植物组织培养实验.docx
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植物组织培养实验
实验一植物组织培养实验室的构造和功能
一、目的要求：
掌握如何组建植物组织培养实验室，熟悉组培中设计的各种仪器设备和器皿用具。
二、仪器与用具
超净工作台、空调机、蒸馏水发生器、高压灭菌锅、低温冰箱、普通冰箱、电磁炉、各种电子天平、pH仪器等设备，以及各种试验器皿和器械用具等。
三、方法步骤
1.了解组织培养实验室守则以及有关注意事项。
2.掌握仪器设备和器皿用具的名称与用途以及实验室的构造。
3.参观组培实验室的构建情况，包括准备室（化学实验室）、缓冲室、无菌操作室（接种室）和培养室的设计要求，以及内部仪器设备的名称及其作用。
四.实验报告
1.将本次实验内容整理成实验报告
2.设计一个植物组织培养实验室的组建方案。
实验二MS培养基母液的配制与保存
一、目的要求
通过MS培养基母液的配制与保存，掌握配制与保存培养基母液的基本技能。
二、材料与用具
配制MS培养基所需的药品（见附表）。
植物生长调节物质、各类天平、烧杯、容量瓶、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、母液瓶、标签、冰箱等。
三、方法与步骤
1.母液的配制
（将MS母液配置表画在黑板上，举例讲解母液的配制过程，包括称量、溶解、定容三步，再将班级分为五个组进行配制）
2.植物生长调节物质母液的配制
①称量：
用微量0.001或0.0001的分析天平或由电子天平准确称取生长素（或细胞分裂素）50mg。
②溶解：
生长素（如IAA、IBA、NAA、2、4-D）可用少量的0.1mol/LNaOH溶解，细胞分裂素（如KT、ZT、6-BA）可用0.1mol/L的HCl加热溶解。
③定溶：
将溶解的植物生长调节物质倒入50ml容量瓶，用水冲洗小烧杯数次，最后加蒸馏水定容至50ml，配制成浓度为1mg/ml的溶液。
3.母液的保存
①装瓶：
将配好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液号、配制倍数（或浓度）以及配制日期。
②储藏：
将母液瓶储放在4℃冰箱内备用。
四、实验报告
将本次实验内容整理成实验报告（叙述母液配置过程）。
附表MS培养基母液配制（单位：
mg）
母液
成分
规定量
扩大倍数
称取量
母液体积（ml）
配1L培养基
吸取量（ml）
编号
种类
1
大
量
元
素
KNO3
NH4NO3
MgSO4.7H2O
KH2PO4
1900
1650
370
170
10
10
10
10
19000
16500
3700
1700
1000
100
2
钙
盐
CaCl2
332
10
3320
1000
100
3
微
量
元
素
MnSO4.H2O
ZnSO4.7H2O
H3BO3
KI
NaMoO4.2H2O
CuSO4.5H2O
CoCl2.6H2O
16.9
8.6
6.2
0.83
0.25
0.025
0.025
100
100
100
100
100
100
100
845
430
310
41.5
12.5
1.25
1.25
500
10
4
铁
盐
Na2-EDTA
FeSO4.7H2O
37.3
34.5
100
100
1865
1725
500
10
5
维
生
素
甘氨酸
盐酸硫胺素（VB1）
盐酸吡哆醇（VB6）
烟酸
肌醇
2.0
0.1
0.5
0.5
100
100
100
100
100
100
100
5
25
25
5000
500
10
注意：
配制前核实各种化学成分的含水量
实验三固体培养基的配制
一、目的要求
通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。
二、材料与用具
MS培养基母液、植物生长调节剂、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、容量瓶、电磁炉、酸度计、0.1mol/LNaOH（HCl）、培养瓶、记号笔等。
三、方法与步骤
1．按母液顺序和规定量，用量筒和移液管提取母液，放入1000ml的容量瓶中，MS1-100ml、MS2-100ml、MS3-10ml、MS4-10ml、MS5-10ml。
2.加入植物生长调节剂，加入的种类与数量，视培养物不同而异，有时也可不加。
3.加入蔗糖若干，溶解定容至1000ml，再放入9g琼脂。
4.调整PH值，经酸度计测试，用0.1mol/LNaOH（HCl）把培养基PH值调整至5.8-6.0。
5.在电磁炉上加热溶液，并不断搅拌，使琼脂不断熔化。
6.分装培养基，把配好的培养基分装到50-150ml的培养瓶中，分装后立即加盖封口，用记号笔注明培养基名称。
四、实验内容
配制火鹤培养基：
MS+NAA0.2mg/mL+蔗糖30g+琼脂9g，PH5.8-6.0。
五、实验报告
根据实验内容总结出固体培养基配制的具体过程。
实验四培养基和培养用具的灭菌
一、目的要求
通过对培养基和培养用具的灭菌，掌握高压灭菌和干热灭菌的一般操作技术。
二、材料与用具
培养皿、三角瓶、注有培养基的培养瓶、装有蒸馏水的玻璃瓶、牛皮纸、镊子、剪刀等金属器械、高压灭菌器、烘箱等。
三、方法与步骤
1.高压灭菌锅：
①洗涤
②包扎
③装水（需淹没电热丝）
④灭菌：
把需灭菌的物品放入高压灭菌锅内，当压力达120kpa，锅内的温度为121℃时，保持30min。
关掉开关，打开放气阀，让灭菌锅自然冷却。
⑤储藏：
待灭菌锅内的气体放尽，把物品从灭菌器中取出，培养基要放置在温度低于30℃，没有强光照射的专用柜中备用。
2.干热灭菌
①洗涤
②灭菌：
把洗涤干净的玻璃器皿放到烘箱中，在150℃温度下，干热灭菌1h或120℃温度下2h灭菌完毕，待冷却后取出。
四、实验报告
高压灭菌前后应注意哪些事项？
实验五无菌操作技术
一、目的要求
通过在超净工作台上进行无菌操作训练，初步掌握组织培养的无菌操作技术。
二、材料与用具
超净工作台、70%的酒精、95%的酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（解剖刀、剪刀、镊子等）、酒精等、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0.1%的升汞或“84”灭菌液、无菌水等。
三、方法步骤
1.用水和肥皂洗净双手，穿上灭菌过的专用实验服、帽子与鞋子，进入接种室。
2.打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射20min。
3.操作前10min使超净工作台处于工作状态，让过滤室空气吹拂工作台面和四周的台壁。
4.照射20min后，关闭紫外灯。
5.用70%的酒精擦拭工作台和双手。
6.用蘸有70%酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放入工作台。
7.用解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。
8.把培养材料放进70%的酒精中浸泡30s,再用0.1%的升汞（氯化汞，HgCl2）中浸泡10min,或在“84”灭菌液（经无菌水1：
1的稀释）中浸泡10-15min,浸泡时可进行搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触，然后用无菌水冲洗4-5次。
9.用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到，打开瓶口。
10.取下接种器械，在火焰上灭菌。
11.将灭菌后的培养材料在无菌的培养皿中切割成1×1cm大小，然后放入培养瓶，盖上瓶口。
操作期间应经常用70%酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的酒精中浸泡和在火焰上灭菌。
12.接种结束后，清理和关闭超净工作台。
四、实验报告
1.将本次实验内容整理成实验报告。
2.接种一周后，观察接种材料的污染情况，并分析污染原因。
实验六火鹤的增殖培养
一、目的要求
通过学习火鹤的组织培养的基本方法和步骤，熟练掌握组织培养的无菌操作技术。
二、材料与用具
1.材料：
火鹤试管无菌苗
2.仪器：
超净工作台、解剖刀、长把镊子、无菌培养皿、培养瓶等
3.培养基：
MS+NAA0.2mg/mL+蔗糖30g+琼脂9gPH：
5.8-6.0
三、方法步骤
1.选取生长健壮，长约5cm以上的火鹤试管苗。
2.在超净工作台上用蘸有70%的酒精擦拭双手和工作台以及装有培养基的培养瓶。
3.在酒精灯火焰下烧培养瓶瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。
4.打开长有火鹤的培养瓶瓶盖，用长把镊子取出火鹤试管苗，放入灭过菌的培养皿中。
5.用手术刀将火鹤幼苗切成1.5cm长的小段，每段带有1-2片幼叶。
6.盖好瓶盖，注明品种及接种日期，放入培养室培养。
7.定期观察植株的生长、分化情况。
四、实验报告
通过火鹤茎段培养的基本方法和步骤，制定出杜鹃的微扦插繁殖方案。
实验七杜鹃茎段的微扦插繁殖
一、目的要求
通过学习杜鹃茎段培养的基本方法和步骤，学会和掌握试管微扦插繁殖的基本技术。
二、材料与用具
杜鹃试管无菌苗、超净工作台、解剖刀、长把镊子、无菌培养皿、培养瓶等
培养基：
DJ+NAA0.05mg/mL+ZT0.5mg/Ml+蔗糖30g+琼脂9gPH：
5.0
三、方法步骤
1.选取生长健壮，长约5cm以上的杜鹃试管苗。
2.在超净工作台上用蘸有70%的酒精擦拭双手和工作台以及装有培养基的培养瓶。
3.在酒精灯火焰下烧培养瓶瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。
4.打开长有杜鹃的培养瓶瓶盖，用长把镊子取出杜鹃试管苗，放入灭过菌的培养皿中。
5.用手术刀将杜鹃幼苗切成1.5cm长的小段，每段带有1-2片幼叶。
6.将切好的茎段插入培养基中，保持茎段高度一致。
7.盖好瓶盖，注明品种及接种日期，放入培养室培养。
8.定期观察植株的生长、分化情况。
四、实验报告
将本次实验内容整理成实验报告，并观察记录杜鹃的生长分化情况。
实验八蝴蝶兰原球茎的增殖培养
一、目的要求
通过对蝴蝶兰原球茎增殖的继代培养的操作，掌握蝴蝶兰原球茎增殖的基本技术和基本方法。
二、材料与用具
1.材料：
培养瓶中蝴蝶兰原球茎。
2.仪器：
超净工作台、无菌培养皿、长把镊子、解剖刀等。
3.培养基：
⑴1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA2.0mg/L+蔗糖20g+琼脂9gPH:
5.8
⑵KC+BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖20g+琼脂9gPH:
5.8
三、方法步骤
在超净工作台中，用长把镊子将蝴蝶兰的原球茎取出，放在无菌培养皿中，用解剖刀将其切成0.5cm左右的小块，移入上述两种培养基中，每瓶放入20块左右，盖好瓶塞，注明品种名称、接种日期、接种人，最后放入培养室中培养，定期观察其生长及增值情况。
四、实验报告
叙述上述两种培养基的制作过程及原球茎继代增值的操作要点。
实验九蝴蝶兰的定植与移栽
一、目的要求
熟练掌握蝴蝶兰定植与移栽的操作步骤。
二、材料与用具
蝴蝶兰组培苗、长把镊子、解剖刀、培养基、草炭、塑料小钵等。
三、方法与步骤
1.定植：
在超净无菌的条件下，用镊子将蝴蝶兰的组培苗取出，组培苗大小不一，将打的组培苗放在培养皿中待用，小的移入配好的培养基中使其继续繁殖生长。
培养基配方为：
活性炭1g/L+蛋白胨2g/L+花宝1号2g/L+花宝2号1g/L+蔗糖15g+琼脂9gPH:
5.6
2.移栽：
在实验室内，将大的组培苗根部沾有的培养基用清水冲洗干净，往小钵中装满草炭，同时浇入适量的水，用镊子轻轻将组培苗夹起载入其中，最后放在适宜的条件下培养，定期观察其生长状况。
四、试验报告
将本次实验内容整理成实验报告。
实验十萱草花茎的离体快繁
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