生物化学试题.docx
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生物化学试题
1.生物化学:
（分子生物学）是研究活细胞和有机体中存在的各种化学成分及其所参与的化学反应的一门科学，因此又是一门关于生命现象化学基础的一门科学..生物化学是研究生命物质的化学组成结构，及生命过程中各种化学变化的生物学分支学科。
2.生物膜:
主要由脂质和蛋白质组成，一般也含有糖类，其基本结构可用流动镶嵌模型来表示，即脂质分子形成双层膜，膜蛋白以不同程度与脂质相互作用并可侧向移动
3.“生物导弹”:
是对单克隆抗体的一种形象化说法，它由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合而成，因带有单克隆抗体而能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。
4.单克隆抗体:
由单个细胞克隆产生的抗体叫单克隆抗体。
他可以和相应抗原的单个抗原决定簇相结合。
单克隆抗体在分子结构、氨基酸序列和特异性等方面都是一致的
5.细胞系:
当杂交瘤细胞生长在培养液中，它的在遗传上相同的后代会继续产生具有B母细胞特征的抗体。
在那群遗传上相同的后代中的一个被称为一个纯种细胞系（克隆clone
6.细胞信号转到：
研究细胞内、细胞间信息传递的分子基础。
构成生物体的每一个细胞的分裂与分化及其它各种功能的完成均依赖于外界环境所赋予的各种指示信号
7.生物大分子：
有一定分子结构规律，即由一定的基本结构单位，按一定的排列顺序和连接方式而形成的多聚体，分子量一般大于104。
8.两性电离性质：
在一定pH环境下，氨基酸游离成阴、阳离子的程度及趋势相等或不游离（氨基酸不带电荷或所带电荷数相等）而成为兼性离子（Zwitterion），在电场中既不向阳极也不向阴极迁移时的pH值。
9.紫外吸收性质：
Trp、Tyr和Phe含共轭双键苯环，在280nm处有最大吸收峰，利用此特点可用分光光度法测定蛋白质含量也可粗略估计核酸中蛋白质污染程度
10.肽键：
一个氨基酸的α-羧基与另一氨基酸的α-氨基脱水缩合
肽：
氨基酸通过肽键相连而形成的化合物
11.寡肽（oligopeptide）:
十个以下氨基酸缩合成的肽统称为寡肽
12.蛋白质:
由一条或几条多肽链组成的生物大分子
13.氨基酸残基（aminoacidresidues）：
蛋白质肽链中的每个氨基酸部分
14.多肽主链（mainchain）：
由肽键连接各氨基酸残基形成的长链骨架
多肽侧链（sidechain）：
蛋白质多肽链中的各氨基酸侧链基团
15.疏水键：
非极性基团为避开水相而聚集在一起的作用力
16.蛋白质的空间结构（构象）:
蛋白质分子内各原子围绕某些共价键旋转而形成的空间排布及相互关系。
构象决定着蛋白质的分子形状、理化性质和生物学活性。
17.二级结构（secondarystructure）：
蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲
三级结构（tertiarystructure）:
整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置，主要靠次级键（疏水键、离子键、氢键和VanderWalls力维持）
四级结构（quaternarystructure）:
蛋白质分子中各个亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用（主要靠疏水键维持）
18.motif（模体或模序）：
多肽链中一些二级结构单元，在空间上靠近，相互作用，形成有规则的、、
19.domain（结构域）：
多肽链上某些超二级结构相互联系，进一步形成可明显区分的空间结构区域,并具有特定的生物学功能。
20.分子伴侣：
功能是帮助其他含多肽结构的物质在体内进行正确的非共价的组装，但不是组装完成后的结构在发挥其正常的生物功能时的组成部分
作用是防止新生肽链的错误折叠和聚集，而自身并不成为其最后结构的一部分
21.折叠酶：
在蛋白质折叠过程中，主要催化含有二硫键的膜蛋白或分泌蛋白的正确折叠。
22.折叠病：
突变蛋白之间的相互作用导致蛋白质发生错误折叠，因为降解不彻底而形成不溶性沉淀。
不溶性沉淀形成过多，严重干扰正常的神经活动，引起失能，属于“折叠病
23.酶原（zymogen）：
有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体，此前体物质称为酶原
酶原的激活：
在一定条件下，酶原向有活性酶转化的过程。
24：
变构调节：
一些代谢物可与某些酶分子活性中心外的某部分可逆地结合，使酶构象改变，从而改变酶的催化活性，此种调节方式称变构调节
25：
共价修饰在其他酶的催化作用下，某些酶蛋白肽链上的一些基团可与某种化学基团发生可逆的共价结合，从而改变酶的活性，此过程称为共价修饰
26.蛋白质变性:
在理化因素作用下,蛋白质分子内的二硫键和非共价键被破坏,天然构象发生变化,引起蛋白质理化性质和活性的改变
27.中性盐沉淀反应：
稀盐可使蛋白质表面同性电荷增加，增加蛋白质分子间的排斥,同时与水分子间的作用增强,而增加溶解性—盐溶作用；高盐破坏水膜、中和电荷,蛋白质聚集沉淀—盐析,不同蛋白质盐析的盐浓度不同,故用不同盐浓度分级沉淀蛋白质,分离的蛋白质不变性
28.有机溶剂沉淀反应：
用与水互溶的乙醇、丙酮等夺取水膜,等电点时加入更易沉淀,不同蛋白质所需溶剂浓度不同—分级沉淀,但易引起变性，与有机溶剂浓度、作用时间和沉淀温度有关
29.双缩脲反应：
肽键能与碱性铜溶液产生兰色络合物，肽键越多颜色越深，此称为双缩脲反应
30.酚试剂反应：
在碱性条件下,Tyr和Trp可与含磷钨酸-磷钼酸的酚试剂化合物生成兰色物,兰色强度与蛋白质量成正比,此为测定蛋白质常用方法,灵敏度高（微克级
31.包含体（IB）：
大肠杆菌高效表达时形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白颗粒
32.Sanger法:
2,4-二硝基氟苯（DNFB）与N端氨基进行烷化反应,生成二硝基苯衍生物,酸水解得到黄色DNP-氨基酸,并可用乙醚抽提再进行色谱分析
二甲基氨基萘磺酰氯（Dabsylchoride法）：
Dabsylchoride与非解离状态的氨基作用,进一步水解后可得到有色Dabsylated-氨基酸
Edman法：
苯异硫腈（PITC）可与氨基反应生成PTC-多肽,酸水解后得到PTC-氨基酸,后者可用乙酸乙酯抽提后进行鉴定,此法为氨基酸自动分析的基础羧肽酶法:
羧肽酶A水解脂肪或芳香族氨基酸的C-末端,羧肽酶B水解碱性氨基酸的C-末端
33.蛋白质组学：
不是一个封闭的、概念化的、稳定的知识体系,而是一个领域。
它旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式,其内容包括蛋白质的定性鉴定、定量检测、细胞内定位、相互作用研究等,最终揭示蛋白质功能,是基因组ＤＮＡ序列与基因功能之间的桥梁
34.质谱技术：
它通过测定蛋白质的质量来判别蛋白质的种类
35.抗体酶（Abzyme）：
抗体酶或催化抗体（Catalyticantibody）是一种新型人工酶制剂，是一种具有催化功能的抗体分子，在其可变区赋予了酶的属性
36.抗原和抗体：
当外源物性物质，如蛋白质、毒素、糖蛋白、脂蛋白、核酸、多糖、颗粒（细菌、细胞、病毒）进入人或动物体内时，机体的免疫系统便产生相应的免疫球蛋白（immuneglobin），并以之结合，以消除异物的毒害。
此反应称为免疫反应，此异物便是抗原，此球蛋白便是抗体。
37.Claisen重排：
Claisen重排是个协同反应，中间经过一个环状过渡态，所以芳环上取代基的电子效应对重排无影响。
38.Diels-Alder反应：
是指含有共轭二烯结构的双烯体和含不饱和键的亲双烯体，通过1，4-加成得到环状烯烃，故又称为双烯合成反应
39.酶联免疫吸附分析：
是将酶作为标记物质，使之和抗原（或抗体）结合形成酶与抗原（或抗体）复合物，然后再根据待测抗体（或抗原）与复合物专一且定量的结合关系，通过测定待测抗体（或抗原）结合的标记酶活力，从而计算出抗原或抗体的量。
核酸专题
1.DNA的一级结构（碱基顺序）：
是指DNA分子中核苷酸的排列顺序,由于核苷酸之间的差异仅仅是碱基的不同，故可称为碱基顺序
2.DNA物理图谱：
是指DNA链的限制性酶切片段的排列顺序,即酶切片段在DNA链上的定位。
3.大沟和小沟：
双螺旋的表面形成两条凹槽，一条宽而深，叫做大沟，一条狭而浅，叫做小沟。
4.回文结构（palindrome）：
即旋转对称顺序，在遗传学上顺读和倒读都一样的DNA或RNA顺序
5.三螺旋DNA：
也称H-DNA，在较低pH条件下，包含较长多聚嘌呤与多聚嘧啶配对的DNA片段，在不破坏Watson-Crick碱基配对的情况下，通过Hoogsteen碱基配对而形成局部DNA三股螺旋。
6.反义RNA（antisenseRNA）：
指与mRNA互补的RNA分子，这种反义RNA能与mRNA分子特异性地互补结合，从而抑制该mRNA的加工与翻译。
7.超螺旋（supercoil）：
，就是螺旋的螺旋，是双螺旋的中心轴再形成螺旋
8.polyA：
多数真核生物mRNA的3‘末端有聚腺苷酸顺序，称polyA，由polyA聚合酶催化RNA聚合酶Ⅱ转录的hnRNA的末端形成的
9.snRNA：
除mRNA、rRNA及tRNA三大类主要RNA外，近年发现真核细胞尚含有一类非常重要的独特RNA，分子都相对较小，约含70～300个核苷酸，只存在于细胞核中，称为小核RNA（smallnuclearRNA，snRNA）。
含量虽不到细胞总RNA的1%，但每个细胞核所含snRNA的拷贝数却多达100万个。
10.中度重复序列：
指在真核基因组中重复数十至数万（<105）次的重复顺序
低度重复顺序：
在单倍体基因组中只出现一次或数次，因而复性速度很慢
11.多基因家族（multi-genefamily）：
是指由某一祖先基因经过重复和变异所产生的一组基因。
分为两类：
一类是基因家族成簇地分布在某一条染色体上，它们可同时发挥作用，合成某些蛋白质；另一类是一个基因家族的不同成员成簇地分布不同染色体上，这些不同成员编码一组功能上紧密相关的蛋白质。
12.假基因（pseudogene）：
在多基因家族中，某些成员并不产生有功能的基因产物，这些基因称为假基因（pseudogene）。
13.自私DNA：
只有很小一部份具有重要的调节功能，绝大部分都没有特殊功用，似乎只是自身复制，所以称这类DNA为自私DNA或寄生DNA（parasiteDNA）
14.变性：
由天然状态到无规则状态的转变过程叫做变性（denature），又称为熔解（melting）。
能使DNA变性的试剂叫做变性剂，
15.增色效应：
DNA变性时，有序的碱基排列被打乱了，于是增加了对光的吸收，由于DNA变性而引起的光吸收的增加称为增色效应（hyperchromicity）。
16.解链温度（meltingtemperature,Tm）:
核酸加温变性过程中，A260达到最大值一半时的温度
17.退火（annealing）：
变性DNA在一定条件下又可以恢复天然DNA的结构，这个过程叫做复性（renaturation），也叫退火（annealing）。
18.分子杂交（简称杂交,hybridization）：
是应用核酸分子的变性和复性的特性,使来源不同的DNA（或RNA）片段,按碱基互补关系形成杂交双链分子
探针：
是指带有某些标记物的特异性核酸序列片段。
19.核糖核酸酶P（RNaseP）：
是内切核酸酶，是核糖核蛋白体复合物，能剪切所有tRNA前体的5‘端，除去多余的序列，形成3’-OH和5’-磷酸末端。
生物化学大题总结
一、基因工程研究应包括主要内容或步骤：
答：
1）从复杂的生物有机体基因中，经过酶切消化或PCR扩增等方法，分离出带有目的基因的DNA片段。
2）在体外，将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制，并带有选择标记的载体分子上，形成重组DNA分子。
3）将重组DNA分子转移到适当的受体细胞，并与之一起增殖。
4）从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的受体细胞克隆。
5）从这些筛选出来的受体细胞克隆中提取已经得到扩增的目的基因，并做序列分析等鉴定。
6）将目的基因克隆到表达载体上，导入宿主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出人类所需要的物质。
二、向细胞内导入外源正常基因，进行基因治疗的技术已日趋完善，常用的方法有四类：
答：
1）利用RNA逆转录病毒或DNA病毒（SV40、腺病毒和牛乳头瘤病毒）作为载体2）磷酸钙沉淀等化学方法3）融合法、用脂质体/红细胞壳和原生质体等薄膜包裹DNA与细胞融合4）显微微量注射、电导入等物理方法
三、核酸疫苗的优点：
潜在危险
§提供给免疫系统天然的抗原成分
§单次接种即可获得长期或终身免疫
§免疫应答全面，既可诱导体液免疫又可诱导细胞免疫
§多价疫苗具有广泛的交叉保护作用
§没有减毒或灭活疫苗可能引起的致病作用
§生产简便、成本低廉、质量易控制、贮运方便
危险：
DNA可能会整合到染色体上，影响染色体的稳定性，引起细胞死亡或激活癌基因；DNA免疫接种后可能引起免疫系统本身的功能紊乱。
四：
核酸分子杂交（菌落、噬菌体原位杂交法原理：
答：
根据核酸的碱基互补配对原则，核酸标记的特异DNA或RNA探针只能与特异的基因杂交，用一定的方法将细菌的DNA或RNA固定在硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上，在适合的条件（如离子强度、温度）下用特异标记核酸探针与之杂交，标记探针就与特异基因牢固结合，将非特异结合探针洗去后，经放射自显影后，就可指示有特异DNA片段重组子的位置。
五：
cDNA文库构建技术路线
六、生物大分子分离纯化的一般步骤和原则
层析法（凝胶过滤，离子交换，亲和层析）
电泳法（非变性PAGE，SDS-PAGE，等点聚焦）
超离心法
透析和超滤
生物组织→→提取液→→粗产品→
：
1前处理：
材料选择与处理，细胞破碎（机械破碎、溶账和自溶、酶解、化学处理
2粗分离：
盐析（硫酸铵盐析），等电点沉淀，有机溶剂沉淀，离心
3细分离：
分子大小，溶解度，电荷性质，吸附性质，生物亲和力
七、细胞的破碎:
一、机械破碎1.研磨法2.组织捣碎器法3.超声波法4.压榨法5.冻溶法二、溶胀和自溶三、化学处理（脂溶性溶剂、表面活性剂）
四、生物酶降解（溶菌酶、蛋白酶、蜗牛酶）
八、抽提有效成分的影响因子
1.pH值偏离等电点碱性—pHpI
2.溶剂的极性和离子强度蔗糖甘油二甲基亚砜二甲基甲酰胺盐析盐溶
3.水解酶本身水解酶的作用（胰岛素与胰蛋白酶原共存于胰腺）抑制剂（表1-3）
4.温度低温有利，但有例外
5.搅拌易产生泡沫导致蛋白质变性
6.氧化巯基易被氧化/巯基乙醇，半胱氨酸，谷胱甘肽，维C，二硫苏糖醇（多酚氧化酶）
7.金属离子蛋白-金属离子沉淀，EDTA络合剂（1-3mmol/L）
8.抽提液与抽提物的比例（5:
1）
九、浓缩
一、沉淀法中性盐，有机溶剂（经透析，凝胶过滤脱盐）
二、吸附法干胶（对有效成分性质无影响，吸附力不强）
三、超过滤法加压过滤（小量可手工，半透膜孔径大小掌握好）
四、透析法一定浓度的PEG（30%）、甘油（50%）
五、减压蒸馏法图1-3（适用于常温下稳定的物质）
六、冰冻干燥法冰冻抽提液（固）在真空状态下直接变为气体。
有效成分几乎不损失。
适用于量小、纯化的最后步骤。
十、生物大分子分离纯化的一般步骤和原则
十二、盐析曲线制作
曲线制作步骤：
1.取一定体积已测含量之蛋白质或酶的待分离溶液，调pH至稳定范围，分6~10次加入不同量的硫酸铵。
2.第一次加硫酸铵到溶液出现微弱混浊状态时，静置一段时间，离心或过滤即得到第一个分级沉淀部分。
3.以同样的操作加硫酸铵到上清液或过滤液中，则得到第二个分级沉淀部分。
4.如此连续进行，便可得到6~10个分级沉淀部分.
5.将每个分级沉淀部分分别重新溶解于一定体积的适宜pH缓冲液中，根据其蛋白质或酶含量和相对应的硫酸铵浓度之间的关系作图，即可的如图2-1所示的盐析曲线.
6.在此曲线的基础上，参照表2-3的分级试验方法，根据材料来源的难易程度、有效成分纯度和得率要求等做出判断。
十三、层析技术原理
层析技术是一种物理的分离方法。
无论何种层析,都是由互不相溶的两个相组成:
一是固定相（固体或吸附在固体上的液体），一是流动相（液体或气体）。
层析时，利用混合物中各组分理化性质（如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、溶解度等）的差异，使各组分不同程度地分布在两相中，随着流动相从固定相上流过，不同组分以不同速度移动而最终被分离。
混合物在层析系统中的分离决定于该混合物的组分在两相中的分配情况，一般用分配系数（distributioncoefficient,Kd）来描述。
混合物各组分的分配系数差异越大，越容易分离开。
物质在层析系统中的行为并不直接决定于其Kd，而取决于它的有效分配系数Keff:
=一物质在A相中的总量/某一物质在B相中的总量
十四、
十五、吸附层析
原理：
以吸附剂作为固定相，选择适当的溶剂作流动相。
由于各种物质的极性不同，被吸附剂吸附的程度和在流动相中的溶解度不同。
层析时，当流动相从固定相上流过时，各组分也就不同程度地被溶解（解吸），然后又再被吸附、再溶解再吸附，从而以不同速度随流动相向前移动。
载体：
硅胶氧化铝羟基磷灰石活性碳
应用：
分离纯化蛋白质、酶、氨基酸、核苷酸等生化物质
十六、洗脱济的条件：
纯度高：
稳定性好：
能完全洗脱下的分离组分：
粘度小；易和所需要成分分开
十七、
十八分配层析
原理：
分配层析实际上是一种连续抽提方式。
如纸层析中滤纸的结合水为固定相，以水饱和的有机溶剂为流动相（展开剂）。
当流动相沿滤纸经过样品点时，样品点中的溶质在水和有机相中溶解度不同而不均匀地分配在两相中，各种组分按其各自的分配系数进行不断分配，从而使物质得到分离和纯化。
载体：
纤维素硅藻土硅胶（柱、纸、薄层等形式）
十九、离子交换层析
基本原理：
离子交换剂
由三部分组成：
基质+电荷基团+反离子水中呈不容解，可释放出反离子反离子可与溶液中其他离子或离子化合物进行可逆交换
离子交换剂与各种水合离子的结合力：
与离子的电荷量成正比，半径的平方成反比因此，离子交换剂对各种离子或
离子化合物有不同的结合力
1.平衡阶段:
离子交换剂与反离子结合2.吸附阶段：
样品与反离子进行交换
3、4.解吸附阶段：
用梯度缓冲溶液洗脱，先洗下弱吸附物质，后洗下强吸附物质5.再生阶段：
用原始平衡液进行充分洗涤，既可重复使用
二十离子交换剂的分类及性质
实用的离子交换剂应满足下列要求：
①有高度的不溶性，即在各种溶剂中进行交换时，交换剂不发生溶解；
②有疏松的多孔结构或巨大的表面积，使交换离子能在交换剂中进行自由扩散和交换；
③有较多的交换基因；
④有稳定的化学物理性质，在使用过程中，交换剂不能因物理或化学因子的变化而发生分解和变形等现象。
一、分类
根据离子交换剂中基质的组成和性质，可将其分成两大类：
1．疏水性离子交换剂：
其基质是人工合成与水结合力较小的树脂
⑴阳离子交换剂：
反离子带正电荷，分强酸型、中强酸型、弱酸型
⑵阴离子交换剂：
与负离子或基团交换，有强碱、中强碱、弱减型
疏水性离子交换剂特点：
交换容量大、机械强度大、流动速度快，适宜分离小分子物质，少数新品可用于蛋白质分离
2．亲水性离子交换剂：
其基质是天然或人工合成亲水性大的物质
⑴纤维素离子交换剂：
以微晶纤维素为基质，有酸碱性不同型号
⑵交联葡聚糖：
以交联葡聚糖G25和G50为基质，（阳性和阴性）
⑶琼脂糖离子交换剂：
以交联琼脂糖CL-6B等为基质（阴阳型号）
二十一离子交换剂的选择
1。
正确选择阴阳离子交换剂
2。
强弱型离子交换剂的选择生物大分子常用弱酸碱性离子交换剂
3。
不同离子型交换剂的选择
为提高交换容量，一般选择结合力较小的反离子；强酸强碱型分别选择H型和OH型；弱酸弱碱型分别选择Na和Cl型
4。
不同基质的选择生物大分子宜选用亲水性基质离子交换剂
缓冲液的选择
1。
缓冲液的pH和离子强度直接影响分离物的交换容量
2。
起始缓冲液的pH和离子强度应有利于样品中的有效成分与离子交换剂结合，而杂质不能结合。
或者相反。
离子强度以0.1为宜。
用阴离子交换剂时缓冲液pH值比有效成分的pI值高一个单位
用阳离子交换剂时缓冲液pH值比有效成分的pI值低一个单位
3。
洗脱液：
离子强度↗
阳离子交换剂↗
pH（逐渐接近pI）
阴离子交换剂↘4。
缓冲液选择的关键在于了解有效成分的等电点，而未知样品则需通过试验来确定（
二十二离子交换剂的处理、再生和转型
操作步骤：
取适量固体离子交换剂，先用水充分膨胀（沸水浴可加快膨胀过程），加过量水悬浮除去细颗粒（倾倒法），用酸碱浸泡以除去杂质并使其带上需要的反离子，
疏水性离子交换剂用2-4倍的2M氢氧化钠或2M盐酸溶液处理
亲水性离子交换剂用0.5M氢氧化钠+0.5M氯化钠或0.5M盐酸处理
（室温下0.5小时）
酸碱处理的先后次序决定了离子交换剂携带反离子的类型
每次用酸碱处理后均应水洗至中性，再用碱酸处理，最后用水洗将至中性，经缓冲液平衡后即可装柱。
再生和转型均可用上述方法，转型时视对离子交换剂反离子的要求而使用不同试剂。
二十三分子筛层析
原理：
凝胶层析也称为排阻凝胶层析、凝胶过滤和分子筛层析。
它是60年代发展起来的，利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的一种方法。
由于被分离物质的分子大小（直径）和形状不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔不能进入凝胶内部，只能沿着凝胶颗粒间的孔隙，随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱，而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进出胶粒网孔，使之洗脱时流程增长，移动速度慢而后流出层析柱。
基质葡聚糖凝胶（sephadex）琼脂糖凝胶（sepharose
二十四葡聚糖凝胶（Sephadex）
1.理化性质白色珠状颗粒，带有大量羟基，亲水性好，性质见表6-2
2.稳定性在温和条件下稳定
3.吸附性凝胶本身具有弱碱性，适当提高离子强度（>0.05）后对碱性蛋白质的吸附可解除。
新购得凝胶对蛋白质可有少量不可逆吸附，可用蛋白质预层析消除。
二十五凝胶的选择和处理
1.凝胶的选择
A/型号所选凝胶型号应与分离目的和分离物分子大小相适应，蛋白质的分离多用SephadexG各型凝胶.
核酸用Bio-gel,Sephacryl或高于其分子质量范围型号的Sephadex
除盐用G-25，混和物间分子质量差异越大，分离效果越好。
B/粒度粒度有粗有细，但与交联度无关，细颗粒相对装柱易均一，分离效果好，但流速慢，宜用大直径层析柱，适宜小量试验。
2.凝胶用量的计算依层析柱的体积和干胶的膨胀度计算
干胶用量（g）=柱体积（ml）/干胶膨胀度（ml/g）
二十六加样与洗脱
1.加样加样量的影响因素：
柱的分辨率、测定被分离物的灵敏度、柱的大小、样品的黏度等，而样品体积、分离物在柱中的洗脱体积或分配系数、柱床体积、样品黏度也直接影响柱的分辨率。
因此，原则是：
在一定范围内，加样体积越小越好。
2.洗脱A/洗脱液通常是：
磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、盐溶液
（NaCl）、甚至是蒸馏水
B/流速通过恒流泵或控制操作压来实现流速的控制与操作压、柱的规格、基质性质密切相关流速慢有利于提高分离效果，但太慢
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