植物组织培养知识点归纳.docx
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植物组织培养知识点归纳
植物组织培养知识点归纳
1第1章植物组织培养:
指植物器官、组织、细胞、原生质体等的培养。
体内使用人工培养基使它们生长成完整的植物
2，外植体:
在植物组织培养中，
为无菌细胞、组织、器官等。
从活植物中提取并接种在培养基上的称为外植体。
3，愈伤组织:
指在人工培养基上无序地从外植体中生长出来的大量薄壁细胞。
4.
1的应用。
1农业应用。
幼苗的快速繁殖。
无病毒培养3。
（1）倍性育种，缩短育种年限，具有明显的杂种优势；
（2）克服远缘杂交（胚胎培养）的不亲和性和不育性；（3）种质保存（4）变异
2的创造，在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。
用于基因工程创造植物新种质用于植物生长发育的理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学、细胞和分子生物学等。
3。
使用组织培养材料作为植物生物反应器
第2章
1，全能性:
任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物
所必需的所有遗传信息以及发育成完整植物的能力。
2，细胞分化:
指导致细胞形成不同结构和功能变化或潜在发育模式的过程
3，去分化:
指在体外生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构
，恢复分生组织状态，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程
4，再分化:
指去分化细胞恢复其分化能力并形成具有
特定结构和功能的细胞、组织、器官甚至植物的过程
5，植物组织培养中经常遇到的问题及解决方法
1，污染与预防:
1，真菌污染后，如果孢子已经形成，必须在高压灭菌后丢弃然而，在细菌污染的情况下，只要及时发现，材料仍然可以使用，并且材料上部不易受细菌影响的部分被切割和转移。
2.用抗生素等抗菌剂处理会影响植物材料的正常生长第二，
的褐变和防止
（1）选择合适的外植体
（2）适宜的培养条件（3）用抗氧化剂连续转移
（4），玻璃化和防止
（1）提高培养基中的溶质水平和降低培养基中的水势；
（2）减少培养基中氮化合物的量；（3）增加光照；
（4）增加容器通气量和施用CO2肥料对降低试管苗玻璃化有明显效果。
（5）降低培养温度和进行变温培养有助于减少试管苗玻璃化现象；（6）降低培养基中细胞分裂素的含量，加入适量的脱落酸4.其他问题及解决办法
（1）培养初期:
1，培养用水浸泡，变色，坏死，茎段干燥
改进措施:
更换其他杀菌剂或降低浓度，缩短消毒时间；尝试其他部分，并在开始生长时获取材料。
2，长期培养几乎没有反应
的改进措施:
改变基本培养基或调整培养基的组成，特别是调整盐离子的浓度，增加生长素的量，尝试2，4-D，并调整培养温度3.愈伤组织生长过快且疏松，后期被
淹没。
改进措施包括减少激素用量，适当降低培养温度，调整无机盐（尤其是铵盐）含量，适当增加琼脂用量以增加培养基硬度。
4、愈伤组织过紧、光滑或突出、过厚、生长缓慢
改进措施:
减少细胞分裂素的用量，调整细胞分裂素与生长素的比例，降低糖浓度5.侧芽不发芽，皮层过度膨胀，皮孔长出愈伤组织。
改进措施:
减少激素用量，采用老枝
（二）继代培养阶段
1，分化苗数量少，速度慢，分枝少，单株苗高
。
改进措施包括增加细胞分裂素、降低温度、改善光照、将单芽继代培养改为丛芽（丛芽）
继代培养
2，苗木过度分化，生长缓慢，畸形，节间极短，苗木丛生，微型化改进措施:
减少或停用细胞分裂素一段时间，调节温度
3，分化率低，畸形，长时间培养后幼苗愈伤组织形成的改善措施:
减少生长素用量，适当降低温度4.叶厚变脆的改善措施
:
减少激素用量，避免叶片与培养基接触5.不定芽偶尔在再生苗的叶缘和叶表面分化为
。
改进措施:
适当减少细胞分裂素或分阶段使用这种再生方法6.丛生苗太细太弱，不能生根或移栽
改良措施:
减少细胞分裂素，避免赤霉素，延长光照时间，增强光照，及时转移
，降低接种密度
7、嫩绿苗、偏失绿
改良措施:
根据营养元素的缺乏调整培养基，调整酸碱度，调节温度和光照8.对长势弱、黄叶、黄叶和死苗夹在丛式苗中的苗的改良措施:
适时切换，降低密度，调整激素配比和营养元素浓度，改善瓶内
体状况，控制温度（3）在生根阶段
1，如果根长时间不生根，在基部切口没有合适的愈伤组织
改良措施:
选择合适的生长素或增加生长素的量，适当降低无机盐的浓度2.愈伤组织长得太快太大，根茎膨胀或变形，几个根平行连接或愈合。
改进措施:
改变生长素类型或联合使用几种生长素，降低浓度，添加VB2或PG等。
减少骨痂等。
6，操作技术1，洗涤技术
1，玻璃器皿洗涤新购置的玻璃旧玻璃2，塑料制品洗涤1%稀盐酸浸泡12小时清水干燥洗衣粉新塑料器皿打开并使用塑料
2%氢氧化钠浸泡
|12小时蒸馏水
清水
12小时%-5%盐酸30分钟
9
6金属制品
热洗衣粉
洗涤干燥
2灭菌工艺1灭菌
（1）介质灭菌:
高温高压湿热灭菌
（2）玻璃器皿灭菌:
蒸汽高压灭菌干热灭菌（3）塑料器皿的灭菌:
大多采用高压蒸汽灭菌；
（4）金属器具灭菌:
燃烧灭菌；浸泡在95%酒精中，在酒精火焰上燃烧，冷却后使用。
（5）接种室灭菌
接种室→紫外线灯照射→空气消毒灭菌
洁净工作台→紫外线灯照射，70%-75%酒精擦洗→接种培养物（6）外植体灭菌
用水冲洗10-XXXX年获得纯系，而小孢子培养只需一年
2，有利于筛选隐性突变体，提高选择效率；3.这有利于隐性基因控制性状的选择。
4.快速获得自交系的超雄性植株
第五章
1，单细胞培养方法1，护理培养方法2，微室培养方法3，平板培养方法
2，细胞悬浮培养的意义:
3，细胞培养的应用
1，植物次生代谢产物的产生2，突变体选择3，多变体的诱导4，原生质体培养的意义
1
2，原生质体容易吸收外来遗传物质，可作为理想的受体系统。
5.原生质体培养方法和融合方法原生质体培养方法:
1，液体浅层培养2，固体双层培养3，固体平板培养4，琼脂糖珠培养5，双层滤纸平板培养融合方法:
（1）无机盐诱导融合
（2）高酸碱度-高钙离子融合（3）聚乙二醇融合（4）电融合技术
6，单倍体植物:
细胞中只有配子染色体的植物7.细胞培养:
指从体内取出组织，分离细胞，或使用细胞系在体外模拟人体的生理环境，使其在无菌、适宜的温度和一定的营养条件下存活和生长，并保持其结构和功能特征。
8.冷冻保存:
一种将细胞等储存在液氮中并能在解冻后存活的技术。
9，种质保存:
指在自然或人工创造的适宜环境条件下，保存植物种质以保持其活力和
遗传的技术。
10，植物离体繁殖:
指利用植物组织培养技术体外培养外植体，在短时间内获得大量遗传一致的再生植株的方法
11，原生质体:
指细胞壁被去除、裸露且有活力的原生质体。
12，原生质体融合:
指不同类型的原生质体在人工控制下融合成一个整体而不经过有性阶段形成杂种细胞并进一步发育成杂种植物的技术
第6章
1，植物离体繁殖和传统营养繁殖的优缺点
？
繁殖效率高，生长速度快；？
培养条件可控。
？
占用空间小；
？
管理方便，有利于自动化控制。
？
便于种质交流和保存。
2，快速繁殖器官再生型
？
短枝型？
丛生芽形成？
不定芽形成？
胚胎发生型？
原球茎形成型
3，快速繁殖程序和影响因素程序:
a）无菌（或初级）培养物的建立b）繁殖体的繁殖c）芽的生根
d）影响小植株移植和驯化的因素:
？
解释？
中等？
训练条件？
亚文化？
移植
4，商业化生产中应注意的问题1污染0
污染源:
培养基、器皿和器具污染；外植体没有完全灭菌。
操作原因；出于环境原因的污染控制:
完全灭菌；正确操作；保持手术区域清洁和无菌。
2遗传稳定性○
影响遗传稳定性的因素:
基因型；亚文化的数量；器官发生模式
减少遗传变异的措施:
选择合适的基因型；减少亚文化的数量；采用适当的器官发生方法；降低生长调节剂的浓度3玻璃化:
○
原因:
琼脂和蔗糖浓度低；培养温度偏高。
高浓度细胞分裂素；乙烯的影响；弱光；培养基含量高等因素
预防措施:
提高介质硬度；降低培养基的水势；增加蔗糖含量；增加培养瓶中的气体交换，降低湿度；增加照明、降低温度等4褐变:
培养料中的酚类物质被氧化形成影响
的因素:
植物种类和品种（如木本植物比草本植物更褐）；外植体的年龄和取样时间；外植体的损伤程度；光和温度因素；中等成分
第7章
1，无病毒机制和无病毒方法1，热处理无病毒方法:
原理:
①热处理能钝化病毒活性，减缓或阻止病毒增殖并丧失感染能力；
②同时加速植物细胞的分裂，使植物细胞能够在与病毒繁殖的竞争中获胜。
2，体外培养和无病毒微体嫁接方法:
原理:
用极小（小于0.2毫米）的茎尖作为接穗与砧木连接（无菌种子培养，无
苗，砧木无毒），然后将嫁接砧木嫁接到新的培养基上培养
3，显微茎尖培养病毒消除方法:
原理:
①病毒在植物中分布不均。
病毒离顶端分生组织越近，病毒浓度就越低
2病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争，在快速合成的植物细胞中，通常由n-
合成的蛋白质占优势
4，珠心组织培养脱毒方法:
原理:
病毒通过维管组织传播，但珠心组织与维管组织没有直接联系，因此可以获得无病毒的
植物该方法已用于去除病毒
5，如柑桔牛皮癣、静脉突出症、柑桔裂皮病和快速腐烂病。
愈伤组织培养脱毒方法:
原则:
在同一感染组织中，存在未感染病毒的细胞群落，这些无毒细胞通过定植产生无病毒组织
2，普通无病毒植物的检测方法
a）直接观察b）血清鉴定c）电子显微镜鉴定d）生物鉴定e）分子检测
第8章
1，种质资源冷冻保存的原则和一般程序
|细胞冷冻和冷冻的保护性脱水原则:
2溶液玻璃化理论0
程序:
1。
植物材料的选择（培养）
2，材料的预处理
3，冷却冷冻和超低温保存
4，解冻:
快速解冻，缓慢解冻5，再培养
6，超低温保存后细胞或组织生存力的检测
2，限制生长和保存种质资源的方式1）高渗保存
2）生长抑制剂保存3）其他抑制生长的保存方法
低压保存方法:
降低培养物周围的气压以达到抑制生长的目的，分为低气压和低氧压
，保存原则相似
饥饿法:
从培养基中减去1~2种营养元素，使植物缺乏相关营养并保持最低生长量。
干燥保存法:
降低培养料的含水量
矿物油覆盖法:
将培养料与空气隔离。
慢速生长
弱光培养:
适当降低光照强度，缩短光照时间，然后减慢试管苗的生长
PPT试题集
1，植物细胞全能性:
任何具有完整细胞核的植物细胞都具有形成完整植物所必需的所有遗传信息和发育成完整植物的能力
2，细胞分化:
指使细胞形成不同结构和功能变化或潜在发育模式的过程
3，去分化:
指在体外生长的细胞、组织或器官逐渐失去其原始结构和功能，并恢复其分生组织状态，形成无组织结构的细胞簇或愈伤组织的过程
4，再分化:
指去分化细胞恢复其分化能力并形成具有特定结构和功能的细胞、组织、器官甚至植物的过程5.体外再生植物的方法有哪些？
根、茎或芽器官的出现可以重建植株。
最好是先诱导分化芽，然后生根。
（芽前有根，根前有愈伤组织）
离体培养再生植株的主要途径是:
器官发生；胚胎发生（类似于合子胚的过程，体细胞胚在形态学和生化水平上类似于合子胚）
6和愈伤组织是如何在器官发生（外植体细胞直接形成器官原）、器官发生（外植体先形成愈伤组织，然后产生器官原）中生长的？
在大多数情况下在细胞去分化过程中形成愈伤组织愈伤组织细胞通常是异质的，没有明显的极性。
形成过程可分为诱导期、分裂期和分化期。
诱导期（启动期）:
细胞准备好分裂的时期。
细胞大小几乎不变，内部发生生理生化变化，蛋白质和核酸快速合成。
分裂期:
外层细胞分裂，中间细胞通常不分裂，形成小核细胞分裂快，结构松散，缺乏结构，浅而透明在原始培养基上，细胞必须及时分化和转移，这样才能不受限制地进行细胞分裂，保持未分化状态。
分化期:
细胞在形态和生理功能上的分化，出现不同形态和功能的细胞生长:
诱导期过后，外植体外层的细胞分裂，并在组织受损表面形成一层愈伤组织。
细胞数量迅速增加，表面细胞的平均重量减少，体积减少。
降低温度会减慢细胞生长速度，增加平均体积。
纹理类型:
脆而密高浓度的生长素能使愈伤组织变脆。
高浓度的细胞分裂素可以使它变得紧凑。
生理生化变化:
次级生物量合成能力的变化，激素需求的变化等。
7.植物体细胞胚胎发生的途径是什么？
直接途径:
是指在子叶、花序、珠心等外植体的某些部位，由胚性细胞直接诱导和分化体细胞胚
的间接途径:
外植体去分化形成愈伤组织，然后愈伤组织的一些细胞被“确定”为胚细胞，然后体细胞胚被分化。
大多数体细胞胚是通过这一途径形成的通常有两个阶段:
（1）胚胎发生丛。
胚胎发生丛由小细胞组成，细胞内有小液泡和致密的细胞质
（2）胚状体的发育将EC转入培养基中，还原或去除生长素，还原
原氮，培养
8，影响植物离体形态发生的因素有哪些？
第一，植物种类和基因型
1，植物种类有不同程度的难度；被子植物比裸子植物容易。
2.同一物种的不同基因型之间有很大差异。
第二，培养物的生理状态为256±1991，发育年龄:
一般年轻状态比年老状态具有更高的组织形态发生能力；2.培养器官或组织的类型:
细胞分裂旺盛的器官更好；
3，培养时间和细胞倍性:
旺盛生长期的愈伤组织一般用于诱导器官形成（3）培养基
1和营养成分
普遍认为培养基中的铵态氮和钾离子有利于胚状体的形成，增加无机磷含量可以促进器官发生茎尖培养和芽诱导培养基主要是MS及其改良培养基和B5培养基。
茎尖培养的初始培养基和芽增殖的培养基通常是不同的。
碳水化合物的类型和浓度在胚状体发育中起重要作用。
由于缺糖或含糖量低，不能形成胚状体。
2.植物激素和生长调节剂（起主导作用，通过影响内源激素的平衡发挥作用）
（1）生长素:
促进外植体的生长和生根，与细胞分裂素一起诱导不定芽分化和侧芽萌发生长2，4-D诱导体细胞胚胎发生
（2）细胞分裂素:
促进分化和芽形成，抑制根发育和衰老（3）赤霉素:
GA3促进茎伸长，打破休眠，促进芽的诱导和形成（4）乙烯:
（5）脱落酸:
它对体细胞胚胎发生和成熟很重要，能促进胚性愈伤组织的形成和体细胞胚胎发生
3，培养基性质
（1）愈伤组织诱导:
在固体培养基上（胡萝卜、芦笋）
（2）细胞和胚状体诱导:
在液体培养基上
（3）胚状体或早期胚状体培养的诱导:
渗透压要求高4，培养条件
1，在光培养条件下，光影响细胞状态，而不是光合作用连续光照有利于培养细胞中血管组织的形成。
日间光照有利于极性的建立和形态发生光强通常需要1000-5000lx植物之间有差异。
光照周期为10~16h/天不同的波长有不同的光质效应，蓝光有利于芽的分化，红光有利于根的产生。
2，温度:
最大培养温度为25±2℃。
花药培养在低温或高温下进行。
3.气体:
氧气、二氧化碳、乙烯和其他气体的浓度和通风状况
9，常见的灭菌方法有哪些？
1物理方法:
物理灭菌、干热、湿热、辐射处理、物理灭菌、过滤、离心、沉淀等。
○
2化学方法:
消毒剂和抗生素灭菌○
10，接种材料如何消毒？
首先，将材料切割成合适的尺寸，即灭菌容器适于释放人员。
将水龙头放在自来水下清洗几分钟到几个小时。
可以加入洗衣粉进行洗涤
秒，在70%-75%的酒精中浸泡10-30秒。
第三步，用0.1%氯化汞作为消毒剂处理5-10分钟重金属汞离子可以消毒高汞。
第四，用无菌水冲洗4-6次，每次不少于3分钟，以尽可能去除残留毒物11、组织培养中如何避免污染？
1，清洁并彻底消毒组织培养所用的仪器2，不要使用过期的母液作为培养基3，对培养基
4进行湿热灭菌处理，在接种室配备空气过滤器或安装紫外线灯5，并定期消毒培养室
12，
在离体茎尖培养后会发生什么样的培养反应如何获得无菌培养材料？
1，获得无菌外植体，建立原代培养
3，形态发生和植株再生
4，观察和记录培养产物，清洗外植体，用灭菌剂灭菌外植体，用无菌水洗涤外植体3-5次
14。
为什么未成熟胚胎的培养基和培养条件比成熟胚胎更严格？
可以在相对简单的培养基上萌发和生长以形成幼苗，只要提供合适的生长条件和打破休眠，因为成熟胚的生长不依赖于胚乳的贮藏营养。
未成熟胚胎对营养物质的需求比成熟胚胎更复杂，以保证体外未成熟胚胎能够沿着胚胎发生途径发育。
15，比较胚胎培养、胚珠培养和子房培养的异同
（1）胚珠培养在人工控制的条件下，胚珠体外培养使其生长发育形成幼苗的技术由于未成熟胚的分离困难，胚珠的分离相对容易，胚珠培养经常用于未成熟胚的培养。
有两种类型:
受精胚珠培养和未受精胚珠培养，以防止杂种胚的早期败育并获得杂种植株。
受精前的胚珠培养可作为体外受精的基础；未受精的胚珠可以被培养以获得单倍体植株用于单倍体育种。
（2）与胚培养相比，可分为成熟胚培养和未成熟胚培养，其中成熟胚是子叶期后的胚，可以在简单的培养基上萌发和生长对营养条件的要求并不严格。
培养发育早期的胚胎对栽培技术和条件的要求相对较高。
其作用是克服远缘杂交的不亲和性，打破种子休眠，缩短育种周期，提高种子发芽率。
（3）子房培养包括授粉子房培养和未授粉子房培养，授粉子房培养形成成熟果实，未授粉子房培养形成小无籽果实。
它的功能是获得杂交植物；未受精精子室内培养为体外受精提供了技术基础。
单倍体植株可以从未受精的子房培养中获得，并用于单倍体育种。
16.胚胎培养在育种中有什么应用？
1，克服了远缘杂交的不亲和性；例如，“胚胎拯救”技术被用来获得远缘杂种2.打破种子休眠，缩短育种周期
3，提高种子发芽率；特别是对于植物种子的一些长期营养繁殖17.体外授粉的主要意义是什么？
能克服远缘杂交中的不亲和性，特别是子房离体授粉和胚珠离体授粉，并能消除柱头和花柱引起的受精前障碍。
18.花药培养
的意义缩短了育种周期，为新品种的选育开辟了新的途径19.花药培养方法
平板培养；液体培养；双层文化；护理培训；微室文化；条件培养基培养XXXX年:
单倍体加倍形成纯合二倍体；
2。
提高选择效率:
加倍后的纯合二倍体具有相同的等位基因，没有明显的隐性基因相互覆盖；（3）获得纯雄性植物等特殊育种材料；4.选育自交系
21，什么是细胞培养方法？
它的特点是什么？
方法:
护理文化；微室文化；平板培养
（1）护理培养法是指用一块生长活跃的愈伤组织来护理单个细胞并使其生长和增殖的方法。
特点:
①简单易操作
②效果好，容易成功
③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程
（2）微室培养:
细胞在少量培养基中培养
特征:
培养过程中可连续进行显微镜观察，并可记录细胞生长、分裂和形成
团簇的全过程。
（3）平板培养法是一种将单细胞悬液和融化的琼脂培养基均匀混合并铺展在培养基质薄层上的培养方法
特点:
定点观测；分离单细胞系比浅层液体培养容易。
培养细胞的气体交换不是
常
22，如何测量培养细胞的活力？
1、TTC法
2、荧光素二乙酸法（FDA法）3、伊凡蓝染色法
23、FDA活力测定的原理是什么？
？
食品和药物管理局本身没有极性，不能发出荧光，可以自由进出细胞膜？
在活细胞中，FDA被酯酶切割，释放极性荧光素？
荧光素不能自由穿过质膜并在活细胞中积累？
荧光素不能在死细胞中积累。
？
在紫外线照射下，活细胞中的荧光素发出绿色荧光
24。
如何获得同步培养的细胞？
①体积选择法:
通过细胞体积分级直接分选同一周期的细胞，然后在同一培养体系中传代培养相同状态的细胞。
②饥饿法:
在培养系统中，如果细胞生长的基本成分丢失，细胞分裂将因饥饿而受阻，从而停留在一定的分裂期。
③抑制方法:
用一些DNA合成抑制剂处理细胞，使细胞停留在DNA合成的前期。
抑制解除后，可以获得处于相同细胞周期-G1时相的同步细胞④低温方法:
低温处理也能提高培养系统中细胞的同步化程度。
25.影响细胞培养的因素？
1，培养基组成:
N6，MS，B5适合单子叶细胞培养，
MS，B5，LS，SL适合双子叶细胞培养条件培养基适合单细胞和低密度细胞培养需要更高浓度的硝态氮、铵态氮和无机磷。
2，细胞密度:
培养基的组成和初始细胞密度对单细胞培养的成败有影响
初始密度:
细胞培养的最低有效密度，即能使细胞分裂和增殖的最低接种量，低于此量细胞不能分裂，甚至很快解体死亡。
3，植物生长调节剂:
细胞悬浮培养通常表现出自然聚集现象。
添加2，4-D、少量水解酶或酵母提取物可增加细胞分散。
4、加入酸碱度和CO2浓度为
的乙二胺四乙酸，使铁和其他金属离子能长期有效。
在悬浮培养中，酸碱度变化很大。
硝酸盐氮和铵氮之间的调节可用作稳定酸碱度的方法二氧化碳对细胞培养影响不大，但在低密度细胞培养中，二氧化碳可能在诱导细胞分裂中起重要作用。
26.细胞悬浮培养
用于在液体培养基中悬浮离体植物细胞的无菌培养物27、分批培养
是指将细胞分散在一定体积的培养基中进行培养，当培养物增殖到一定量时，转移传代培养，建立单细胞培养这是细胞生长和细胞分裂的生理生化研究中常用的培养方法。
28.连续培养
是一种使用特殊培养容器进行大规模细胞培养的方法。
在培养过程中，不断提取悬浮培养物，并注入等量的新鲜培养基，使培养物不断补充营养，保持恒定体积的培养物
27，解释了原生质体分离中机械分离和酶分离的特点
机械分离:
排除酶对原生质体结构和代谢活性的影响这种方法很乏味；原生质体产量低；血浆壁的高度分离损害细胞
酶分离法:
条件温和，原生质体完整性好，活性高，产量高28、原生质体纯化方法？
决定原生质体活力的方法有哪些？
的纯化方法:
（1）过滤离心法:
采用40-100μm筛网过滤收集细胞，采用低速离心收集沉淀，重复3-4次获得原生质体
（2）漂浮法:
原生质体比重小，漂浮在一定的渗透溶液（如25%蔗糖溶液）中，用吸管收集
（3）界面法测定
活力:
（1）形态鉴定:
形态完整、细胞质饱满、颜色鲜亮的原生质体是活的
（2）染色识别:
用0.1%酚藏红或伊文思蓝染色活细胞未染色，
个死细胞染色
29，原生质体培养方法及特点简介
固体平板培养法；浅层液体培养；固液双层培养法；琼脂糖珠培养；双层滤纸平板培养
30，原生质体融合的方法有哪些？
融合方法
（1）无机盐诱导的融合
是由无机盐如NaNO3、KNO3、Ca2（NO3）2、氯化钠、氯化钙、葡萄糖硫酸钠、葡萄糖硫酸钾等诱导的最早的融合方法已经被应用，但是由于异核体形成率低和对细胞的毒性，目前还没有被广泛应用。
（2）高ph-高钙离子融合
0.05mol/l氯化钙2.2ho，pH9.5-10.5，能改变质膜和融合体的表面特性
由于其异核体形成率低和对细胞的毒性而未被广泛使用。
（3）聚乙二醇融合
融合原理:
在短时间内，细胞质膜粘附形成细胞质桥进行融合
32，试描述植物快速繁殖的全过程及其影响因素
工艺:
无菌（或第一代）培养的建立→繁殖体的增殖→芽的生根→小植株的移植和驯化。
影响因素:
外植体、培养基、培养条件、继代培养、移栽
34，植物快速繁殖的器官发生类型有哪些？
1短枝型0
2丛生芽型0
3不定芽型0
4胚状体型0
5原球茎型0
36，植物的离体繁殖和商品化生产应注意哪些问题？
1污染○
污染源:
媒介、用具和用具污染；外植体没有完全灭菌。
操作原因；出于环境原因的污染控制:
完全灭菌；正确操作；保持手术区域清洁和无菌。
2遗传稳定性○
影响遗传稳定性的因素:
基因型；亚文化的数量；器官发生模式
减少遗传变异的措施:
选择合适的基因型；减少亚文化的数量；采用适当的器官发生方法；降低生长调节剂的浓度3玻璃化:
○
原因:
琼脂和蔗糖浓度低；培养温度偏高。
高浓度细胞分裂素；乙烯的影响；弱光；培养基含量高等因素
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