中药制剂分析实验指导.docx

1、中药制剂分析实验指导实验一 中药制剂的理化定性鉴别一、目的要求熟悉中成药分析的理化定性方法。二、实验内容1、复方丹参片（1）鉴别方法分光光度法：取本品1片，研细，分次加水少量，搅拌，滤过，滤液移置100ml量瓶中，并加水至刻度，取溶液2ml，加水至25ml。在2832nm的波长处有最大吸收。取本品1片，研细，进行微量升华，所得白色升华物，加新制的1香草醛的硫酸溶液1滴，液滴边缘渐湿玫瑰红色。（3）思考题试述法的化学定性原理。2、银黄口服液（1）本品为金银花提取物、黄芩提取物经加工制成的口服液。（2）鉴别方法取本品1ml，加5硝酸钠溶液与10硝酸铝溶液各0.3ml，生成黄色沉淀，再加5氢氧化钠溶

2、液使成碱性，沉淀即溶解，溶液显棕红色。取本品0.1ml，加水10ml，摇匀，取溶液2ml，加5二氯氧化锆溶液12滴，溶液显黄色，再加盐酸12滴，黄色不褪。（3）思考题试述法的化学定性原理。实验二 矿物药石膏与玄明粉中重金属的检查一、目的要求1.掌握重金属检查的方法与原理。2.熟悉目视比色法的操作与判断。二、基本原理 目视比色法是以肉眼直接观察比较样品溶液与标准品溶液的颜色深浅，判断样品所含杂质是否超出规定限度。重金属在实验条件下都能与硫代乙酰胺或硫化钠反应显色，生成黑色硫化物沉淀，标准溶液常以Pb2+为代表，其原理为：在酸性溶液中CH3CSNH2 + H2OCH3CONH2 + H2SPb2+

3、 + H2SpbS(黑色)在碱性溶液中Pb2+ + Na2SpbS(黑色)+ 2Na+三、仪器与试药1.电炉、25mL纳氏比色管及比色管架。2.万分之一分析天平。3.量瓶、刻度吸管、烧杯、锥形瓶、量筒等。4.其他试剂均为AR级。5.石膏、玄明粉(市售品)。四、操作步骤1.石膏重金属检查 取样品16g，加冰醋酸4mL与水96mL,煮沸10分钟，放冷，滤过，用水洗涤并定容至100mL。取25 mL纳氏比色管2支，甲管中加标准铅溶液2 mL与醋酸盐缓冲液(pH=3.5) 2 mL后加水使成25 mL。乙管加样品滤液25 mL，在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液2 mL，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自

4、上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。2.玄明粉重金属检查 取25 mL纳氏比色管2支，甲管中加标准铅溶液2 mL与醋酸盐缓冲液(pH=3.5) 2 mL后，加水使成25 mL，乙管取玄明粉1.0g，加醋酸盐缓冲液2 mL与适量水溶液成25 mL。在甲乙两管中分别加入硫代乙酰胺试液各2 mL，摇匀，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。附：1.标准铅溶液的配制 精密称取在105干燥至恒重的硝酸铅0.1598g置1000 mL量瓶中，加硝酸5 mL，水50 mL溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。临用前，精密量取储备液10 mL，置100 mL量瓶中，

5、加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL相当于10g的Pb)。2.硫代乙酰胺试液的配制 去硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100 mL，置冰箱中保存，临用前取混合液(由1mol/L氢氧化钠溶液15 mL，水5.0 mL及甘油20 mL组成) 5.0 mL，加上述硫代乙酰胺溶液1.0 mL，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。3.醋酸盐缓冲液的配制(pH 3.5) 取醋酸铵25g，加水25 mL溶解后，加7mol/L盐酸溶液38 mL，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5(电位法指示)，用水稀释至100 mL，即得。五、思考题1.石膏及玄明粉的重金属限量分别是多少？2.在

6、酸性溶液中重金属能否用Na2S做显色剂？为什么？实验三 冰片中砷盐限量检查一、 目的要求1、熟悉砷盐检查法的基本操作。2、了解砷盐检查的原理和方法（古蔡法）。二、 基本原理本法为中国药典规定砷盐检查第一法。锌和酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢，再与溴化汞试纸作用生成黄色至棕色砷斑。与同条件下一定量标准砷溶液所产生的砷斑比较，以判定供试品的砷盐限量。AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O产生的砷化氢与溴化汞试纸作用。AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黄色)AsH3+3HgBr23HBr +As(HgBr)3 (棕色)因为A

7、sO43-在酸性溶液中被Zn还原的速度很慢，为提高反应速度，常在反应液中加入KI及酸性SnC12将AsO43还原为AsO33，KI被氧化生成I2，以SnC12来还原，使反应液中维持有KI的还原剂存在。AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2O I2+Sn2+2I-+ Sn4+溶液中的碘离子，与反应中产生的锌离子能形成配合物，使生成砷化氢的反应不断进行。4I-+Zn2+ZnI42-供试品和锌粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生H2S气体，干扰实验，故需采用醋酸铅棉花吸收除去H2S。H2S+Pb(CH3COO)2 PbS+

8、2CH3COOH三、 仪器与试药1、古蔡法测砷装置2、标准砷试液（1gAs/ml）；碘化钾试液；酸性氯化亚锡试液；醋酸铅棉花；锌粒；溴化汞试纸。3、冰片（市售品）。四、 操作步骤测试前，先于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为6080mm）；再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面为宜），盖上旋塞E并旋紧，即得。1. 标准砷斑的制备 精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水2ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置2540水浴中反应45分钟，取出溴化

9、汞试纸，即得。2. 供试品的检查 取冰片1g，加氢氧化钙0.5g与水2ml，混匀，置水浴上加热使冰片挥发后，放冷，加盐酸中和，再加盐酸5ml与水适量使成28ml，照标准砷斑的制备，自“再加碘化钾试液5ml”起，依法操作。将生成的砷斑与标准砷斑比较，不得更深。五、 注意事项1、标准砷斑的制备应与样品检查法平行操作。2、制备标准砷斑应与供试品检查同时进行。因砷斑不稳定，反应中应保持干燥及避光，并立即比较。3、浸入乙醇制溴化汞试液的滤纸的质量，对生成砷斑的色泽有影响，因此必须选用质量较好，组织疏松的中速定量滤纸，溴化汞试纸一般宜新鲜制备。六、思考题1、砷盐检查第一法和第二法的异同何在？各自的关键环节

10、是什么？2、根据以上测定结果，冰片中砷盐限量是多少？实验四 甲苯法测定中药制剂中水分含量一、目的要求掌握甲苯法测定中药制剂中水分的原理和操作方法。二、基本原理中药制剂水分测定的常用方法有烘干法和甲苯法，烘干法适用于不含或少含挥发性成分的药品，甲苯法用于含挥发性成分的药品。香砂养胃丸是由木香、砂仁、白术、陈皮、香附、广藿香、茯苓、半夏等十二味中药制成的水丸，其中有多味中药中含挥发性成分，应选用甲苯法测定该制剂中水分的含量。三、仪器与试药1、甲苯法水分测定装备（包括500ml短颈圆底烧瓶、水分测定管、直形冷凝管、外管长40cm）。2、电热套、分析天平。 3、甲苯、亚甲蓝（AR）。4、铜丝。 5、香

11、砂养胃丸（市售品）。四、操作步骤将香砂养胃丸研碎，取约25g（约相当于含水量14ml），精密称定，置A瓶中，加甲苯约200ml，必要时加入玻璃珠数粒，将仪器各部分连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其他适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适宜的方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至定温，拆卸装置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少量，使水染成蓝色，以便分离观察）。

12、检读水量，并计算供试品中的含水量（）。五、注意事项1、用化学纯甲苯直接测定，必要时甲苯可先加水少量，充分振摇后，将水层分离弃去，经蒸馏后使用。2、样品应先粉碎成直径不超过3mm的颗粒。六、思考题1、实验中所用仪器、器皿是否要烘干？为什么？2、为什么说本法适用于含挥发性成分的中药制剂中水分的测定？实验五 可见分光光度法测定大山楂丸中总黄酮的含量一、目的要求1、掌握用分光光度法测定中药制剂中总黄酮含量。2、掌握可见分光光度计的使用方法。二、基本原理大山楂丸由山楂、神曲和麦芽组成，主要功能为开胃消食，其中山楂主要成分为有机酸、黄酮类及多种维生素。黄酮类化合物具有邻二酚羟基，或3，5位羟基结构，可与铝

13、盐、铅盐、镁盐等金属盐类试剂反应，生成有色配合物，可用可见分光光度法测定其含量。本实验利用黄酮类化合物在亚硝酸钠的碱性溶液中，与Al3+产生高灵敏度的橙红色配合物（max=510nm），从而用可见分光光度法（比色法）测定大山楂丸中总黄酮的含量。三、仪器与试药1、可见分光光度计、分析天平、索氏提取器。2、乙醇（A.R）、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、1mol/l氢氧化钠溶液。3、槲皮素（中国药品生物制品检定所）。4、大山楂丸（市售品）。四、操作步骤1、标准液的配制：精密称取槲皮素对照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀释至刻度，即得0.2mg/m

14、l的对照品溶液。2、标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇溶液使成5ml，精密加入5%亚硝酸钠溶液0.3ml，摇匀，放置6分钟，加入10%硝酸铝溶液0.3ml，摇匀，再放置6分钟，加入1%氢氧化钠溶液4ml，分别用50%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。以第一瓶作空白，用可见分光光度计在510nm处测其吸收度，作A-C标准曲线（或计算其回归方程）。3、样品液的制备：精密称取120干燥2小时的大山楂丸6.5g，置索氏提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小时，将提取液移至250ml容量瓶中，补加蒸馏

15、水至刻度，摇匀即得。4、含量测定：精密量取提取液1ml，按上述标准曲线制备方法进行测定，并由标准曲线或回归方程计算样品中总黄酮的含量。五、注意事项1、实验证明，提取时间为1.5小时，基本能提尽样品中黄酮。2、实验证明，样品显色后，在30分钟内测定总黄酮含量，无明显改变，超过30分钟，含量有所改变。六、思考题1、比色法操作的注意事项是什么？2、总黄酮与单体黄酮的测定方法有何不同？实验六 柱色谱-紫外分光光度法测定万氏牛黄清心丸中总生物碱的含量一、目的要求1.掌握用连续回流提取法定量提取中药制剂中生物碱的原理和操作方法。2.掌握柱色谱法净化样品和用吸收系数法测定盐酸小檗碱的基本原理和操作方法。二、

16、基本原理用连续回流提取法，将生物碱以盐的形式提取后，用氧化铝做净化剂进行液-固萃取净化处理，使提取液中具有紫外吸收的黄酮类及其他极性大的干扰组分保留于柱上，小檗碱、药根碱等小檗碱型生物碱被洗脱，以消除干扰。盐酸小檗碱在345nm1nm处有最大吸收，在此波长处测定洗脱液的吸收度，以吸收系数法按盐酸小檗碱计算总生物碱含量。三、仪器与试药1.分析天平、恒温水浴锅、分光光度计。2.量瓶、三角瓶、烧杯、刻度吸管、量筒、索氏提取器、色谱柱。3.色谱用中性氧化铝，其他试剂均为AR级。4.万氏牛黄清心丸(市售品)。四、操作步骤1.提取 去剪碎的万氏牛黄清心丸约4g，精密称定，置索氏提取器中，加盐酸-甲醇(11

17、00)适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50mL量瓶中，用盐酸-甲醇(1100)稀释至刻度，摇匀。2.净化 精密量取上述提取液5mL，置氧化铝柱(内径约0.9cm，中性氧化铝5g，湿法装柱，用30mL乙醇预洗)上，用25mL乙醇洗脱，收集洗脱液，置50mL量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。3.测定法 精密量取上述净化液2mL，置50mL量瓶中，加0.05mol/L硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。以2mL乙醇及0.05mol/L H2SO4液稀释至50mL的混合液为空白，用1cm比色池，在345nm波长处测定吸收度。按盐酸小檗碱(C20H17NO4HCL)的吸收系数()为728计算即得。本品按干

18、燥品计算，含总生物碱以盐酸小檗碱计，不得少于1.7%。五、思考题1.本实验操作中应注意哪些问题？2.欲证明此方法的可靠性，须做什么试验？如何设计？实验七 薄层扫描法测定香莲片中盐酸小檗碱含量一、目的要求1、掌握TLCS测定中药制剂含量的方法2、掌握薄层定量的点样和展开技术3、熟悉薄层扫描仪的使用二、基本原理薄层扫描法是利用某种波长的单色光对薄层上的斑点进行扫描，通过测定该斑点对光的吸收度而确定其含量。本实验采用荧光扫描，测定香莲片中盐酸小檗碱含量。三、仪器与试药1、薄层扫描仪、分析天平、索氏提取器、定量毛细管2、薄层涂铺器、薄层展开缸3、薄层层析用硅胶，其他试剂均为分析纯4、盐酸小檗碱对照品（

19、中国生物制品检定所）5、香连片（市售品）四、操作步骤1、供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱60mg），置索氏提取器中，加盐酸-甲醇（1：100）混合液适量，加热回流提取至提取液无色，将提取液移至100ml量瓶中，用少量盐酸-甲醇（1：100）的混合液洗涤容器，洗液并入提取液中，加混合液至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2、对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱适量，加甲醇制成每1ml含0.02mg的溶液，作为对照品溶液。3、测定法 精密吸取供试品溶液2l，对照品溶液2l与6l，交叉点于同一硅胶G薄

20、层板上，以苯-醋酸乙酯-异丙醇-甲醇-水（12：6：3：3：0.6）为展开剂，在另槽中加入等体积的浓氨试液，预平衡15分钟后，展开，展距约10cm，取出，晾干，进行荧光扫描测定，激发波长=366nm，测定供试品与对照品荧光强度积分值，计算，即得。中国药典2005版规定，本品每片含黄连以盐酸小檗碱计，小片不得小于7.0mg，大片不得少于20mg。五、思考题1、影响薄层扫描测定含量的因素有哪些？点样误差是不是主要因素？2、薄层扫描法中常用的点样器有哪些？实验八 高效液相色谱法测定双黄连口服液中黄芩苷的含量一、 目的要求1 练习使用高效液相色谱仪2 学会用外标法定量分析二、实验原理外标法可分为外标一

21、点法、外标二点法及标准曲线法。当标准曲线截距为零时，可用外标一点法进行定量。利用高效液相色谱法进行分离双黄连口服液中的黄芩苷，在max274nm处进行检测。在药物分析中，为了减小实验条件波动对分析结果的影响，采用随行外标一点法定量，即每次测定都同时进对照品与供试品溶液。三、仪器与试药1仪器 高效液相色谱仪、超声波提取器、分析天平、微量注射器、ODS-C18反相色谱柱、容量瓶（25ml，50ml）2试药 黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所）、双黄连口服液（三精制药）、甲醇（色谱纯）、冰醋酸（AR）、双蒸水。四、实验内容与步骤1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇水冰醋酸（50：50：1

22、）为流动相；检测波长为274nm。理论塔板数按黄芩苷峰计应不低于1500。2对照品溶液的制备精密称取在60减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，0. 45m滤膜滤过，即得（浓度为0.1216mg/ml）。3供试品溶液的制备精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，0. 45m滤膜滤过，即得。4样品测定分别精密吸取对照品溶液10l与供试品溶液5l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每1ml含黄芩以黄芩苷计不得少于8mg。五、思考题1、HPLC中常用的定量方法有几种？外标一点法有何优缺点

23、？2、紫外检测器的优缺点是什么？实验九 气相色谱法测定维生素E的含量一、实验目的熟悉气相色谱法的操作方法掌握气相色谱法测定维生素E的色谱条件的选择掌握基于校正因子的内标一点法的含量测定二、溶液的制备（预试情况） 内标物溶液的配制：精密称取内标物正三十二烷48mg，置50ml容量瓶中，加正己烷溶解并稀释至刻度，得到浓度为49.6mg/ml的内标物溶液。对照品溶液的制备：精密称取维生素E对照品20.76mg,精密加入内标物溶液10ml，溶解，得到浓度为2.076mg/ml的对照品溶液。供试品溶液的制备：精密称取样品30.4mg，精密加入内标物溶液10ml，溶解，即得。三、色谱条件流动相：氮气载气流

24、速： 30ml/min ，空气流速：300ml/min，氢气流速：30ml/min检测器：氢焰离子化检测器进样量：2微升进样口温度：300度柱温：265度检测器温度：300度四、数据处理及结果（） 校正因子的测定：精密吸取对照品2l，注入气相色谱仪，计算相对校正因子（new calibration建立新的校正曲线，需要输入内标和维生素E的浓度或量，仪器自动给出绝对校正因子，RF显示项下全为NO，ISTD项下内标物选择YES，对照品选择NO，然后点击OK，即可） 样品的测定：精密吸取样品2l，注入气相色谱仪，计算样品含量。含量测定方法选择ISTD法，只需要打开样品图谱，即可得到含量。实验十 气相

25、色谱法测定藿香正气水中乙醇含量一、目的要求1.掌握用气相色谱法测定中药制剂中乙醇含量的方法。2.熟悉气相色谱定量分析操作方法。二、基本原理藿香正气水为酊剂，由苍术、陈皮、广藿香等十味药组成，制备过程中所用溶剂为乙醇。由于制剂中含乙醇量的高低对于制剂中有效成分的含量、所含杂质的类型和数量以及制剂的稳定性等都有影响，所以中国药典规定对该类制剂需做乙醇量检查。乙醇具有挥发性，中国药典采用气相色谱法测定各种制剂在20时乙醇(C2H5OH)的含量(%,mL/mL)。因中药制剂中所有组分并非能全部出峰，故采用内标法定量。色谱条件为：填充柱或毛细管柱，以直径为0.250.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分

26、子多孔小球作为载体，柱温为120150，氮为流动相，检测器为氢火焰离子化检测器。三、仪器与试药1.气相色谱仪、微量注射器。2.无水乙醇、正丙醇(AR)。3.藿香正气水(市售品)。四、操作步骤1.标准溶液的制备 精密量取恒温至20的无水乙醇和正丙醇各5mL，加水稀释成100mL，混匀，即得。2.供试品溶液的制备 精密量取恒温至20的藿香正气水10mL和正丙醇5mL，加水稀释成100mL，混匀，即得。3.测定法(1) 校正因子的测定：取标准溶液2L，连续注样3次，记录对照品无水乙醇和内标物质正丙醇的峰面积，按下式计算校正因子： AS为内标物质正丙醇的峰面积；AR为对照品无水乙醇的峰面积；CS为内标

27、物质正丙醇的浓度；CR为对照品无水乙醇的浓度。取3次计算的平均值作为结果。(2) 供试品溶液的测定：取供试品溶液2L，连续注样3次，记录供试品中待测组分乙醇和内标物质正丙醇的峰面积，按下式计算含量：AX为供试品溶液峰面积；CX为供试品的浓度。取3次计算的平均值作为结果。藿香正气水乙醇含量应为40%50%。五、注意事项1.在不含内标物质的供试品溶液的色谱图中，与内标物质峰相应的位置处不得出现杂质峰。2.标准溶液和供试品溶液各连续3次注样所得各次校正因子和乙醇含量与其相应的平均值的相对偏差，均不得大于1.5%，否则应重新测定。六、思考题1.内标物应符合哪些条件？2.实验过程中可能引入误差的机会有哪

28、些？实验十一 液质联用测定葛根药材中的葛根素一、实验目的1、 熟悉液质联用技术的操作及注意事项2、 掌握用质谱对中药成分定性分析的方法二、实验原理样品经HPLC系统进样后，被有效分离，然后进入连接口，此时液相中的离子或分子被转变为气相中的离子，被富集于质量分析器中，根据质荷比的不同而被分离，最后离子被转化为电信号，电子倍增管检测，信号被放大后传至计算机进行数据处理。三、实验内容1、色谱条件：甲醇-水（70：30）为流动相，流速为0.2ml/min，色谱柱：2.1*250mm2、 测定方法：用流动相溶液葛根素制成40g/ml的浓度，由液相色谱自动进样器进样，检测器为二极管阵列检测器，利用保留时间

29、确定色谱图中葛根素的色谱峰，通到质谱的质量分析器中可得到葛根素的一级质谱图，二级质谱图四、实验结果由葛根素的一级质谱图可判断其分子离子峰，得到其分子量，再由二级图谱，得到碎片离子质荷比，从而测定其结构信息。五、实验讨论1、液质联用仪器使用注意事项是什么2、液质联用的用途是什么？实验十二 质量分析方案设计及实验开展要求：选择下面任何一个复方进行质量分析方案设计，经过可行性分析后，开展实验。1、清热胶囊 黄芩120g、金银花90g、桅子60g、连翘90g、麦冬60g2、解表胶囊 黄芩120g、连翘90g、麦冬60g、金银花90g、白芷60g3、通脉胶囊 葛根120g、大黄90g、红花60g、川芎60g、白芷60g4、清眩胶囊 葛根120g、大黄90g、麦冬60g、桅子60g、白芍60g设计方案：取1/5处方量提取作为样品阴性：取1/20处方量提取作为阴性对照薄层色谱鉴别：统一采用药材为对照