临床检验技师考试临床检验基础讲义第五章血型和输血.docx

1、临床检验技师考试临床检验基础讲义第五章血型和输血第五章血型和输血考纲 红细胞ABO血型系统 红细胞Rh血型系统 新生儿溶血病检查 自动化血型分析仪 人类白细胞抗原检查 血小板血型系统检查 血液保存液 输血与输血反应红细胞ABO血型系统（一）ABO血型系统的抗原及抗体血型：指红细胞表面抗原的差异，血小板和白细胞表面抗原也存在差异，因此，血型是抗原抗体系统的遗传特征。Karl Landsteiner1.ABO血型抗原（1）ABO抗原的遗传：第9号染色体的长臂3区4带，显性基因A、B，隐性基因O。六个基因型：O0、AA、A0、BB、B0、AB。四种表现型：A、B、O、AB。（2）ABO抗原的发生（3

2、）ABO分泌型ABH血型特异物质存在于唾液（含量最丰富）、尿、泪液、胃液、胆汁、羊水、血清、精液、汗液、乳汁等体液中，但不存在于脑脊液。这些可溶性抗原又被称为血型物质。血型物质意义测定唾液血型物质，可辅助鉴定血型。中和ABO血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体，鉴别抗体的性质。检查羊水，可预测胎儿ABO血型等。2.AB0系统抗体（1）天然抗体与免疫性抗体天然抗体：在没有可觉察的抗原刺激下而产生的抗体，以IgM为主，又称完全抗体或盐水抗体；也可能是由一种无觉察的免疫刺激产生而得。免疫性抗体：有IgM、IgG、IgA，但主要是IgG。抗A和抗B可以是IgM与IgG，甚至是IgM、IgG、

3、IgA的混合物，但主要是IgM，而O型血清中以IgG为主。（2）天然抗体和免疫抗体的主要区别见下表。特性天然抗体（IgM）免疫抗体（IgG）抗原刺激无察觉有（妊娠、输血）相对分子质量100万16万与红细胞反应最适温度42537被血型物质中和能不能溶血素效价较低较高耐热性不耐热（冷抗体）耐热（温抗体）在盐水中与相应红细胞发生肉眼可见凝集能不能对酶处理红细胞的反应变化不大能反应通过胎盘不能能与巯基乙醇或二硫苏糖醇的反应灭活不被灭活（二）AB0血型系统的亚型亚型是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异。A亚型：最多见，A亚型主要有A1和A2，占全部A型血的99.9%，其他A亚型（A

4、3、AX、AM）为少数；作AB0血型鉴定时，应加O型血清，以防对A亚型误定型。B亚型：（B3、BM、BX）比A亚型少见，临床意义不大。1.A1、A2亚型基本特征A1亚型：红细胞上具有A1和A抗原，血清中含有抗B抗体。A2亚型：红细胞上只有A抗原，血清中除含抗B抗体外，还有少量抗A1抗体。2.A1、A2亚型的鉴定方法A1和A2表型鉴别3.A1、A2亚型鉴定的意义目的是防止误定血型。尽管我国A2、A2B型在A与AB型中所占比例少于1%，但定型时易将弱A亚型误定为O型，如果给其输入0型血，不会有太大问题，但是如果把弱A亚型误定为0型，并输给O型人，则受血者的抗A抗体就可能与输入的弱A亚型的红细胞起反

5、应，引起血管内溶血性输血反应。（三）AB0血型鉴定1.原理 常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。常规的方法有：正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。红细胞的常规AB0定型正向定型 反向定型血型抗-A抗-B抗-ABA细胞B细胞O细胞-+-O+-+-+-A-+-B+-AB2.鉴定方法（1）生理盐水凝集法玻片法操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于

6、反向定型。试管法由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。玻片法凝集结果判断呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1/2肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。于镜下观察，每凝集团中有58个以上红细胞凝集可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布混合凝集外观镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布（2）凝胶微柱法是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、

7、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。3.抗A、抗B和抗AB标准血清标准血清均采自健康人，并应符合下述条件：特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1:128以上。亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。冷凝集素效价：在1:4以下。无菌。灭活补体。（四）交叉配血法最重要的AB0血型配合试验之一。必须在AB0血型相同，且交叉配血无凝集时才

8、能输血。1.目的：检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情况。2.原则：主侧加受血者血清与供血者红细胞；次侧加受血者红细胞与供血者血清，观察两者是否出现凝集。3.方法（1）盐水配血法：简便快速。主要缺点是只能检出不相配合的完全抗体，而不能检出不完全抗体。（2）抗球蛋白法配血法：又称Coombs试验。是最可靠的确定不完全抗体的方法，但操作繁琐。抗球蛋白法配血法是最早用于检查不完全抗体的方法。直接抗球蛋白法：可检查受检者红细胞是否已被不完全抗体致敏。间接抗球蛋白法：可用于鉴定Rh血型及血清中是否存在不完全抗体。本法虽较灵敏，但也有一定限度，且操作复杂，不利于急诊检查和血库的大批量工作。（3

9、）聚凝胺法配血法：可以检出IgM与IgG两种性质的抗体，能发现可引起溶血性输血反应的几乎所有规则与不规则抗体，故本法已逐渐推广使用。配血原理聚凝胶分子是带有高价阳离子多聚季铵盐，溶解后带有很多正电荷，可以中和红细胞表面负电荷，有利于红细胞凝集，低离子强度溶液也能减低红细胞Zeta电位，可进一步增加抗原抗体间的吸引力。（4）凝胶配血法：又称微管（板）凝胶抗球蛋白试验，此法在凝胶中进行，保持了传统抗球蛋白试验的准确性、同时具有简便、可靠的特点，全自动血型分析仪进行交叉配血，也是利用凝胶配血。其他可检出不完全抗体的方法有蛋白酶法、胶体介质法等。4.质量控制（1）血液标本：交叉配血的血液标本，受血者标

10、本应为新鲜血，供血者标本应为血袋两端刚剪下小管中的血液。（2）选用方法：用试管法做交叉配血。（3）溶血现象：配血管出现溶血现象，为配血不合。（五）AB0血型鉴定及交叉配血中常见错误1.分型血清方面的原因（1）自制分型血清抗体：效价太低、亲和力不强，造成定型不准确。（2）患者纤维蛋白原增高或为异常蛋白血症：如多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症等，可产生缗钱状假凝集。（3）患者输入了高分子血浆代用品或静脉注射造影剂等药物：可引起红细胞聚集，易误认为凝集。（4）血清中可能存在的不规则抗体：如A2和A2B型患者血清内有抗A1抗体，能凝集A1红细胞。有些癌症患者（如胃癌、胰腺癌等）血中含有大量可溶性A或B物质，

11、这些物质可中和抗血清的抗体，从而抑制反应，造成假性不凝集。克服的办法是红细胞先洗涤后再试验。（5）婴儿尚未产生自己的抗体或有从母亲获得的血型抗体：新生儿不宜用血清作反定型。（6）老年人血型抗体水平下降：某些免疫缺陷的人或慢性淋巴细胞白血病，遗传性无丙种球蛋白血症以及有些用了免疫抑制剂的患者，由于免疫球蛋白下降，血型抗体也下降甚至缺如。可出现反向定型错误。2.红细胞方面的原因（1）用近期内输过血的患者血液做对照红细胞：此时，患者血液中红细胞为混合型细胞。（2）患者红细胞被大量抗体包被：例如某些自身免疫疾病或新生儿溶血病患者的红细胞，或红细胞悬浮于高浓度蛋白的介质中，红细胞都会自发地发生凝集。（3

12、）红细胞膜有遗传性或获得性异常。（4）抗原变异：A或B的弱抗原易判为不凝集（假阴性），而由细菌引起的获得性类B抗原易误判为阳性。有些细菌含有乙酰基酶，能使特异性A型物质末端的N-乙酰氨基半乳糖水解成半乳糖，从而使A型获得类B抗原后易误定为AB型。由于患白血病或某些恶性肿瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原变弱。婴儿及老年人的红细胞抗原也较青壮年为弱。（5）血清中有高浓度血型物质：当用血清配制红细胞悬液时，血型物质则会中和分型血清中的抗体，而不再与红细胞抗原起反应。（6）红细胞被细菌污染：细菌的酶消化了红细胞表面的唾液酸，暴露了人人都有的T抗原，被具有抗T活性的IgM凝集。（7）嵌合体现象：混合

13、细胞群见于异卵双生子。如：有98%O型红细胞，2%B型红细胞会定为O型，但血清中只有抗A抗体。3.操作方面的原因：是最常见原因。（1）操作器材：玻璃器皿不洁或使用了严重污染的血清、红细胞，可出现假阳性。试管污染洗涤剂会造成假阴性。（2）红细胞与血清比例和离心：红细胞与血清比例不当、过度离心或离心不足可引起假阳性或假阴性。（3）溶血现象：误认为溶血现象为阴性结果。（4）试验温度：温度过高会造成假阴性。AB0血型系统的IgM抗体最适温度为422，如达37凝集力即下降。（5）信息记录差错：标本、试剂、标签、加样弄错，或出现记录错误。大批标本检查时搞错标本号，张冠李戴最易造成错误。（六）AB0血型系统

14、主要临床意义1.输血是治疗与抢救生命的重要措施。输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血。2.新生儿溶血病母婴AB0血型不合引起的新生儿溶血病（常为第1胎溶血），主要依靠血型血清学检查作出诊断。3.器官移植 受者与供者必须AB0血型相符才能移植。红细胞Rh血型系统（一）Rh系统的命名1.Rh血型起源1940年，Landsteiner和Wiener发现用恒河猴（Rhesus monkey）的红细胞免疫家兔所得抗血清能与约85%白种人红细胞发生凝集反应，认为这些人红细胞含有与恒河猴红细胞相同的抗原，即命名为Rh抗原。2.Rh系统的命名及遗传有Fisher-Rac

15、e、Wiener、Rosenfield三种命名法。Fisher-Race命名法又称CDE命名法，这种学说认为Rh遗传基因位于第1号染色体的短臂上，Rh血型有3个紧密相连的基因位点，每一位点有一对等位基因（D和d，C和c、E和e），这3个基因是以一个复合体形式遗传。3个连锁基因可有8种基因组合，即CDe、cDE、cDe、CDE、Cde、cdE、cde和CdE，两条染色体上的8种基因组合可形成36种遗传型。Rh抗原命名为C、D、E、c、d、e，虽从未发现过d抗原及抗d活性，但仍保留“d”符号，以相对于D。因此，Rh抗原只有5种，有相应5种抗血清，可查出18种Rh表现型。有D抗原者称Rh阳性，无D抗

16、原者称为Rh阴性。D阴性人中最常见的基因型为cde/cde。（二）Rh的抗原与抗体1.Rh系统抗原（1）Rh抗原：已发现40多种Rh抗原，与临床关系最密切的5种为D、E、C、c、e，这5种抗原中D的抗原性最强，对临床更为重要。（2）DU（弱D）：为一组弱D抗原。尽管DU的抗原性较D为弱，但仍是Rh阳性细胞，所以将DU血输给Rh阴性受血者时，仍有引起产生抗D的可能性，因此应将DU型供血者作Rh阳性处理，而DU型受血者归入Rh阴性则较为安全。如果把DU血输给有抗D者，也可以产生严重的溶血性输血反应。（3）-D-：-D-/-D-遗传基因型红细胞只有D抗原，而缺乏C、c、E、e抗原。此型抗原能与抗D抗

17、体在盐水中凝集。2.Rh系统抗体Rh抗体中，除偶尔可见天然的抗E、抗CW抗体外，其余各种Rh抗原的抗体多系输血或妊娠时，由外来红细胞免疫刺激后产生。这些抗体均为IgG，但在免疫应答的早期，也可有IgM成分。（三）Rh系统血型鉴定红细胞Rh表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清检测来鉴定。虽然Rh血型系统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。1.低离子强度盐水试验：可提高抗D抗体与D阳性红细胞结合率，并提高其灵敏度。2.酶介质法：木瓜酶或菠萝蛋白酶可以破坏红细胞表面的唾液酸，使红细胞膜失去电荷，缩小红细胞间的距离；同时酶还可以部分地改变红细胞表面结构，使某些隐蔽的抗原得以暴露，

18、增强凝集性；且对IgG的作用大于IgM，故有利于检出不完全抗体。（四）交叉配血法Rh血型系统的交叉配血的原则与AB0血型系统的交叉配血相同。由于此系统的抗体为不完全抗体，故应选用酶介质法、抗球蛋白法或聚凝胺法等。（五）质量控制1.严格设定试剂和抗原阳性和阴性对照系统。2.严格控制反应条件：试验介质、浓度、温度、离心、反应时间等条件。3.受检者红细胞必须洗涤干净，以免血清蛋白中和抗球蛋白，出现假阴性。（六）Rh血型系统临床意义抗Rh抗体主要通过输血或妊娠免疫而产生，较大量的Rh阳性（D抗原阳性）细胞进入Rh阴性者体内后，25个月内血浆中可测到抗体，如经再次免疫，3周内抗体浓度可达高峰。受血者或孕

19、妇血浆中含有Rh抗体时，当再与含相应抗原血液相遇，将引起严重输血反应或新生儿溶血病（常为第2胎溶血）。因此，Rh抗体具有十分重要的临床意义。人类白细胞抗原检查（一）HLA抗原和抗体人类白细胞上有3类抗原：红细胞血型抗原、白细胞特有抗原、与其他组织共有但也是最强的人类白细胞抗原（HLA）。1.HLA：是糖蛋白抗原，又称组织相容性抗原、移植抗原和组织抗原。HLA有一系列紧密连锁的基因编码，这些基因称为组织相容性复合物（MHC），也称为HLA基因，定位在第6号染色体短臂上，共有6个座位，至少含4个与移植有关的基因区：即HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-D。HLA-D又分为HLA-DR、HL

20、A-DQ、HLA-DP亚区。HLA-A、HLA-B、HLA-C基因编码的抗原称类抗原。HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP基因编码的抗原称类抗原。2.HLA抗体：大部分是IgG、少数是IgM。（二）HLA分型方法1.淋巴细胞毒试验 为HLA抗原分型常用方法。2.混合淋巴细胞培养试验本方法多用于组织相容性方面的研究，临床上主要用于器官移植。3.分子生物学技术一类是PCR为基础的基因分型。另一类是以测序为基础的基因分型。（三）HLA检测临床意义1.器官移植HLA配型的作用为：在肾移植中，供受双方共有的DR抗原越多，或已检出的DR错配抗原数越少，移植存活率就越高。在移植前输血的患者中，DR配型能

21、提高存活率。骨髓移植前不宜输血，以防受体被免疫。心、肝、肺等器官的移植，多用于生命垂危的患者，主要要求ABO血型相同。2.输血成分输血疗法时，如HLA同型血液，则能提高疗效。临床输血的发热反应中，有些是由HLA抗体引起，尤其是多次输血的患者，HLA抗体可以破坏白细胞，为避免HLA引起输血反应，可在输血前做交叉淋巴细胞毒试验。70%的非溶血性输血反应是发热反应，一般认为是白细胞被HLA抗体破坏后释放致热原物质所致。可先将白细胞过滤后再输血。3.亲子鉴定由于HLA系统的高度多态性，使HLA成为亲子鉴定中的一个有力工具，具有重要法医学意义。4.疾病诊断发现许多疾病与HLA有关，例如强直性脊椎炎患者9

22、1%带有B27抗原，而正常人带B27抗原者只占6.6%。但目前大多数疾病的HLA分型意义有限。血液保存液（一）血液保存液的主要成分与作用1.血液保存液常用种类 配方可分为：ACD（A，枸橼酸；C，枸橼酸三钠；D，葡萄糖）与CPD（C，枸橼酸三钠；P，磷酸盐；D，葡萄糖及枸橼酸）两大类保存液。在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。2.血液保存液主要成分（1）枸橼酸盐：是所有抗凝保存液中的基本抗凝物质。最常用的是枸橼酸三钠，除抗凝作用外，它还能阻止溶血的发生。（2）枸橼酸：避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。（3）葡萄糖：是红细胞代谢所必需的营养成分，可延长红细胞保存时间，且防止溶血；并减慢细胞中有机

23、磷的消失，防止红细胞储存损伤。（4）腺嘌呤：可促进红细胞ATP合成，延长红细胞的保存期（达35d），并增强红细胞放氧功能。（5）磷酸盐：提高保存液pH，延长红细胞的保存期。ACD液pH较低，对保存红细胞不利，只能保存21d，且放氧能力迅速下降。CPD保存液中加入腺嘌呤与磷酸，从而延长红细胞的生存期。（二）贮存温度和时间血液制品的保存温度和时间血液制品贮存温度（）贮存时间全血2621d（ACD）红细胞制剂2635d（CDPA-1）洗涤红细胞2624d浓缩血小板20247d浓缩粒细胞202424h新鲜冰冻血浆、冰冻血浆、冷沉淀物-301年低温冷冻红细胞-6510年输血与输血反应（一）输血1.输血适

24、应证主要有：出血；严重贫血；低蛋白血症；严重感染；凝血障碍。2.输血种类与选择（1）全血输注：全血是指血液的全部成分，包括各种血细胞及血浆中各种成分，还有抗凝剂及保存液。全血有保存全血及新鲜全血之分。常用保存于（42）的全血。全血输注缺点：全血中所含血小板与白细胞引起的抗体，可在再输血时引起反应；对血容量正常的人，特别是老人或儿童，易引起循环超负荷。目前，全血输注已逐渐减少，而代之以成分输血。（2）成分输血：优点：疗效高：将血液成分提纯、浓缩而得到高效价的制品。反应少：可减少输全血引起各种不良的抗原抗体的免疫反应。合理用血液成分：将全血分离制成不同的细胞及血浆蛋白成分，供不同目的应用。经济：既

25、可节省宝贵的血液，又可减低患者的医疗费用。【小 结】红细胞血型系统HLA抗原ABO血型系统9号染色体长臂3区4带56周可测出ABH抗原Rh血型系统 D、E、C、c、eD抗原者称Rh阳性第6号染色体短臂上即HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-D；HLA-D又分为HLA-DR、HLA-DQ、HLA-DP亚区抗体ABO天然M，免疫G，Rh均为G大部分是IgG、少数是IgM鉴定盐水凝集正反定 根据抗原来定型常用简单玻片法 盐水不能检出IgG抗球确定IgG最可靠临床意义1.输血2.新生儿溶血病3.器官移植1.器官移植2.输血3.亲子鉴定4.疾病诊断血液保存ACD与CPDA枸橼酸免焦化C三钠抗凝C

26、a2+结合P磷酸盐提高pHD葡糖延长寿命防溶血CPDA-1加腺嘌呤延长保存和放氧血液制品贮存温度和时间全 血 26 21d（ACD）红细胞 26 35d（CDPA-1）洗涤红 26 24d浓缩板 2024 7d浓缩粒 2024 24h新鲜冰冻血浆、冷沉淀物-30 1年低温冷冻红细胞 -65 10年红细胞上有A抗原，血清中有抗B抗体，请问是ABO型系统中的哪一型A.A型B.B型C.AB型D.O型E.亚型正确答案A答案解析A型红细胞膜表面有A抗原，B型红细胞膜表面有B抗原，AB型红细胞膜表面有A、B抗原，而O型则无A、B抗原。检测不完全抗体可使用的凝集反应A.协同凝集反应B.间接血凝试验C.间接凝

27、集反应D.Coombs试验E.直接凝集反应正确答案D答案解析不完全抗体多半是IgG类抗体，该抗体与相应抗原结合牢固，但在一般条件下不出现可见反应，Coombs试验利用抗球蛋白抗体作为第二抗体达到桥梁作用，使红细胞凝集。Rh阳性是指红细胞膜上含有A.C抗原B.A抗原C.D抗原D.E抗原E.B抗原正确答案C答案解析Rh抗原命名为C、D、E、c、d、e，临床上习惯将有D抗原者称为Rh阳性，将虽有其他Rh抗原而无D抗原者称为Rh阴性。Rh阴性母亲，其胎儿若Rh阳性，胎儿生后易患A.血友病B.白血病C.红细胞增多症D.新生儿溶血病E.巨幼红细胞性贫血正确答案D答案解析孕妇血浆中含有Rh抗体时，当与含相应抗原血液相遇，将引起严重新生儿溶血病（常为第二胎溶血）。人类白细胞抗原（HLA）在临床上一般不用于A.器官移植B.亲子鉴定C.输血D.诊断强直性脊柱炎E.交叉配血正确答案E答案解析HLA检测临床意义：器官移植、输血、亲子鉴定、疾病诊断。在血液“ACD”保存液中，枸橼酸钠的主要作用是A.抗凝B.延长红细胞生成期C.供给红细胞能量D.保持红细胞形态完整E.防止红细胞膨胀失钾正确答案A答案解析枸橼酸钠是抗凝剂。不属于成分输血优点的是A.可提高疗效B.减少输血反应C.血液使用更合理D.可节省血源E.避免输血传播疾病正确答案E答案解析成分输血优点：疗效高、反应少、合理用血液成分、经济。