分析工作常用显色剂.docx

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分析工作常用显色剂

分析工作常用显色剂

常用鉴定试剂的配制和应用

一、通用试剂1、碘试剂

检查一般有机化合物。

（1）碘蒸气预先将盛有碘结晶的小杯置于密闭的玻璃容器内，使容器空间被碘蒸气饱和，将薄层置于容器内数分钟即显棕色斑点。

有时，于容器中加放一小杯水，增加容器内的湿度，可提高显色的灵敏度。

（2）0.5％碘的氯仿溶液喷洒试剂，置空气中待过量的碘挥发后，喷1％淀粉溶液，斑点由棕色转为蓝色。

2、硫酸试剂

检查一般有机化合物。

5％硫酸乙醇溶液作为色谱显色剂用。

喷洒后，置空气中干燥15min，100℃烤至斑点呈色（不同化合物呈不同颜色）。

3、重铬酸钾—硫酸试剂检查一般有机化合物。

5g重铬酸钾溶于l00ml40％硫酸中。

喷该试剂后，150℃加热至斑点出现（不同化合物呈不同颜色）。

4、磷钼酸试剂检查还原性成分。

5％磷钼酸乙醇溶液。

喷洒后，120℃加热至呈蓝色斑点。

5、磷钨酸试剂检查还原性成分

20％磷钨酸乙醇溶液。

喷洒后，120℃烘烤，还原性物质呈蓝色斑点。

6、硝酸银—氢氧化铵试剂检查还原性成分。

溶液I：

0.1mol／L硝酸银溶液。

溶液Ⅱ：

10％氢氧化铵溶液。

临用前溶液I和Ⅱ以

1∶5混合。

喷洒后105℃加热5~l0min，至深黑色斑点出现。

7、中性高锰酸钾试剂检查易还原性成分。

0.05％高锰酸钾溶液。

喷洒后粉红色背景上显黄色斑点。

8、碱性高锰酸钾试剂检查还原性成分。

溶液I：

1％高锰酸钾溶液。

溶液Ⅱ：

5％碳酸钠溶液。

溶液I和Ⅱ等量混合使用，喷洒后，粉红背景上显黄色斑点。

9、四唑蓝试剂检查还原性成分。

溶液I：

0．5％四唑蓝甲醇溶液。

溶液Ⅱ：

25％氢氧化钠溶液。

临用前两液等量混合。

喷洒后，微热或室温放置显紫色斑点。

10、荧光素—溴试剂检查不饱和化合物。

溶液I：

0.1g荧光素溶于l00ml乙醇中。

溶液Ⅱ：

5g溴溶于l00ml四氯化碳中。

先喷洒溶液I，然后将薄层板放入盛有溶液Ⅱ的缸内，黄色斑点出现后，于紫外光灯下检视，红色底板上显黄色荧光斑点。

11．荧光显色试剂检查一般有机化合物。

（1）0.2％2，7--'氯荧光素乙醇溶液。

（2）0.01％荧光素乙醇溶液。

（3）0.1％桑色素乙醇溶液。

（4）0.05％罗丹明B乙醇溶液。

喷洒任一溶液，不同的化合物在荧光背景上可显黑色或其它荧光斑点。

二、苷类鉴定试剂1、糖鉴定试剂

（1）－萘酚－硫酸试剂检查还原糖。

①溶液I：

10％—萘酚乙醇溶液。

溶液Ⅱ：

硫酸。

取lml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I2～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液Ⅱ，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。

②15％—萘酚乙醇溶液21m1、硫酸13ml、乙醇87ml及水8ml混匀后使用。

喷洒于薄层板上，100℃烤3～6min，多数糖显蓝色，鼠李糖显橙色，所显颜色于室温可稳定2天～3天。

（2）斐林试剂检查还原糖。

‘

溶液I：

6.93g结晶硫酸铜溶于l00ml水中。

溶液Ⅱ：

34.6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于l00ml水中。

取lml样品热水提取液，加入4～5滴用时配制的溶液Ⅰ、Ⅱ等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。

如检查多糖和甙，取lml样品水提液，加入lmll0％盐酸溶液，在沸水浴上加热l0min，过滤，再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。

（3）氨性硝酸银试剂检查还原糖。

硝酸银1g，加水20ml溶解，小心滴加适量氨水，边加边搅拌，至开始产生的沉淀将近全部溶解为止，过滤。

取lml样品的水溶液，加入lml试剂，混匀后，40℃微热数分钟，管壁析出银镜或产生黑色沉淀为阳性反应。

本试剂也可作为色谱显色剂，喷洒后于110℃加热数分钟，显棕黑色斑点为阳性反应。

还原性物质如醛类、邻二酚类等有干扰。

（4）茴香醛－硫酸试剂检查糖类化合物。

硫酸lml加到含茴香醛0.5ml的乙酸溶液50ml中，需临用前配制。

喷洒于薄层板上，105℃加热至显示色斑，不同糖显不同颜色。

（5）苯胺－邻苯二甲酸试剂检查糖类化合物。

苯胺0.93g和邻苯二甲酸1.66g溶于100ml水饱和的正丁醇中。

作色谱显色剂用。

喷后105℃烤5min，显红棕色斑点。

（6）l,3－二'羟基萘酚－磷酸试剂检查酮糖、醛糖。

0.2％1，3--'二羟基萘酚乙醇溶液50ml与85％磷酸50ml混合均匀后使用。

喷后105℃烤5min～10min，酮糖呈红色，醛糖显淡蓝色。

（7）苯胺－二苯胺－磷酸试剂检查糖类化合物。

苯胺4ml、二苯胺4g及85％磷酸20ml溶于丙酮200ml中。

喷洒于薄层板上，85℃加热10min，不同糖显不同颜色。

（8）2，3，5－三苯基氯化四氮唑（T．T．C）试剂检查还原糖。

溶液Ⅰ：

4％T．T．C甲醇溶液。

溶液Ⅱ：

4％氢氧化钠溶液。

临用时将溶液Ⅰ和Ⅱ等体积混合。

喷洒后，100℃加热5～10min，显红色斑点为阳性反应（醛类无干扰）。

（9）三氯化铁－冰醋酸（K．K）试剂检查－去氧糖，常用于强心甙。

溶液I：

1％三氯化铁溶液0.5ml，加冰醋酸至l00ml。

溶液Ⅱ：

硫酸。

取样品乙醇提取液lml，置试管中，水浴上蒸去乙醇，残渣用0.5ml溶液I溶解，沿试管壁缓缓加入溶液Ⅱlml，静置分层，上层渐显蓝色，下层显红色或棕色为阳性反应（其颜色随苷元羟基和双键的位置和个数不同而不同）。

（10）占吨氢醇试剂

检查－去氧糖（常用于强心甙）。

10mg占吨氢醇溶于100ml冰醋酸中，再加入lml硫酸混合。

取lml样品，加入试剂lml，置水浴上加热30min，显红色为阳性反应。

（11）Gregg-Givold试剂检查2．6－去氧糖。

溶液I：

10％三氯化铁溶液。

溶液Ⅱ：

1％盐酸甲醇溶液（97.2ml甲醇中含2．8ml盐酸）。

0.5ml溶液I与100ml溶液Ⅱ混合。

将样品的乙醇溶液点于滤纸片上，晾干后，喷洒上述混合试剂，110℃加热5min，显蓝色为阳性反应。

（12）3，5－二氨基苯甲酸－磷酸试剂检查2－去氧糖。

3，5－二氨基苯甲酸二盐酸盐1g溶于80％磷酸25ml，加水稀释至60ml。

喷洒后，100℃加热15min，2－去氧糖在日光下显棕色，在紫外光下显黄绿色荧光。

（13）对硝基苯胺－过碘酸试剂检查去氧糖。

溶液I：

饱和偏高碘酸溶液1份加水2份混匀。

溶液Ⅱ：

1％对硝基苯胺乙醇溶液4份与盐酸1份混合。

先喷溶液I，放置10min，再喷溶液Ⅱ，去氧糖显黄色，紫外光下显强荧光，再喷5％氢氧化钠甲醇溶液，颜色转绿，乙二醇同样显色。

2、酚类鉴定试剂

（1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质。

1～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。

取1m1样品的乙醇溶液，加入试剂1～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。

作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或蓝色斑点为阳性反应。

·

（2）4－氨基安替匹林－铁氰化钾（Emeron）试剂检查酚羟基对位无取代基的化合物。

溶液I：

2％4－氨基安替匹林乙醇溶液。

溶液Ⅱ：

8％铁氰化钾溶液。

作色谱显色剂用，先喷洒溶液I，再喷洒溶液Ⅱ，用氨气熏，显橙红或深红色斑点为阳性反应。

（3）Gibb试剂

检查酚羟基对位无取代基的化合物。

溶液I：

0.5％2，6－溴（氯）苯醌氯亚胺的乙醇溶液。

溶液Ⅱ：

1％氢氧化钾乙醇溶液。

取lml样品的乙醇溶液，滴加溶液Ⅱ，使pH9～10，再加入1滴～2滴溶液I，显深蓝色为阳性反应。

（4）铁氰化钾－三氯化铁试剂

检查酚类、芳香胺类及还原性物质。

溶液I：

1％铁氰化钾溶液。

溶液Ⅱ：

2％三氯化铁溶液。

临用前等体积混合。

喷洒后酚性成分呈蓝色斑点，再喷20％盐酸，能使颜色加深。

纸色谱可用稀盐酸洗去喷洒液。

（5）重氮化（Pauly）试剂检查酚羟基对位无取代基化合物。

溶液I：

0.35g对硝基苯胺溶于5ml盐酸中，加水稀释至50ml。

溶液Ⅱ：

5g亚硝酸钠溶于70ml水中。

取1m1样品的乙醇溶液，加入1m13％碳酸钠溶液，在沸水浴中加热3min，再在冰水浴中冷却后，加入1～2滴溶液Ⅰ与Ⅱ的混合液（临用时，在冰水浴中等量混合），显红色为阳性反应。

作色谱显色剂用，将溶液I与Ⅱ各l0ml混合，再加20ml1％碳酸钠溶液（均临用时在冰水浴中混合），喷洒后，显黄、红、紫等色斑点为阳性反应。

（6）牢固蓝B盐试剂检查酚类化合物。

溶液I：

新配的0.5％牢固蓝B盐的溶液。

溶液Ⅱ：

0.5％氢氧化钠溶液。

先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，呈棕、紫、或绿色者为阳性反应。

能偶合的芳香胺类有干扰。

3．黄酮类鉴定试剂

（1）盐酸－镁粉试剂

检查黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）类化合物。

取lml样品的乙醇溶液，加入数毫克镁粉，滴加数滴盐酸，必要时水浴上微热，显红－紫色为阳性反应。

（2）Shinoda试剂

采用含2％锌粉（W／W）－硅胶薄层板，展层后喷20％盐酸溶液，黄酮（醇）类呈红紫色。

（3）三氯化铝试剂

检查具有邻二酚羟基或3－羟基、4－酮基或5－羟基、4－酮基的黄酮类化合物。

1％三氯化铝乙醇溶液或5％三氯化铝乙醇溶液。

喷洒前、后将薄层板置日光下和紫外光灯下观察，呈黄色或黄绿色荧光为阳性反应。

也可在滤纸上和试管中进行。

（4）中性醋酸铅或碱式醋酸铅试剂检查具邻二酚羟基或酚羟基的黄酮化合物。

饱和中性醋酸铅或碱式醋酸铅溶液。

取1ml样品的乙醇溶液，加1～2滴试剂，产生黄色沉淀。

（5）锆－柠檬酸试剂

检查具3－羟基或5－羟基的黄酮类化合物。

溶液I：

2％二氯氧锆甲醇溶液。

溶液Ⅱ：

2％柠檬酸甲醇溶液。

取1mg样品，用甲醇溶解，加入溶液Ilml，呈鲜黄色示有3－羟基或5－羟基；再加入溶液Ⅱ1m1，黄色不褪，示有3－羟基；黄色褪去，加水稀释后变为无色，示无3－羟基，但有5－羟基。

也可在滤纸上进行，得到的锆盐络合物多呈黄绿色，并具荧光。

（6）氨性氯化锶试剂

检查具有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物。

溶液I：

1％氯化锶甲醇溶液。

溶液Ⅱ：

氨蒸气饱和的甲醇溶液。

取1mg样品的甲醇溶液，加入3滴溶液I，再加3滴溶液Ⅱ，产生绿－棕－黑色沉淀为阳性反应。

（7）醋酸镁试剂

检查黄酮类、二氢黄酮类化合物，及羟基蒽醌类衍生物。

1％醋酸镁甲醇溶液。

在滤纸或薄层板上，点1滴样品醇溶液，挥去醇后，点l滴试剂于样品斑点边缘，加热干燥，于紫外灯下观察，黄酮类显黄色荧光，二氢黄酮类呈天蓝色荧光。

显橙红色为大黄素型蒽醌，显紫色为茜草型蒽醌。

（8）硼氢化钾试剂检查二氢黄酮类化合物。

2％四氢硼钾的甲醇溶液。

取样品1～2mg溶于甲醇中，加等量试剂lml后，加数滴盐酸，呈红-紫红色为阳性反应。

薄层色谱上喷试剂，5min后放人盐酸蒸气槽内呈色。

4．醌类化合物鉴定试剂

（1）Borntrager试剂检查羟基蒽醌衍生物。

2％氢氧化钠或2％碳酸钠溶液（或甲醇溶液）。

取lml样品的乙醇溶液，加lml试剂，呈红色为阳性反应。

在薄层色谱上喷洒试剂，显橙黄或红色斑点。

黄酮类化合物遇碱也能反应生成黄、橙、红色等。

（2）菲格尔（Feigl）试剂检查醌类衍生物。

溶液I：

25％碳酸钠溶液。

溶液Ⅱ：

4％甲醛的苯溶液。

溶液Ⅲ：

5％邻二硝基苯的苯溶液，取1滴样品的苯溶液，加入上述3种试液各1滴，混匀，置水浴上加热l～4min，呈显著的紫色为阳性反应。

（3）硼氢化钠－二甲基甲酰胺试剂检查蒽醌及其衍生物。

20g硼氢化钠溶于100ml二甲基甲酰胺中。

作色谱显色剂用。

喷洒试剂后，于紫外光灯下观察，显强的黄、绿或蓝色荧光为阳性反应。

（4）硼酸试剂

检查羟基蒽醌类化合物。

1％硼酸溶液。

作色谱显色剂用，喷洒后，置紫外光灯下观察，呈黄、橙、红色荧光为阳性反应。

（5）对亚硝基二甲基苯胺试剂检查蒽酮类衍生物。

0.1％对亚硝基二甲基苯胺的吡啶溶液。

取1m1样品的乙醇溶液，置水浴上蒸干，残渣用吡啶溶解，再滴试剂数滴，显紫色或绿色为阳性反应。

（6）活性次甲基试剂检查苯醌及萘醌类衍生物。

lg活性次甲基试剂（例如丙二酸酯、乙酰乙酸酯等）溶于30ml氨与乙醇的等体积混合溶液中。

取5ml样品的乙醇溶液，加入3ml试剂，显蓝、紫或红色为阳性反应，萘醌分子中具羟基，可使反应减慢或不起反应。

5．内酯、香豆素类鉴定试剂

（1）开环－闭环试剂检查内酯环。

溶液I：

1％氢氧化钠溶液。

溶液Ⅱ：

2％盐酸溶液。

取lml样品的乙醇溶液，加2ml溶液I，置沸水浴上加热3～4min，溶液比未加热时澄清。

再加溶液Ⅱ酸化（pH2），放置，溶液又变为混浊。

酚性化合物和有机酸有干扰，但可用下法予以区别，取样品乙醇溶液数毫升，置水浴上蒸干溶剂，用乙酸乙酯溶解后置分液漏斗内，用5％氢氧化钠溶液萃取酚性及有机酸成分，乙酸乙酯溶液用水洗至中性后按上法检测。

（2）异羟肟酸铁试剂检查内酯环。

溶液I：

7％盐酸羟胺甲醇溶液（新鲜配制）。

溶液Ⅱ：

10％氢氧化钾甲醇溶液。

溶液Ⅲ：

1％三氯化铁甲醇溶液。

取1m1样品的甲醇溶液，加入溶液I、Ⅱ各5滴，置沸水浴上加热3min～4min，冷却后，用稀盐酸调至pH3～4，再加入溶液Ⅲ1滴～2滴，显橙红或紫红色为阳性反应。

作色谱显色用，将溶液I，Ⅱ等量混合，喷洒后空气中干燥10min，再喷溶于1％盐酸中的三氯化铁溶液，显橙红或紫红色斑点。

（3）稀氢氧化钠溶液将检样点于滤纸片或薄层上，试样边缘点上碱液，晾干，置紫外灯光下观察，多数羟基香豆素有强的荧光。

配合酚类鉴定试剂的检查，以确定游离酚羟基的存在及取代位置。

6，强心甙鉴定试剂

（1）碱性3，5－二硝基苯甲酸（Kedde）试剂检查强心甙的、－不饱和内酯环。

2％3，5－二硝基苯甲酸甲醇溶液与5％氢氧化钾溶液，用前按1∶l混合。

取1m1样品的甲醇溶液，加入3～4滴试剂，显紫红色为阳性反应，几分钟后褪色。

也适用于薄层色谱。

（2）碱性苦味酸（Baljet）试剂检查强心甙的、－不饱和内酯环。

9ml1％苦味酸乙醇溶液与1mll0％氢氧化钠溶液用前配制混合。

用1m1样品的乙醇溶液，加入1滴试剂，放置15min左右，显橙红色或红色为阳性反应。

（3）碱性亚硝酰铁氰化钠（Legal）试剂

检查不饱和内酯、甲基酮或活性亚甲基（常用于强心甙）。

溶液I：

0.5％亚硝酰铁氰化钠乙醇溶液。

溶液Ⅱ：

10％氢氧化钠溶液。

取1m1样品的甲醇溶液，置水浴上蒸干，冷却后加lml吡啶溶解残渣，加入4～5滴溶

液I和1～2滴溶液Ⅱ，溶液显红色并逐渐消失为阳性反应。

用于薄层色谱检查，将1g亚硝酰铁氰化钠溶于10％氢氧化钠－乙醇（1∶1）的溶液中，喷洒后，显红色或紫色斑点。

（4）磷酸－溴试剂检查强心甙。

溶液I：

10％磷酸乙醇溶液。

溶液Ⅱ：

溴化钾饱和溶液－溴酸钾饱和溶液－25％盐酸溶液（1：

l：

1）。

用于薄层色谱检查，取溶液I喷洒后，125℃加热12min，紫外光灯下观察。

再将薄层板烤热，趁热喷溶液Ⅱ，不同的强心苷显示不同的颜色斑点。

（5）醋苷－硫酸（Liebermann-Burchard）试剂检查甾体、甾体皂苷、三萜类及强心苷。

取0.1～0.2mg样品，置于白瓷反应板上，加入0.3ml醋酐，使样品溶解，沿边缘滴入硫酸，出现红－紫－蓝－绿色，最后褪色为甾体皂甙，三萜皂甙只能呈黄－红－紫等。

（6）三氯醋酸—氯胺T试剂

检查洋地黄毒甙元衍生物和2，6－去氧糖苷。

25％三氯醋酸乙醇（氯仿）溶液4ml与3％氯胺T溶液1ml混匀。

喷洒后，100℃加热数分钟，于紫外光灯下观察。

洋地黄毒甙元的苷类显黄色荧光，羟基洋地黄毒苷元的甙类显亮蓝色荧光，异羟基洋地黄毒苷元的苷类呈灰蓝色荧光。

洋地黄毒糖的苷（2，6－去氧糖苷）在可见光下呈暗蓝色。

强心苷的鉴定应由苷元（甾体母核和不饱和五元内酯）和2－去氧糖两部分共同证实。

7、甾体、三萜及其苷的鉴定试剂

（1）三氯化锑试剂检查甾体、萜类、皂苷。

25g三氯化锑溶于75ml氯仿中。

喷后100℃加热5min，不同的皂苷元在可见光或紫外光灯下显不同颜色。

（2）三氯醋酸试剂检查皂甙。