安捷伦高效液相色谱仪最新验证方案.docx
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安捷伦高效液相色谱仪最新验证方案
Agilent1200高效液相色谱仪
验证方案
类别：
编号：
部门：
验证委员会页码：
共16页，第1页
版次：
新订替代：
起草部门：
年月日
审核：
年月日
审阅会签：
（验证委员会）
批准：
年月日
实施日期：
年月日
复印数：
批准：
分发至：
1．概述………………………………………………………………………………………………………3
2．验证目的…………………………………………………………………………………………………3
3．验证依据及验证范围……………………………………………………………………………………3
4．验证工作小组……………………………………………………………………………………………3
5．验证方案审批……………………………………………………………………………………………3
5.1验证方案起草……………………………………………………………………………………………3
5.2验证方案会签……………………………………………………………………………………………3
5.3验证方案批准……………………………………………………………………………………………3
5.4验证方案实施……………………………………………………………………………………………3
6．验证的准备………………………………………………………………………………………………4
6.1文件资料的确认…………………………………………………………………………………………4
6.2售后服务…………………………………………………………………………………………………4
6.3关键性仪表及消耗性备品备件…………………………………………………………………………4
6.4安装检查…………………………………………………………………………………………………4
6.5计算机的安装情况检查…………………………………………………………………………………5
6.6安装确认结论及批准……………………………………………………………………………………5
7．安装验证内容……………………………………………………………………………………………5
7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求…………………………………………5
7.1.1评价仪器的安装条件是否符合GMP及供应商提议的要求…………………………………………5
7.1.2起草标准操作规程……………………………………………………………………………………5
7.1.3仪器校正………………………………………………………………………………………………5
7.2运行确认（也即功能试验）……………………………………………………………………………5
7.2.1测试项目和认可标准…………………………………………………………………………………5
7.2.2验证所需的材料………………………………………………………………………………………5
7.2.2.1玻璃仪器设备………………………………………………………………………………………5
7.2.2.2试剂、标准溶液……………………………………………………………………………………5
7.2.2.3其它辅助设备………………………………………………………………………………………5
7.2.3软件系统安全性确认（必要时）………………………………………………………………………5
7.2.4运行确认的实施………………………………………………………………………………………6
7.2.5运行确认评价及结论…………………………………………………………………………………7
8.性能确认（适用性预试验）…………………………………………………………………………………7
9.拟订再验证项目及周期……………………………………………………………………………………7
10.验证结论…………………………………………………………………………………………………7
1.概述
高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱法。
注入供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号，得到测定结果。
由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求，在调研的基础上，公司于年月购置的精密仪器，其生产厂为，主要用于样品的分析测试。
由组成。
应用软件为，版本号。
2.验证目的
按照GMP的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试工作的需要。
3.验证范围及验证依据
3.1本方案适用于对精密仪器室高效液相色谱仪的验证。
3.2本方案验证依据
3.2.1GB/T21187-2007高效液相色谱仪检定规程
3.2.2高效液相色谱仪操作规程
4.验证工作小组
组长
姓名
职务/职称
部门
成员
5.验证方案审批
5.1验证方案起草
起草部门
签名
日期
设备动力部
年月日
质管部
年月日
5.2验证方案会签
部门
签名
日期
质管部
年月日
设备动力部
年月日
5.3验证方案批准
批准人
签名
日期
质管部
年月日
5.4验证方案实施
实施部门
职责
设备动力部
负责仪器的安装确认。
质管部
负责仪器的运行确认、性能的确认。
6.验证的准备
6.1文件资料的确认
下列文件资料是否齐全，是否符合GMP要求
序号
文件/资料
编号
存放地
1
设备采购定单
2
原版操作说明书安装手册和维修手册（如必要）
3
仪器操作规程SOP
4
仪器使用、维修记录
5
中华人民共和国国家计量检定规程JJG694-2007
6
仪器档案（如必要）
7
中国药典（2010版）附录
8
标准物质证书
9
验证方案
结论：
检查人检查日期
复核人复核日期
6.2售后服务
维修单位：
联系电话：
地址：
传真：
联系人：
检查人日期
6.3关键性仪表及消耗性备品备件：
见附件2
检查人日期
6.4安装检查
对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。
检查内容
要求
方法
结果
环境
室内不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性的物质，无强烈的机械震动和电磁干扰。
目测
环境温度
15℃～35℃
温湿度仪测
环境相对湿度
35%～75%
温湿度仪测
安装位置
仪器应平稳而牢固地安置在工作台上
按要求安装
电压
220V±22V
电压仪测
频率
50Hz±0.5Hz
接地
接地良好
接地电阻表测定
电源线
与插孔吻合
按要求安装
气体管路
气体管路应适用。
按要求安装
冷却水
流量充足、稳定
目测
检查人日期
6.5计算机的安装情况检查
项目
安装的主要软件
文件格式
安装位置
数据文件保存位置
密码复杂性
工作站安装
6.6安装确认结论及批准
结论：
所有物品与检查清单相符，实验室电、气设计安装合理，实验室环境良好，符合仪器安装要求。
气、电及管路连接符合供货方的要求。
仪器安装
检查人日期
批准人日期
7．安装确认
7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求：
见附件3。
7.1.1评价仪器的安装是否符合GMP及供应商提议的要求
查阅设备采购定单、操作手册等，列出设备安装、使用所需条件，包括温度、湿度、通风条件、电路等。
检查仪器安装与使用所处的环境条件，是否符合上述要求。
检查结果记录于附件4。
7.1.2起草标准操作规程（可验证后补充）
标准操作规程
维护保养规程
校正规程
7.1.3仪器校正
由厂商技术人员现场安装、调试，进行运行确认前的校正。
8.运行确认（功能试验）
8.1测试项目和认可标准
根据中华人民共和国国家计量检定规程JJG694-2007、中国药典（2010版）附录确定。
如无相关标准，参考仪器说明书确定。
8.2验证所需的材料
8.2.1玻璃仪器设备计量玻璃仪器需彻底清洗并经检定，一般玻璃仪器要保证洁净。
8.2.2试剂、标准溶液
a）甲醇（色谱纯）；纯化水（0.45nm微孔滤膜过滤）
b）丙酮（色谱纯）；
c）0.25mg/ml的甲硝唑对照品；
d）流动相：
0.3%丙酮-水；甲醇：
水（20:
80）。
8.2.3仪器
a）安捷伦1200高效液相色谱仪；
b）用于药品预处理和衍生的各种玻璃仪器和设备。
8.3软件系统安全性确认
打开计算机开关，待屏幕运行Windowsxp操作系统以后，由可以授权操作该仪器的检验员设定登陆用户名、密码，重新启动系统。
再让其他不知被授权人员登陆，尝试输入用户名和密码，尝试能否进入计算机系统，连续尝试5次。
不知用户名和密码的操作人，应无法登陆计算机系统。
结论：
检查人：
日期：
8.4运行确认的实施
8.4.1仪器各单元开机性能确认
a）泵及进样器：
打开电源开关，泵及进样器进行自检，并显示主画面。
b）检测器：
打开电源开关，检测器灯打开，并进行自检6min，氘灯在三个内置波长257nm、521nm、656nm处校准，若偏差小于±1nm，自检通过，若大于1nm，出现自检错误提示。
8.4.2泵流量设定值误差和流量稳定性误差的确认
a）测试条件：
流动相：
超纯水；色谱柱：
4.6mm×250mm；温度：
室温。
b）测试方法：
启动仪器，以水作为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的10ml容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收收集五分钟流出的流动相，精密称定，每个流速测定三次，记录测试温度，按下列计算流量设定值误差S1和稳定性误差S2。
SS=（Fm-Fs）/Fs×100%
SR=（Fmax-Fmin）/
×100%
式中：
SS为泵流量设定值误差（%）；
SR为流量稳定性误差（%）；
Fm=（W2-W1）/（ρ•t）,为流量实测值（ml/min）；
W2—容量瓶+流动相（g）；
3
W1—容量瓶的质量（g）；
Fs—流量设定值
ρ—实验室温度下水的密度（g/cm）；
t—收集流动相的时间（min）；
—同一组测量值的算术平均值（ml/min）；
Fmax—同一组测量中流量最大值（ml/min）；
Fmin—同一组测量中流量最小值（ml/min）。
c）测试标准：
流量设定值F（ml/min）
0.500
1.000
1.500
测量次数
3
3
3
收集流动相时间（min）
25
15
10
允许误差
SS
5%
3%
3%
SR
3%
2%
2%
8.4.3梯度准确度的确认
a）测试条件：
流动相：
0.3%丙酮-水检测波长：
254nm
流速：
1.000ml/min柱温：
30℃。
b）测试方法：
按下表设置梯度洗脱顺序，以两通代替色谱柱连接管路，先用超纯水冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线，测定三次，取各梯度级高度的平均值，由曲线图测量100%B（C）梯度级平均高度各梯度级实际体积%，每个梯级的理论体积%和实际体积%之差即为梯度准确度，以最大差值为梯度准确度误差。
梯度洗脱表
时间
A通道（C通道）：
超纯水
B通道（D通道）：
0.3%丙酮水溶液
0.00min
100%
0%
3.00min
100%
0%
6.00min
0%
100%
9.00min
0%
100%
9.01min
20%
80%
12.00min
20%
80%
12.01min
40%
60%
15.00min
40%
60%
15.01min
60%
40%
18.00min
60%
40%
18.01min
80%
20%
21.00min
80%
20%
21.01min
100%
0%
24min
100%
0%
c）测试标准：
梯度准确度误差≤±1%。
8.4.4自动进样器精密度的确认
a）测试条件：
流动相：
甲醇-水（20:
80）对照品：
0.25mg/ml甲硝唑对照溶液
色谱柱：
C18色谱柱检测波长：
320nm
进样量：
20µl流速：
1.000ml/min
柱温：
37℃
b）测试方法：
对照品置于进样瓶，共进样6针，记录峰面积，求6针RSD。
c）测试标准：
RSD≤1.5%
8.4.5自动进样器线性的确认
a）测试条件：
流动相：
甲醇-水（20:
80）对照品：
0.25mg/ml甲硝唑对照溶液
色谱柱：
C18色谱柱检测波长：
320nm
进样量：
（1、5、10、15、20）µl流速：
1.000ml/min
柱温：
37℃
b）测试方法：
对照品置于进样瓶，不同进样量各进一针，记录峰面积，求进样量与峰面积的相关系数。
c）测试标准：
相关系数r≥0.999
8.4.6检测器波长准确度的确认
以水流过流通池做一空白扫描，然后以手动的方式将甲硝唑对照品用水稀释10倍后注入流通池，扫描250nm-400nm波长范围内的吸收情况，得到甲硝唑溶液在紫外—可见光区的吸收光谱曲线。
记录其在275nm、300nm、320nm、350nm附近波长处的最大或最小吸收波长，分别找出各点最大或最小波长与标准波长之差即为波长示值误差；重复测定三次，各点最小与最大之差即为波长重复性误差。
检测器波长的示值误差ζ1和重复性误差ζ2
波长
275nm附近（max）
300nm附近（min）
320nm附近（max）
350nm附近（min）
实测波长
标准波长
272nm
302nm
320nm
360nm
测定次数
3
3
3
3
示值误差ζ1
重复性误差ζ2
8.4.6基线漂移和极限噪声的检定
a）测试条件：
流动相：
甲醇-水（20:
80）对照品：
0.25mg/ml咖啡因对照溶液
色谱柱：
C18色谱柱检测波长：
320nm
进样量：
20µl流速：
1.000ml/min
柱温：
37℃
b）测试方法：
将仪器各部分连接好，开机，记录基线30-40分钟，计算基线漂移和噪声。
c）测试标准：
基线噪声：
≤±1.0×10-4AU；基线漂移：
≤±1.0×10-4AU/hr。
8.4.7检测器线性的确认
a）测试条件：
流动相：
甲醇-水（20:
80）对照品：
（5、10、25、50、100）µg/ml咖啡因对照溶液
色谱柱：
C18色谱柱检测波长：
320nm
进样量：
20µl流速：
1.000ml/min
柱温：
37℃
b）测试方法：
5个浓度对照品置于不同进样瓶中，各进一针，记录峰面积，求个对照品浓度与峰面积的相关系数
c）测试标准：
相关系数r≥0.999
8.4.8最小检测浓度的确认
a）测试条件：
流动相：
甲醇-水（20:
80）对照品：
1×10-7g/ml甲硝唑对照溶液
色谱柱：
C18色谱柱检测波长：
320nm
进样量：
20µl流速：
1.000ml/min
柱温：
37℃
b）测试方法：
以流动相冲洗系统至基线平稳后，进样，记录色谱图，由色谱图峰高及基线噪音，按下式计算最小检测浓度C
C=
2N×C
H
式中：
C—最小检测浓度，g/ml
N—基线噪音峰度，mAU
C—标准溶液浓度，g/ml
H—标准溶液色谱峰高，mAU
c）测试标准：
≤1×10-8g/ml咖啡因溶液。
8.4.9运行确认评价及结论
9.性能确认（适用性试验）
9.1检查项目：
甲硝唑氯化钠注射液中甲硝唑含量的测定。
9.2检查的目的和标准：
检查仪器在测试供试品的过程中，含量测定的相对偏差。
检查依据为《中国药典》2010年版二部。
9.3验证所需要的材料和仪器（同运行确认）。
9.4测定方法
a）测定条件：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（20:
80）为流动相，检测波长为320nm，温度为37℃，理论板数按甲硝唑计算不得少于2000。
b）对照品溶液的配制：
精密称定甲硝唑对照品约25mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加流动相（甲醇-水（20:
80））溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.25mg/ml）。
c）供试品溶液的制备：
精密量取本品5ml置100ml容量瓶中，加流动相（甲醇-水（20:
80））稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液（0.25mg/ml）。
d）测定：
精密量取对照品和供试品各20µl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。
甲硝唑（C6H9N3O3）%=
A样×C标
A标×C样
式中：
A样为供试品的峰面积；
A标为对照品的峰面积；
C样为供试品的浓度；
C标为对照品的浓度。
e）测定标准：
含甲硝唑应为标示量的93.0%—107.0%。
10.拟订再验证项目及周期
设备动力、质量部根据设备仪器情况，确定再验证周期项目及周期（附件6），报验证委员会审核。
11.验证评价及结论（附件5）
附件：
1验证方案申请及批准书（附件1）
2关键性仪表及消耗性备品情况（附件2）
3仪器组成信息及性能、质量及适用性评价表（附件3）
4仪器安装条件检查记录（附件4）
5验证评价及结论（附件5）
6再验证项目及周期（附件6）
7验证证书（附件7）
附件1.
仪器验证方案申请及批准书
验证方案名称
Agilent1200高效液相色谱仪验证方案
拟验证时间
验证方案号
放置地点
精密仪器室
验证负责人
验证参加人员
验证内容
（参数）
验证依据
验证方案
（辅助资源）
起草人部门年月日
验证委员会
审批
验证委员会：
年月日
附件2.
关键性设备及消耗性备品情况
仪器名称
高效液相色谱仪
型号
Agilent1200
制造厂商
仪器编号
生产日期
企业编号
使用科室
质检中心
放置地点
精密仪器室
关
键
性
设
备
设备名称
生产厂家或型号
校正证书编号
保存处
校正周期
消
耗
性
备
品
品名
生产厂家和型号
单位
数量
保存处
确
认
使用部门
年月日
设备动力部
年月日
质管部
年月日
附件3.
仪器组成信息及性能、质量及适用性评价表
仪器名称
高效液相色谱仪
型号
Agilent1200
制造厂商
仪器编号
生产日期
企业编号
使用科室
质检中心
放置地点
精密仪器室
仪器的完整性
检查结果
仪器的旋钮，按键，开关是否正常
仪器各部件接头是否紧密，牢固
仪器是否密闭
仪器组成信息及性能
主机
辅件
性
能
质
量
要
求
评价
结果
确
认
使用部门
年月日
质管部
年月日
验证委员会
年月日
附件4.
仪器安装条件检查记录
仪器名称
高效液相色谱仪
型号
Agilent1200
制造厂商
仪器编号
生产日期
企业编号
使用科室
质检中心
放置地点
精密仪器室
设备条件要求
实际条件
温度
15～35℃
湿度
35%～75%
电压
220V±22V
其
它
条
件
工作台不受阳光直射。
室内应无腐蚀性气体或其它影响测定的气体干扰。
周围应无影响测定的强电场、磁场
周围应无强烈震动。
排风装置良好
确
认
使用部门
年月日
质管部
年月日
验证委员会
年月日
附件5.
验证记录
验证对象
Agilent1200高效液相色谱仪
验证时间
验证方法
验证编号
温度
相对湿度
验证方法描述：
验证记录：
序号检测参数参数标准值检测结果
（或前次检测结果）
检测：
年月日审核：
年月日
数据分析处理：
分析人：
年月日
验证评价及结论
科室负责人：
年月日
备注：
附件6.
再验证项目及周期
设备编号
设备名称
高效液相色谱仪
型号
Agilent1200
序号
项目
标准
验证方法
周期
1
线路连接
2
附件检查
3
清洁
4
4
外观检查
1次/月
5
功能试验
方法、结果
6
7
8
9
确认
使用部门
年月日
设备动力部经理
年月日
验证委员会
年月日
附录7.
验证证书
设备编号：
设备名称高效液相色谱仪
型号：
Agilent1200
上述设备已按验证方案进行验证，各项验证结果符合标准要求，
批准使用。
验证报告名称：
验证报告编号：
验证完成日期：
有效期：
**********制药股份有限公司
验证委员会
年月日
备注：
1.设备应在当前验证条件下使用，使用条件发生变更
升级会员 