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1、渔业资源与渔场学课件热带鱼类发育早期耳石日增量第四章专业知识模板热带鱼类发育早期耳石日增量1 介绍我们对于海洋鱼类早期的生态动力研究曾频繁地被称为密不可测的“黑箱”。然而，幸运的是，几十年前Pannella发现海洋鱼类的耳石记录了年龄和每天的生长信息，这个发现给我们提供了一个有力的工具来揭开这个“黑箱”的谜底。在那之后越来越多的研究和技术进步，使得科学家们能从幼鱼的耳石中获取大量的精确的细小的早期生活史的信息。相比较于类似的无脊椎动物的研究，使用耳石微结构包含的大量有价值的信息是鱼类种群研究中最大的优势之一。个体的年龄信息能被用于研究幼鱼分布状况、补充动力、早期生长、出生率和死亡率以及更为熟知

2、的具体年龄段的生长率。重要的是，个体的数据可以被扩展到群体和种群的动力研究，包括特定的产卵种群和育苗场。理解其下的机制是最终预测重要商业鱼种的世代强度的必要一步。生长率也可以被用于生物能量模型和检测早期生活的关键事件。最终，对整个生活史的变化所做的生长和存活的研究可能为进一步研究特定生活史阶段的优势和进化提供基础。在这一章节里，我首先列出了能从幼鱼耳石获得的个体早期生活史数据的普遍用途，包括耳石提供的线索里不同时空尺度的变化。之后，我展示了从幼鱼耳石提取年龄和生长数据所需的技术原理和步骤。我具体地讲述了获取样本、处理耳石用以分析、读取增量信息以及分析数据的基础方法。我也明确指出这个过程存在的固

3、有问题和局限之处。通过这些基础的步骤，有价值的年龄和生长信息能提取出来用于不同的生态学研究中，包括不同生态环境中的热带幼鱼，比如深海区、珊瑚礁、海草床和河口红树林边缘区域。introduction+2.1+2.2+2.9(94-100,124)张慧敏P93-100：introduction4.在热带鱼的早期阶段每日的耳石增加展示：1.1基于欧托利的早期生活史特征耳石可以提供一组变量或早期生命历史(ELH)特征的数据。幼虫的年龄、出生日期、远洋幼虫期(PLD)、幼年期和沉降时间都涉及到在耳石轴上(表1)的耳石增量，在这段时间内任何时间点的相对日增长都可以通过观察连续增量之间的宽度来获得。在生长较

4、快的时期，通常会有更多的物质沉积在耳石成岩上，类似于树木年轮。在个体或群体中某一特定阶段的增量宽度的比较，提供了一种有关身体生长的相对尺度。此外，在体细胞生长和耳石生长之间的校准，可以提供从耳石耳石测量得到的真实体细胞生长的估计。演示了身体尺寸之间重要且一致的线性关系(例如:标准长度，SL)和耳石的大小和年龄是此类分析的前提条件(Campana 1990，格芬1992，Thorrold&野兔2002)。同样重要的是要注意，当在一个个体中比较不同阶段之间的增量宽度时，必须使用谨慎，因为耳石增量沉积的细节可能会随着身体几何(变化)、栖息地和食物来源的变化而发生变化。相对大小可以在一定的环境中测量，

5、从耳石半径到兴趣日。然而，这一测量也必须谨慎，因为各种环境过程可能会影响到体细胞生长的关系(例如，耳石岩性的生长关系。温度，Mosegaard等1988年，食物水平，Baumann等2005年的)和耳石结石物质将继续沉积，即使是在身体生长可以忽略的情况下。因此，这一分离的身体-耳石结石的增长可以使人们对身体的大小产生误导(Mosegaard等人1988年，Reznick等人1989年，Reznick和1992年，morales-nin 2000)。值得注意的是，在自然条件下，这种“脱钩”可能是很少的，对于年轻的鱼来说，这种生长缓慢的小鱼不太可能活到在野外采集的地步(民沃和莫赛德2002年)。无

6、论如何，通过对不同年龄鱼类的身体长度的测量，证实了在生长缓慢和快速生长的鱼类之间的相对大小的相对大小的估计。Searcy和海绵2000年)可以使耳石的大小成为一个有用的相对测量。生命的历史变迁也可以记录在耳石lith，除了每日的增加。定居是一种主要的过渡性事件，对幼年鱼的生态研究具有十分明显的意义。沉降(和相关的变形)可以用非常不同的方式记录下来。对某些物种的解决，仅仅是缩小幼体增量的范围(或反之亦然)的一个点。一个更宽的暗带(或检查)在一些物种的定居和变形过程中沉积。在其他更不寻常的物种中，比如蓝头濑鱼、海地双筋膜，变形是长时间的，而鱼被埋在沙子和珊瑚的碎石下，在这段时间里，一个宽带被沉积在

7、耳石上(维克多1983年;图1).定居标志可能是渐进的或突然的，通常是物种特有的，并且在当地的种群中可能会有变化。(威尔逊&McCormick 1997，1999)。某些物种的定居特征是次生生长中心(附属原基)的形成。在这一卷的第7章中，Panfili等人在更详细的讨论中讨论了原始的原始状态(参见Geffen等人2002年的其他讨论)，以及莱特等人(2002a)提供了其他特定物种的其他过渡事件的汇编。P95日常耳石增长图1所示。用于获得ELH特征的特征。(a)一种海状的双筋膜状体（D背，V腹，A前，P后）(b)一种横截面的卢特杰斯格里修斯射手座，和(c)一种斯特格斯图的拉皮图。中心原基(核心)

8、，L=幼虫增量，S=沉降，E=浮现，J=青少年增量，E=耳石边缘。以前用于区分鱼种和鱼类的不同的耳石形状的差异。1993年，坎帕纳和卡塞尔曼，Begg和布朗2000，2002年的)，但在更小的范围内，关于耳石形态学(形状)的数据可能对年轻的鱼类的生态研究有帮助。最近研究了两种热带鱼，两种两栖类，一种，一种，一种是一种，一种是一种很有价值的，一种是一种很有价值的。13天)喂养历史(Gagliano和2004年)。这是一个有前景的新研究途径，与传统的每日增量分析一起，可以为生态研究提供高分辨率的信息。表1：早期的生命历史特征(LHT)可以通过阅读带有生态定义的幼鱼的卵和耳石指标来获得，这些指标用于

9、测量幼虫、定居期或后殖民时期的幼体特征。生活史定义测量尺寸幼虫阶段收集时的幼虫时代耳石原基和边缘之间的增量出生日期产卵日或孵化日孵化的一天从收藏之日减去幼虫年龄(以上)。根据物种的不同，需要考虑一个额外的时间来孵出时间(通常是2-4天)。远洋幼虫期(PLD)幼虫在浮游生物中度过的天数;卵生卵(或从德生蛋中孵化)和沉降之间的时间沉积耳石的核心与边缘之间的增加，或在耳石上的核心和明显的标记之间的增加(沉降标记;请参见图1)少年时代后沉降和变形的天数从沉降标记到耳石边缘的增量定居日幼虫的时间从浮游生物到本斯特岛从收集日开始减少未成年人的年龄每天的增长相对增长率连续的耳石增量之间的距离与年轮相似，更多

10、的物质通常是在生长较快的时期沉积一定时期的大小给定年龄的相对大小从原始的原始到一定年龄的距离(在年龄上的辐射-年龄)通过耳石派生特性的主要优点是，变量同时被记录下来，这样事件就可以与年龄相关，重要的是，一个实际的日历日期可以与特定的年龄、事件或个体鱼的生长速率相关。此外，耳石lith是无细胞的，不受吸收。这允许对鱼类早期生活中的事件进行历史分析，例如潮汐周期与幼虫的运输之间的紧密耦合。每日老化对群体补充研究至关重要，旨在确定定居、招募和幼虫运输机制的模式。当产卵是未知的(经常远洋物种的情况),可以确定使用源种群幼虫年龄数据与水文和当前数据(野兔和考恩1991、1996、福勒et al . 20

11、00年詹金斯等。2000年,印度教等。2002年,Govoni et al . 2003年,Serafy et al . 2003年)。通过研究从这些栖息地收集的鱼类的相对生长，可以比较不同的青年栖息地的作用和相对价值。相比耳石lith-derived早期生活史特征也可以在最初的幼虫或定居者和幸存者的检查模式选择性死亡率。从个体收集的这些数据可以很好地解决变异性的问题，并为“基于个体的模型”(IBM)提供数据。这些相对较新的技术可以成为定义变量之间关系的有力手段，最终将通过揭示影响鱼类早期生命历史的重要的生态过程，从而提高我们对种群生态学的认识。Allain等人2003年)。1.2在早期生活史

12、的特性变异：对耳石派生的早期生命历史特征的研究经常涉及到超越对这些特征的测量，这些特征在多个空间和时间尺度上表现出来。以下几个例子说明了这些性状的变化是如何影响我们对生态过程的研究的。1.2.1在早期生活史上的特点和地理上的差异在生态研究中，远洋幼虫的持续时间是具有并持续受到广泛关注的ELH特征的列表。幼虫需要发育成未成年人的时间，不仅在其生命史策略的进化过程中起着重要的作用，而且可能影响到种群在生态尺度上的连接性。在不同的分类中，鱼类的数量有很大的不同，这可能会影响到种群在生态学上的相关程度(参见海绵类的研究，2002年的讨论)。早期的工作是为了检验在不同地理尺度上的分类中(维克多1986、

13、长尾谷等1989、威灵顿和维克多1989、维克多和威灵顿2000、萨帕塔和赫伦2002)之间的差异。最近的研究已经对不同的鱼种(舒曼和伯明汉1995，里吉诺斯和维克多2001，Taylor&地狱berg 2003)的基因关系进行了研究。1.2.2在早期的生命历史特征中，紫杉的变异在不同的分类中，不同种类的紫杉的变异程度不同。特定的分类单元有相对不变的PLDs(例如:而另一些人则在PLD中表现出更广泛的范围(一些唇齿、小虾、木盖、刺头肌);维克多1986，考恩1991，1994，1994，1994，1997，1997)。这种分类可以用来检验生态过程的作用，例如食物的可用性和水的温度在较短的时间尺

14、度上的作用。例如，在PLD中，在PLD的月群中，有一群人的变化很明显，在巴巴多斯岛的“蓝头濑鱼”中，有更大的生长速度的鱼有更短的PLDs(Searcy和海绵状的2000)。较低的生长和较长的PLDs被归因于食物供应的减少，以及在系统中移动的低盐分的物理海洋特征(北巴西环;2000年，棉球和平卡，2004a)。在那里，水温更有季节性变化(例如:佛罗里达的钥匙)，在温暖的月份里，t.双筋膜状体的沉降比在寒冷的月份里的沉降速度要高得多. 由于浮游生物的死亡率通常是高且大小的(阶段持续时间假说:安德森1988年)，因此，生长和发育得更快并更快定居的幼虫可能会有更高的生存率。例如，在巴拿马的幼虫生长中，

15、不同物种的变异，在两种pomacentrids(Wilson&Meekan 2002，Meekan et al-2003)和一种acanthurid(Bergenius等2002年)的定居变化中占很大一部分。1.2.3群内变异在生长和PLD等特征中，可以用来探索早期存活率的动态变化。同一队列时间的重复收集(例如:“cohort-tracking”)允许幸存者的特征的比较(最近)收集与解决人口(最早收集)检查是否生存与早期生活史特征如幼虫或青少年增长或幼虫期的持续时间。在这本书的第六章中，Vigliola和米坎更详细地探讨了这种方法。2途径方法2.1样本大小理解ELH性状的不同尺度是设计基于耳石

16、的研究的先决条件，以确保收集足够的样本(个体鱼)以供耳石解释，以回答主要的问题。需要足够的数量来准确估计一个特定地区的物种的平均价值，而比较研究的抽样设计必须仔细计划，以包含其他的变异尺度。例如，如果计划进行地理分析，不同地区不同月份的样本收集可能会带来季节性差异，而不是地理位置。此外，取样必须将已知的困难与耳石耳石处理和解释(更详细地讨论)加以考虑。Cohort-tracking研究早期生活史特征的分布如何变化随着时间的样本过多的个人认为必须从同一队列,因为特定的群组成员只能决定耳石老化完成后,通常导致消除每个样本的一部分。对幼鱼的任何研究都需要足够的幼虫、定居者或新老的新成员。了解该物种的

17、自然历史，包括它的栖息地，以确保该物种的供应，这显然是有帮助的。2.2样本收集幼虫和年轻的新虫可以通过一些取样技术来收集。幼龄幼虫通常是通过拖曳各种类型的网来收集，从中到大容器。网开和网的尺寸越小，网被拖得越慢大的、年长的幼虫能够躲避取样装置的可能性越大。必须用大开口和大网孔的网来收集年长的幼虫(大于1平方米的开口和1毫米的网孔)。这些更大的网可以而且应该被更快地拖拽，以增加收集活动的年老幼虫的可能性，尽管快速的拖拽也可能会通过网络增加幼虫的挤压，从而导致无法识别的损坏的标本。必须选择两种速度来平衡这些对立的约束，因为对幼虫的准确识别是进一步分析的先决条件。图中浮游动物采样装置的状态包括多开和

18、关闭环境采样系统(模型;1 - 4平方米开放;0-3毫米网格)和一个耦合的模拟系统，有两个不同的网和网大小(guiget等2005)允许同时对幼虫和它们的猎物进行取样。这一装置可以从离散的深度收集样本，同时测量水道测量变量，但它必须从一个大型的专门的研究船中进行捕捞。模型已经成功地在各种热带和亚热带地区(如:巴巴多斯、考恩和卡斯特罗1994年、巴黎和考恩2004年;佛罗里达海峡，2008年的佛罗里达海峡)，尽管运营大型研究船的高昂费用使他们的使用有所限制。快速样品衰减可能限制热带水域的拖带时间(25摄氏度)，但一个解决方案是在检索时立即对样品进行冰敷。一个不那么技术性的，但仍然有效的，从较小的

19、容器中收集垂直的离散样本的网，是标准的开放闭合塔克拖网(见Pepin和剪切1997年的塔克拖网和bongo网)。晚期，或定居阶段幼虫经常被幼虫的光阱所攻击。这些陷阱被立即部署在珊瑚礁的近海处，以便在它们返回珊瑚礁定居时拦截它们。无数的设计都在不同的地理环境中使用(多尔蒂1987、Brogan 1994、海绵、1996a、b、Brogan等2001年、威尔逊和米坎2002)，所有这些都是对特定物种的选择性(多尔蒂1987)。此外，在水柱(Fisher&Bellwood 2002)中，还可以垂直放置光阱来评估幼虫的垂直位置。渠道网(Shenker等人1993年)和顶盖网(Shenker和Galzi

20、n 1993年，Shenker和McIlwain)可以有效地收集通过珊瑚礁通道或在礁湖上的幼虫，但需要特别的环境条件(强大的、单向的流动)来部署。幼虫的钱包是一种笨重的，但通常是收集幼虫的方法，尤其是老的“预定居”或后期的幼虫(金斯福德和乔，1985年，Choat等人1993年)。年轻的新兵可以从底栖生物的栖息地收集(例如:礁、海地)通过发出枪或手网，或不使用诸如丁香油或奎宁之类的麻醉化学物质。显然，对物种特有的栖息地的了解和对幼鱼的行为的了解是很有帮助的。例如，最年轻的珊瑚礁定居者通常都是在巨石下或隐藏在巨藻中(例如:销售等，1984年，1995年，日耳石增量，2008年)。对这些栖息地进行

21、仔细的调查是必要的。年龄较大的新兵可以用手或用小手矛来捕鱼，或用小的长矛捕鱼，或用底栖拖网捕鱼。滩海是近岸、河口地区、包括海藻床等地收集青少年的一种常用技术。红树林支柱的取样可能具有挑战性，方法包括流行网(Hindell&Jenkins 2005)或使用麻醉化学药品的手网。无论收集到的鱼的方法是什么，都应该保存在超过75%的乙醇中。冷冻也是一种可接受的短期储存标本的方法。一些研究人员已经成功地将干燥作为一种保存手段，但这可能是有风险的，其他的防腐剂应该在使用之前对耳石lith的影响进行测试，以用于重要的样本。例如，使用某些防腐剂会损坏耳石liths(例如:甲醛或福尔马林，是温和的酸性物质)。2

22、.3日沉积的验证耳石是获取短期或短期生态数据的宝贵工具，稚鱼提供的增量每天都是固定的。大多数珊瑚礁鱼类耳石每天都有增加的量，尽管有一些案例存在每日沉积不明显或不一致。使用耳石的第一步，因此，是验证每日的增量的存在的存在。这个可以做直接涉及标记或喂养稚鱼(Wright et al-2002b)或通过间接或统计技术的使用(morales-nin和Panfili 2002a)。每天对许多物种的幼体或幼体的沉积率进行了验证。不同的种群(见表2)。每日沉积速率的方法可以被验证包括以下内容。1.化学标记。化学标记耳石与维护相结合在实验室里用短时间标记鱼(7-10天;图2)来识别在鱼的标记和牺牲时间之间形成

23、的结构。耳石一般都是在24小时的化学浴中浸泡活鱼或者注入高浓度的化学物质。化学物质由耳石很容易的吸收包括四环素，氧四环素，钙素荧光素绿色，阿利扎林络合素，氯化锶(1988年，1990年，Geffen 1992年，威尔逊1995，见莱特等2000年的有效总结表化学浓度)。2。压力标记 这种方法包括在耳石中诱导一个非典型的标记通过将鱼暴露在较高的温度下，缩短了光脚，或者减少了食物，保持鱼的额外天数，并比较增加的数量在压力标记后存放的时间(请参阅赖特等2002b的评论)。耳石在实验室条件下维护的鱼的增量通常不会类似于在野外的鱼的增量(图2)，但是它的周期性沉积应该保持不变，允许验证速率的增加。形成。

24、化学或压力标记的鱼类也可以被释放到野外并被捕获。这个方法会产生最自然的增量，但是重新捕获率可能很低。现场围场中有标记的个体的维护。户外的中型生态系统是另一个选择。3。集合在结算。收集到的晚期幼鱼的定居沉降的过程允许对这些个体的耳石进行比较定居幼鱼的耳石在晚期阶段的到来后，收集了一小段时间。在稚鱼后期。这种方法不仅验证了幼鱼的每日沉积量的增加也验证了定居标志。(即:晚期幼鱼不应该有这样的标记）4。实验室饲养。在实验室里孵出一批卵，然后检查几天后，幼鱼的耳石允许对其周期性进行验证在幼鱼生活的开始阶段增加。稚鱼期饲养多物种的困难使我们很难验证周期性的周期性，尽管改进的饲养技术使这种方法越来越可行。5

25、幼鱼的连续场集。耳石的周期性增长能通过重新采样一个水质量(包含一组幼虫)而建立。短周期(7天)和比较年龄和长度的频率分布将收集的幼鱼分为几类。这个方法假设相同的队列有被重新取样时间，很少有新的鱼进入水团，鱼有一个恒定的，可预测死亡率。这种技术在具有大量水柱混合的环境，但可以应用于某些场合环境中没有取得很好的效果，但是可以在特定环境中应用以及对幼鱼的定居。计算增长率的比较。通过长期频率的差异可以与生长速率进行比较从耳石增量的解释分析(尺寸大小)计算，作为一种确证的方法。(如耳石增量解释。1997年，morales-nin&醛)。图2。银纹笛每日沉积的确定新捕获的幼鱼被置于一个暴露与空气的10 L

26、盐水玻璃池中。用200毫克/l alizarin的红色浓度浸泡24小时。由于阿利扎里红的感光性，被保存在黑暗中。24小时后,鱼被移走并放置在流动的海水罐中，直到14天后，他们被接受了，耳石也准备好观察了。通过倒置的显微镜观察到的耳石是用紫外线照射的在标准灯光下标记增量，然后再看用显微镜来列举每一个增量的数目(黑线和白线放大后的盒子)超出了荧光标记(每个图像中的白色箭头)。它是在实验室条件下维护的鱼的常见情况是增加这与野生环境里的增量不相似但是对增量周期的验证依然是可能的。边际增量分析，经常用于验证年度成鱼的增量沉积，一般不适合每天验证。增加的时间，考虑到时间的缩短和限制显微镜和观察者解析(见r

27、1984，詹金斯和戴维斯1990，高德纳公司1991)。Campana(2001)提供了关于优缺点的详细对比各种验证技术。第二个需要对不同物种进行验证的过程是第一次的时间增加沉积。第一次增量沉积的平均时间是足够的有一些目的，但有必要验证一下这个问题的答案更精确的问题，如:铸造的拉瓦式运输或产卵区。第一个增量通常是在孵化后的某个时间(Campana&Neilson 1985)，通常是在产卵后2-3天。被动漂移必须考虑到在估计成年产卵地点的早期阶段。这类物种的幼鱼的每日增量。产卵时间较长第一个增量沉积发生在仔鱼孵化的过程中从在底部大量产卵的过程中，但这些卵通常不会在孵化之前就被漂走。2.4副增量每

28、日沉积速率的验证是有用的甚至是必要的对于区分副增量,例如，每天增加的增量超过一次。这样的标记在热带鱼类中并不罕见，它们包含在读数结果中对年龄的高估和对增长率的低估。副增量最常见的是颜色较浅，对比度也不明显增量(如。蓝头濑鱼)，虽然每天的增量也可以出现在一些颜色较暗的条带可能与每日的增加混淆(例如，梭鱼)。将显微镜的放大率调整到增量的位置轻微的模糊可以帮助区分子日和每日的增量，因为子日当图像变得模糊时，增量就会消失(图3)。在明显的情况下，增量可能很难区分每天的增量只有在某些地区的耳石。然而，值得注意的是，在这些地区子日增量应该在组中重复出现。它们一般不会单独发生。此外，每天的增量应该是大约一半

29、的宽度。临近的每日增量，它们在这里变得明显。副增量当鱼很年轻的时候可能是一个特别的问题因为它可能更难将子日和每日增量区分开来，而不需要多次增量相比之下，用显微镜的调整来解决差异是比较困难的当只有很少的增量时。以7-10标记和保持鱼的确认天可以帮助解决哪些标记是每日的，哪些是子日的。主识别子日增量的原因是它们没有被计算或度量。目前还没有任何令人信服的理由来比较子日的具体模式热带鱼的增量。2.5解剖和耳石的制备技巧从小鱼类中提取耳石似乎是一项艰巨的任务，但是正确的工具和技术，实际上是一个相当简单的过程。请注意所有的形态测量数据都应该在开始任何解剖之前得到，因为在解剖过程中，鱼体会被破坏或破坏。例如

30、,每个鱼应该被分配一个样品编号，重量(湿重)和适当的长度(标准、全或叉长度)测量。耳石分离的细节准备取决于物种和生命阶段的兴趣。因此,以下是基于“案例研究”方法的技术讨论所提出的技术应该易于应用于其他物种的多样性。Secor等人(1992)提供了一种用于其他物种的技术的编译。A在耳石石制备方面有价值的手册(Secor等人1991)也可以在网上找到2.5.1仔鱼大多数仔鱼都是足够小的，因为保存的不透明可以有效地进行将仔鱼浸泡在中等粘度浸油中1-30天。那在偏振的情况下，对耳石的配对可以很容易的被观察到显微镜放大后，身体是透明的(图4)。在大多数情况下,仔鱼有时可以通过身体直接在体内直接读取带有漂

31、白剂或酶的果肉(Secor&Dean 1992，绿色等2002)并染色使用Von Kossa染色法(绿色等2002)。但是，耳石应该从身体中移除并且所有的组织残留物都被清除干净。移除耳石的方法包括轻柔地撕裂组织，并用非常精细的镊子或解剖或昆虫针(盒子1)清洗组织可以通过用解剖或昆虫针或静电研磨的钨针或用一种轻漂白剂溶液冲洗耳石。从子鱼体中获取和准备耳石的步骤从稚鱼体中获取和准备耳石的步骤从幼鱼体中获取耳石的步骤把嵌入式的耳石放在树脂中准备解剖一些嵌入式的耳石的解剖耳石的打磨一些耳石表面太粗糙了，导致我们不解剖的话无法清楚地看到全部，还有一些耳石太小了，使我们解剖起来很困难。打磨光滑这些耳石的表

32、面，无法解剖的耳石可以直接放在我们的指尖打磨，打磨时要用氧化铝和摩擦布重复地顺时针和逆时针的摩擦。同样，可以像在上面的章节中提到的那样，把耳石的有某种结合剂的一面和擦亮的一面直接粘在一起，在指尖上的磨损和撕裂程度要低得多。这样的话，我们就可以拿着一些耳石来打磨他们了。2.5.4耳石的日常增量的分析偶尔会受到光学显微镜的分辨率的限制。光学显微镜的分辨率通常只到0.25um,最多到0.5-1.0um.TEM(透射电子显微镜)和SEM（扫描电子显微镜）的使用能够避免这一问题，达到很高的分辨率，可以清楚地看到一些细小的结构。在TEM和SEM下，样品的数据处理是专门的，需要很高的实验操作经验，是十分昂贵的，然而，这也意味着，只有在光学显微镜无法使用，尺寸十分小时，获取的这些信息十分重要时，这些技术才会使用。尽管SEM在一些情况下已经得到了使用，但是TEM和SEM在稚鱼的日龄测定中不会经常被使用。SEM更多的用来测以年为单位的年龄测量，然而，样品的技术和准备在其他地方有更详细的讨论。后面是一些耳石的实验数据。2.6读取耳石的选择在老化研究中使用的耳石的选择依赖于这项研究物种，鱼的相对年龄，传统的或以前的其他研究者的使