多种有机化合物均反应）。

   取Pbo14g置乳钵内，加蒸馏水10ml，研后成糊状后，倾入玻璃瓶中，乳钵用10ml蒸馏水洗净，洗液并入瓶中，加醋酸铅溶液（取醋酸铅22g，加蒸馏水70ml制成）70ml，用力振摇，放置七天，滤过，并自滤器中添加适量新沸过的冷蒸馏水使成100ml即得。

（二）生物碱显色剂

通用显色剂：

1．改良碘化铋钾（Dragendorff）试剂：

生物碱和某些含氯化合物显橙红色。

溶液I：

碱式硝酸铋0.85g，溶于冰乙酸10ml和40ml.

溶液II：

碘化钾0.8g溶于水20ml.

储存液：

溶液I和溶液II等量混合（置棕色瓶中杨以长期保存）。

显色剂：

储存1ml与冰乙酸2ml和水70ml混合，用前配制。

2．碘化铂钾（碘铂酸）试剂，不同的生物碱显不同的颜色。

10%六氯化铂酸溶液3ml和水97ml混合，加6%碘化钾溶液100ml，混合均匀，临用前配制。

3．碘—碘化钾（Wagner）试剂：

生物碱显棕褐色。

碘1g和碘化钾10g溶于50ml水中，加热，加冰醋酸2ml用水稀释到100ml。

4．改良碘化铋钾：

碘，碘化钾（1：

1）试剂；生物碱显紫棕色或灰黑色。

5．硫酸铈——硫酸试剂（改良sonnensclein试剂）：

喷后110oC烤几分钟，不同的生物碱显不同的颜色。

硫酸铈0.1g悬浮于水4ml中，加三氯化乙酸1g，加热煮沸，放冷，逐滴加入浓硫酸直到混浊消失为止。

6．碘化氯钾（vmayer）试剂（沉淀试剂）：

取HgCL2（毒）1.35g加蒸馏水60ml溶解后，量取碘化钾5g，加碘馏水10ml使溶解将两液混合，加蒸馏水稀释使成100ml即得。

7．硅钨酸（Bertrand）试剂（沉淀试剂）：

5g硅钨酸溶于100ml蒸馏水中，加稀盐酸使呈酸性反应即得。

（三）强心甙显色剂

1．碱性3.5——二硝基苯甲酸试剂：

强心甙显紫红色、几分钟后褪色。

2%3.5——二硝基苯甲酸甲醇溶液与2N氢氧化钾溶液，用前按劳1：

1混合。

2．碱性三硝基苯：

在浅橙色背景上显橙红色。

溶液I：

间三硝基苯100mg。

溶于二甲基甲酰胺40ml，加浓HCL3~4滴，加水至100ml，避光能长期保存。

溶液II：

5%碳酸风溶液    

 先喷溶液I，再喷溶液II，喷后90~103.0oC烤5分钟。

3．三氯乙酸试剂：

喷后110oC烤7~10分钟，紫外光下观察萤光。

试剂I：

25%三氯乙酸的乙醇或氯仿溶液，配制后可放置数日。

或用试剂II：

上述乙醇溶液用前每10ml加过氧化氢溶液4滴或新配3%氯铵T水溶液按4：

1混合。

4．三氯化锑试剂：

喷后100oC烤5分钟，日光下或紫外光下观察。

25%或饱和的三氯化锑氯仿溶液。

5．磷酸——溴试剂

溶液I：

10%磷酸溶液。

   溶液II：

溴化钾饱和溶液：

25%盐酸溶液（1：

1：

1）。

薄层用溶液I喷洒后，在125oC烤12分钟（薄层太湿时则烤的时间可适当延长），在紫外光下观察一次，将薄层再烤热，趁热喷溶液II，再在紫外光下观察。

6．Keller——Kllianl试剂：

（检查α——去氧糖）

试液：

100ml冰HAC和FeCL3试液0.5ml混匀，试样1ml混匀。

试样1ml加试液2ml溶解后，沿试管壁滴入浓硫酸2接触面即显棕色。

渐变浅绿，兰色。

最后HAC层全部染成兰色。

（四）黄酮甙显色剂

     黄酮类成份在紫外光下大多显出不同颜色，用氨熏，喷三氯化铝溶液或喷氢氧化钠等碱性溶液，则颜色变深或变色。

1．氨气

2．10%氢氧化钠或氢氧化钾溶液。

3．1%或5%碳酸钠溶液。

4．1%或5%三氯化铝乙醇溶液。

5．2%乙酸镁甲醇溶液。

6．饱和三氯化锑的氯仿溶液，100oC烤5分钟。

以上六种试剂在喷前喷后将薄层置日光与紫外光下观察。

7．1~2%三氯化铁乙醇溶液。

8．1%中性乙酸铅或碱式乙酸铅溶液。

9．0.1N硝酸银溶液。

10．铁氰色钾——三氯化铁试剂。

溶液I：

2%铁氰化钾溶液。

     溶液II：

2%三氯化铁溶液。

临用前溶液I与溶液II等量混合。

11．硼氢化钾试剂：

双氢黄酮化合物显红、橙红色。

溶液I：

1~2%硼氢化钾（钠）异丙醇溶液，必须新鲜配制。

溶液II：

浓盐酸

先喷I、5分钟后放入盐酸蒸气槽内。

12．Shinoda试剂：

在混有锌粉的硅胶薄层上喷盐酸，黄酮醇显红紫色。

制备硅胶薄层时，加入2%w/w锌粉混合，薄层展开后盐酸溶液,如展开剂为酸性，可在展开后先喷锌——丙酮混悬液，再喷盐酸溶液。

罗丹明——氨试剂。

溶液I：

0.1%罗丹明B的4%盐酸溶液。

  溶液II：

浓氨溶液。

先喷溶液I，然后再将薄层放入氨汽槽内。

14．对氨基苯磺酸试剂。

溶液I：

对氨基苯磺酸盐溶液。

 溶液II：

5%亚硝酸钠溶液。

将对氨基苯磺酸0.3g溶液对8%盐酸溶液100ml中，到紫溶液25ml用冰冷却，加预冷的溶液II1.5ml。

15．硼酸——柠檬酸试剂

溶液I：

饱和硼酸的丙酮溶液。

    溶液II：

柠檬酸丙酮溶液。

先喷溶液I，再喷溶液II。

16．福林试剂（FolinCiocalteu试剂）

钨酸钠10g和钼酸钠2.5g溶于70ml水中，再缓缓加85%磷酸5ml和浓盐酸10ml，将混合液回流煮沸10小时，然后加硫酸锂15g，水5ml及溴1滴，再回去流煮沸15分钟，所得溶液冷却后移置100ml溶量瓶中并用水稀释到刻度（贮备液），溶液应不显绿色。

溶液I：

20%碳酸钠溶液。

      溶液II：

临用前上述贮备液1份用水三分稀释。

先喷溶液I，稍干再喷溶液II。

（五）皂甙灶显色剂

1．25%磷钼酸乙醇溶液：

喷后在140oC加热5~10分钟皂甙元均呈深兰色。

2．三氯化锑浓盐酸或氯仿溶液：

喷后在90oC烤10分钟（应在通风厨中进行），不同的皂甙元在可见光或紫外光下显出各种颜色。

3．硫酸：

甲醇（1：

2）溶液，喷后加热，不同的皂甙元可显红褐色、紫色、黄色或黑色，所显颜色与温度无关。

4．氟磺酸：

乙酸（1：

1）溶液，喷后130oC加热5分钟。

各种皂甙元可显天兰紫、粉红、淡棕等色，在紫外光下也显不同萤光。

5．碘蒸汽：

薄层置于碘蒸汽筒中，皂甙无皆显棕黄色斑点。

6．三氯快乙酸或三氯乙酸：

乙酸（1：

2）溶液，喷后在100oC加热20分钟皆显黄色。

7．2%血球生理盐水混悬液（溶血试验、检皂甙）。

取新鲜兔血（由心脏或静脉取血）适量，用洁净小毛刷迅速搅拌除去纤维蛋白，并用生理盐水反复离心洗涤至上清液无色后，量取沉降红血球（可以管的离心管通接读取）用生理盐水配成2%混悬液贮冰箱内备用（贮存期2~3天）。

（六）蒽醌甙显色剂

   蒽醌及其甙本身在日光下显黄色，在紫外光下则显黄，红橙色萤光。

在薄层上用氨熏或喷氢氧化钾与碱溶液，则颜色变深或变色。

1．氨气

2．10%氢氧化钾、甲醇溶液。

3．3%氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液。

4．50%哌啶的苯溶液。

5．饱和喷酸锂溶液。

6．饱和硼砂溶液。

7．0.5%乙酸镁甲醇溶液：

喷后90oC烤5分钟。

8．0.5%乙酸铝溶液，喷后紫外光下看萤光。

9．0.5%牢固兰B试剂，喷后则原来氢氧化钠、锂、钾等溶液碱溶液显萤光的斑点此时在可见光下显棕、紫或绿色。

也可先喷本试剂，再喷稀氢氧化钠溶液而显色。

也用于酚类及能偶芳香胺的显色。

溶液I：

新配的0.5%牢固兰B盐的水溶液。

  溶液II：

0.1N/L氢氧化钠溶液。

先喷溶液I，喷溶液II。

（七）香豆精甙显色剂

1.0.5%碘的碘化钾溶液，香豆精各种颜色，很多其他类型的化合显色。

2．重氟化氨基苯磺酸试剂，香豆精显黄、橙、红、棕紫等颜色也用于酚类，芳香胺反转偶合的朵环化合物的显色。

对氨基苯横酸0.9g克加热溶于12N盐酸9ml，用水稀释到100ml，取此溶液10ml用冰冷却，加冰冷的4.5%亚硝酸钠溶液10ml，0oC放15分钟（在0oC可保存三天），用前加等体积1%碳酸钠溶液。

3．重氮化对硝基苯胺试剂、香豆精显黄、红、棕、紫等颜色，也用于酚类的显色。

    对硝基苯苯胺0.7g溶于12N盐酸9ml，用水稀释到100ml，将此溶液逐渐滴加到冰冷的1%亚硝酸钠溶液5，再用冰冷的水稀释到100，需临用时新配。

4.4——氨基安替比林——铁氰化钾试剂：

香豆素和酚类显橙红至深红色。

溶液I：

2%4——氨基安替比林乙醇溶液。

  溶液II：

8%铁氨化钾溶液。

先喷溶液I，再喷溶液II，再用氨气熏之。

5．稀氢氧化钠：

喷前喷后薄层在短波长的紫外光下观察萤光。

（八）挥发油显色剂

1．茴香醛——浓硫酸试剂：

喷后150oC烤。

挥发油中各成分显不同颜色。

浓硫酸1ml加到冰醋酸50ml中，冷后加茴香醛0.5ml必须临时配制。

2．萤光素——溴试剂：

检出含乙烯化合物。

（配法及使用见前）。

3．碘化钾——冰乙酸——淀粉试剂：

斑点显兰色则为过氧化物。

  溶液I：

4%碘化钾溶液10ml与冰乙酸40ml混合，再加锌粉——小勺过滤。

溶液II：

新制的1%淀粉溶液。

先喷溶液I，5分钟后大量喷溶液II，直喷到薄层透明为止。

4．对二甲氨基苯甲醛剂；检出菌与菌前体在室温或80oC烤10分钟显深兰色。

  对二甲氨基苯醛0.25克，溶于冰乙酸50g，85g磷酸5克和水20ml的混合液中，此试剂储于棕色瓶中能稳定数月。

5．异羟肟酸铁试剂：

斑点显淡红色，可能是酯和内酯。

溶液I：

盐酸羟胺5克溶于水12ml,乙醇稀释到50ml,冷处。

溶液II：

氢氧化钾10g溶于很少量水，再用乙醇稀释到50ml，储于冷处。

溶液III：

溶液I和溶液II以1：

2混合，滤去氯化钾沉淀，所得滤液必须放入冰箱中，可稳定两星期。

溶液IV：

三氯化铁（FeCL36H2O）10克溶于36%盐酸20ml，与乙醚200ml振摇，得均匀的溶液，密塞储存可长久使用。

先喷溶液III，在室温先干燥后，再喷溶液IV。

6．2.4——二硝基苯肼试剂，醛和酮化合物显黄色。

36%盐酸10ml加到2.4——二硝基苯肼试剂1克在乙醇1000ml的溶液中。

7．0.3%邻联二茴香胺冰乙酸溶液，醛和酮化合物显各种颜色。

8．三氯化铁试剂：

酚性物质显兰绿色。

1~5%三氯化铁的0.5N盐酸溶液。

9．4——氨基安替比林——铁氰化钾试剂：

酚性物质显橙红色至深红色。

溶液I：

2%4——氨基安替比林乙醇溶液。

溶液II：

8%铁氰化外溶液。

先喷溶液I，再喷溶液II，再用氨气熏之。

10．硝酸铈试剂：

醇在黄色背景显棕色。

硝酸铈铵6g溶于4N硝酸溶液100ml。

11．钒酸铵（钠）8——羟基喹啉试剂：

醇在兰灰色背景显淡红色，有时需做加热。

1%酸铵（钠）溶液1ml和25%8——羟基喹啉的6%乙醇溶液，1ml用苯30ml振摇，争出灰兰色的苯溶液使用。

12．溴甲酚绿试剂：

有机酸显黄色。

双甲酮30mg溶于乙醇90ml，慢慢加入85%磷酸10ml，配制后的试剂放置于冷处能用几个星期，但新配的效果较好。

13．酚——硫酸试剂：

喷后110oC烤10~15分钟，糖显棕色，酚3g及浓硫酸5ml溶于乙酸95ml。

14．3.5——二氨基苯甲酸——硫酸试剂：

喷后100oC烤15分钟，2——去氧糖在日光下显红棕色，在紫外光下显黄绿色萤光。

甲基红1g及溴酚兰3g溶于95%乙醇1000ml。

15．溴粉兰指示剂，显黄色。

0.04mol/L溴酚兰乙醇溶液，用氢氧化钠溶液调至微碱性。

16．溴甲酚绿指示剂：

如展开剂中含乙酸，则喷前薄层在120oC烘烤除去，在兰色背景上显黄色。

溴甲酚绿0.04克溶于乙醇100ml，加0.1N氢氧化钠溶液至兰色刚刚出现。

17．溴甲酚紫指示剂，喷前薄层在100oC烤10分钟，冷到室温后，喷显色剂。

在兰色背景上显黄色。

溴甲酚紫0.04克溶于50%乙醇100ml，用0.1N氢氧化钠溶液调至pH10.0。

18．溴甲酚紫柠檬酸试剂

溴甲酚紫25ml及柠檬酸100mg溶于丙酮：

水（9：

1）混合液100ml。

19．焦红栖溶液：

在灰或灰兰色背景上白色。

0.1%焦酚红水溶液：

2%氢氧化钠溶液（1：

1）混合。

20．百里酚酞碱溶液：

在灰或兰色背景上显红色或白色。

百里酚酞50mg.

21．二氯靛酚试剂：

喷后加热片刻，在天兰色背景上显粉红色如加热时间延生，则钼酸转变为白色，而其色羧不变故可识别酮酸。

2.6三氯靛酚0.1g溶于95%乙醇100ml。

22．芳香胺——还原糖试剂

芳香胺（如苯胺5g）和还有糖（如木糖5g）溶于95%乙醇

23．碘化物淀粉试剂：

在白色或浅兰色背景上显深兰色，灵敏度为2μg。

8%碘化钾溶液，2%碘酸钾溶液及1%淀粉溶液等到量混合，用前新鲜配制。

24．硝酸铈铵——引朵乙醇溶液。

溶液I：

10%硝酸铈铵溶液。

   溶液II：

吲哚乙醇溶液。

25．联苯胺——亚硝酸钠试剂：

喷后在紫外光灯下254毫微米观察萤光。

溶液I：

联苯胺2.5克溶于浓盐酸7毫升及水500ml。

溶液II：

10%亚硝酸溶液。

临用前溶液I3份和溶液II2份混合。

（九）氨基酸显色剂

通用试剂

1．茚三酮试剂，用于氨基酸，氨及打官司基糖，喷后110oC加热泪盈眶至显出颜色。

试剂I：

茚三酮0.3g溶于下丁醇100ml中，加乙醇3ml或试剂II，茚三酮0.2g溶于乙醇中100ml。

为了使茚三酮的颜色稳定，  采用下法：

硝酸酶试剂：

饱和硝酸酮溶液1ml与10%硝酸溶液及96%乙醇100ml混合。

方法：

用茚三酮剂显色后用硝酸酮试剂喷，斑点由兰紫色转成红色。

2．吲哚醌试剂：

吲哚醌于乙醇100中，加冰乙酸10。

3．茚三酮——硝酸酮试剂（Moffatt--Lytle反应）喷后在电炉上烤至刚刚显色，颜色在日光灯中逐渐加深，某些氨基酸首先显出颜色，用笔立刻将色点记下，许多氨基酸赕出特殊的颜色，不同的氨基酸显出的速度也有差别，。

4．2——萘醌——4——磺酸试剂（Folin试剂）喷后在室温干燥不同的氨基产生各种颜色。

  1．2萘醌——4——碘酸钠的0.62克溶于5%碳酸钠溶液100ml制备。

5．氯气——联甲苯胺试剂。

  氯化作用，薄层放在氯气中，假如氯气要从气筒中得到的放置5~10分钟，假如由1.5%高锰酸钾溶液及10%盐酸（1：

1）的混合物制得的，则需放置5~20分钟，然后将薄层置空气中顾委分钟以除去过量的氯气，再喷试剂。

   试剂配制：

邻联甲苯胺160mg溶于乙醇酸30ml中，溶液用蒸馏水500ml稀释，然后再加碘化钾1克。

（十）糖显色剂

1．茴香醛——硫酸试剂：

喷后100~105oC烤，各种糖显不同颜色，浓硫酸1ml加到含茴香醛的乙醇溶液50ml中需临用前配。

2．1.3——二羟基苯萘酚——硫酸试剂：

在110oC予热的薄层上喷试剂几分钟后在白色背景显不同颜色，再加热，颜色加深背景也变深。

3．苯胺——二苯胺——磷酸试剂：

喷后85oC烤10分钟各种糖不同颜色。

二苯胺4g，苯胺4ml及85%磷酸20ml溶于丙酮200ml中。

4．茴香胺——邻苯二甲酸试剂：

喷后100oC烤10分钟。

已糖显颜色。

去氧已糖显色，戊糖显红紫色，醛酸显棕色。

0.1M对茴香胺和0.1M邻二甲酸的乙醇溶液。

5苯胺——邻苯二钾酸试剂：

喷后105~110oC烤10分钟，糖显红棕色。

6．α——苯胺——邻苯二钾酸试剂：

喷后100oC烤3~6分钟，多数糖显兰色。

鼠李糖显橙色，所显颜色于室温稳定2~3天。

  15%萘酚乙醇溶液21ml，浓硫酸13ml，乙醇87ml，及水8ml混匀后使用。

7．3——二羟基嗪酚——磷酸试剂：

喷后105oC烤5~10分钟，酮糖显红色，醛糖显淡兰色。

 0.2%1．3——二羟基试剂：

喷后120oC烤15~20分钟，多数糖在白色背景上显暗红色，继续加热则变成浅紫色。

8．百里酚及浓硫酸5ml溶于乙醇95ml。

9．双甲酮——磷酸试剂：

喷后110oC烤15~20分钟，仅酮显暗绿灰色。

10．Kellev——Killani试剂：

（检查α——去氧糖）

配法及使用见附录二（强心甙项下）

11．3．5二氨基苯甲酸二盐酸1克溶于80%磷酸25毫升磷酸25毫升加水稀释至60毫升。

   喷后100oC烤10~15分钟，糖显棕色，在紫外光下显黄绿色萤光。

12．酚——硫酸试剂

酚3克及浓硫酸5毫升溶于乙醇95毫升。

喷后100oC烤10~15分钟，糖显棕色。

13．对硝基苯胺——过碘酸试剂。

溶液I：

饱和偏高碘酸溶液1份加水2份稀释。

溶液II：

1%对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。

先喷溶液II：

放置10分钟，再喷溶液II，去氧糖显黄色，紫外先下显强萤光，再喷5%氢氧化钠醇溶液，颜色转绿乙二醇同样显色。

（十一）鞣质

检查鞣质的试剂除检一般酚性物试剂均能反应以外，现列出二种较专一的沉淀如下：

1．氯化钠明胺试剂

取明胺1克溶于50水中，然后加1.0gNaCL使溶解后，加水稀释至100ml即得。

保存期2~3个月（10oC左右）。

2．铁铵明矾试液：

即硫酸铁铵FeNH4（SO4）212H2O

取硫酸铁铵结晶1克加蒸馏水溶解后，使成100ml即得。