大蒜根尖染色体观察实验.docx

1、大蒜根尖染色体观察实验大蒜根尖染色体实验报告2、 掌实验目的与实验要求1、 掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。3、 通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分 裂过程的理解。4、 对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识 微核和植物细胞分裂期的各形态特征。5、 体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验 知识的能力和撰写实验报告水平。实验方案1、 实验仪器显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤 纸等 2、 实验药品新鲜、健康的

2、洋葱鳞茎一个； 0.02%秋水仙素、 1mol/L HCl 、醋酸洋红染液、 卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。 3、 实验原理 (1 洋葱的根尖洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处 于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。 (2 多倍体的诱导多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝 分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两 级，于是染色体数目加倍。各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。解离 可以破坏细胞的胞间层（果胶），

3、使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。 漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度(3破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。有丝分裂完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后 期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA的 复制以及有丝分裂的准备，而 M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形 态观察的方便，本实验采用后一种分法。如表一。表一植物有丝分裂各时期特点MWCt貼转-址k眦FF ma棚汗匪龙旺的第白喷，N D NA址制化各S删DHA复制.一咋醐A并予览帕1渤凹个DMA轩于遹过若逹点渥#工1凰崎蚩山帧!冷

4、H独2金蛆Miifr色业划.占H地沁扎甘舉H）州准省f 戚汝啟附KNA种ihflMi）牡色网转变虛坡色也制9斛瞅瞅洞注：肋戢呃体甘狀直仙列斤亦通檢中班：謂晞，圧眾廉训泄衙謀点行覩，除巴屮戟弁幵，ff邮裤休哼|下问無腕腐慣诰色巾E转空施茸壬色应：践腹丽违.核仁出休：$趙脸-细胞换一细yy堂4、实验步骤（1将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进 25C恒温培养箱中 23 天，催化大蒜生根。(2选择根长0.51cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为 10组。(3在大蒜生根之后，先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定 3 个小时，用 Schiff 氏试剂染色，镜检，观察染色体是否能染上色以及染

5、色效果。若染色 效果不行，则重新配制Schiff氏试剂，直至染色效果良好，然后将其贮存于 4C冰箱中准备使用。(4 将分好组的大蒜分别用清水、 50mg/L Gr6+、 100mg/L Gr6+、 150mg/LGr 6+、30 mg/L 1,2,4-三氯苯、 40 mg/L 1,2,4-三氯苯、 50 mg/L 1,2,4-三氯苯、 浓度分别为50mg/L Gr6+和30 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液、100mg/L Gr6+和40 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液、150mg/L Gr6+和50 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液培养 24小时。清水组为对照组。(5 在早上有

6、丝分裂旺盛的时候，将处理过的大蒜根尖剪下，分别放入青霉素小瓶中，加入卡诺氏固定液固定 3个小时，然后放入4C冰箱内保存，以备使用。(6 取出部分经过固定的根尖先用酒精和清水洗涤，加入 1mol/L HCL 覆盖根尖，放入 60 摄氏度水浴锅内水浴加热 710 分钟，取出用清水洗涤 3 次， 每次 5 分钟。(7 取出解离后的根尖，放在载玻片上，用刀片切下根尖乳白色的分生区部分，滴加1滴Schiff氏试剂染色10分钟，然后盖上盖玻片，吸干染液，并 用镊子钝的一端在盖玻片上轻轻敲击，将细胞打散。 (8 将制备好的根尖放在显微 镜下观察，统计微核数目、以及有丝分裂间期、前期、中期、后期、末期细胞数目

7、并计算有丝分裂指数以及微核率。每组 浓度细胞计数400个。实验结果与数据处理1、制片观察情况图1前期图2后期图3末期图4核崩解图5微核图6双核2、数据记录情况表2试验结果统计分组组别细胞总数50mg/L Cr6+50mg/L Cr6+秋水仙素100mg/L Cr6+100mg/L Cr6+秋水仙素清水389 421 402395 401 396 3902 5 2 1113 5 2 15384 398 3799 12 15 6 20前期数目中期数目后期数目末期数目微核数多核分裂数3、数据处理结果表 3 实验计算结果分组 30 号 % 50mg/L Cr6+ 50mg/L Cr6+ 秋水仙素 10

8、0mg/L Cr6+ 100mg/LCr6+秋水仙素清水0.71 .03000.24 0.180.47 .100.08001.43 .5000 0000 0000 0000.250.4000.770.1前期0.52 .22.11中期00 0 后期0.26 .11.580.末期0.520.21.580.微核1.560.10 0多核2.34 .50.260.1分裂数1.300.55.280.0图 1 分裂期及比例图a 5Omg/L c e-四、实验结论1、数据评价Ji4 -lOQr s/L 匸血-iOCmc/L *!0忙仏 *f肖出a.由上面图表可以看出50mg/L C r 6+与50mg/L C

9、 r 6+秋水仙素相比，后者分裂期的数目增多，微核数和多核数没有太大的变化。而 100mg/L的相比之F有所增加。b.同是没有加秋水仙素的50与100mg的相比较，浓度增大微核和多核数有增加。2、原因分析a.只有两个浓度，实验数据可比性不高。 b.压片不够熟练，导致计数不全面。C.观察计数时存在计数误差。五、实验心得体会1.培养洋葱根尖时，水不可放多，待根尖长出后，使根尖分生区接触到水面即可；水至少一天一换，若有浑浊，立即更换。2剪下洋葱根尖时注意时间，正午时分最合适，因为此时洋葱根尖分生区有 丝分裂最为活跃，此时固定，可以观察到最多的分裂相。 解离时间要控制好，时 间太短，效果不够；时间太长，解离过度破坏细胞。3漂洗不能少，染色时间要足够，否则染色不够深影响观察，但染色时间过 长则细胞质也会部分被染色，影响观察效果4压片对于最终效果来说十分关键，需要尽力并用上多种手段，但是切记只 可纵向压，不可横向搓。5这个实验关键在于压片，我们第一次压片不太好，力度没有足够会把细胞 重叠在一起，不能计数，如果力度过大，细胞就会给压碎，细胞核会被压出胞外， 计数不准确，所以要多加练习。