021独一味饮片检验标准操作规程.docx

1、021独一味饮片检验标准操作规程独一味饮片检验标准操作规程1 范围 本标准建立了独一味饮片的检验标准操作规程。本标准适用于独一味饮片的检验。 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，其最新版本适用于本标准。中华人民共和国药典 2010版一部 独一味饮片内控质量标准 编号 3 职责 检验人员、复核人员对实施本标准负责。4 操作规程4.1 试药与试剂 乙醇、镁粉、盐酸、硫酸、硝酸、水合氯醛、甘油醋酸试液、稀甘油、羧甲基纤维素钠、硅胶G、氯仿、甲醇、 磷钼酸试液、亚硝酸钠、硝酸铝、氧化钠、 0.4%磷酸溶液、2.5mol/L盐酸甲醇溶液、独一味对照材、芦丁对照品、木犀草

2、素对照品。4.2 设备及仪器放大镜、直尺、生物显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、酒精灯、层析缸、天平、回流装置、硅胶G薄层板、点样毛细管、紫外光灯、水浴锅、坩埚、扁形称量瓶、紫外-可见分光光度计、高效液相色仪、烘箱、具塞锥形瓶、10量瓶、高温电阻炉、电炉、干燥器。4.3 检验项目4.3.1 性状（1） 操作方法 取用供试品，用目视或用放大镜观察，并用直尺测量其直径；闻其气，用口尝其味。（2） 记录 记录观察的形状，供试品其直径数值和气味。（3） 结果判定 叶莲座状交互对生,卷缩,展平后呈扇形或三角状卵形,长4-12cm,宽5-15cm;先端钝 或圆形,基部浅心形或下延成宽楔形,边缘具圆齿;上表面绿

3、褐色,下表面灰绿色:脉扇形,小脉网状,突起;叶柄扁平而宽。果序略呈塔形或短圆锥状,长3-6cm;宿萼棕色,管状钟形,具5棱线,萼齿5,先端具长刺尖。小坚果倒卵状三棱形。气微,味微涩、苦。判为符合规定。4.3.2 鉴别4.3.2.1 显微鉴别（1） 操作方法 取本品粉末，滴加水合氯醛试液后，加热透化，再加稀甘油装片，在显微镜下观察。（2） 记录 记录粉末鉴别特征。（3） 结果判定 本品粉末棕褐色。非腺毛众多，2-3个细胞组成，直径10-15m,壁较厚，有疣状突起。叶肉细胞呈不规则形，内含众多草酸钙针晶，长7-10um。气孔直轴式或不等式。纤维长梭形，壁孔横列。判为符合规定。4.3.2.2 理化鉴

4、别 照薄层色谱法（中国药典2010版一部附录VI B）。（1）操作方法 取本品粉末1g,加乙醇10ml,加热回流15分钟,滤过,取滤液作为供试品溶液。另取独一味对照药材1g,同法制成对照药材溶液。再取山栀苷甲酯对照品、8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品,加乙醇制成每1ml各含0. 5mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录B)试验,吸取供试品溶液5-10l.对照药材溶液和对照品溶液各5l,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇(4:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以磷钼酸试液,在105加热至斑点显色清晰。（2） 记录 记录供试品和对照药材的用量，吸附剂、展开剂及其配比、点样量、薄层

5、色谱图及结果。（3） 结果判定 供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。判为符合规定。 4.3.3 检查：4.3.3.1 水分 照水分测定法（中国药典2010版一部附录 H第一法）。（1）操作方法 取本品25g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，打开瓶盖在100105干燥5小时，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。（2）记录 记录供试品取用量、干燥温度、干燥时间、水分的计算和结果。计算公式： m p+ my - m z

6、 水分= 100% m y式中：m p为恒重的称量瓶；（g）m y为样品重；(g)m z为恒重的（瓶+样品）(g)（3）结果判断本品的水分小于或等于13.0%，判为符合规定。4.3.3.2 总灰分 照灰分测定法（中国药典2010版一部附录 K）（1） 操作方法 取本品35g，至灼灼至恒重的坩埚中，称定重量（准确至0.01g），缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化，逐渐升高温度至500600，使完全灰化并至恒重。 根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）。（2）记录 记录供试品取用量、炽灼温度、炽灼时间、灰分的计算和结果。计算公式： mzmp 总灰分= 100% my式中：mp 为坩埚恒重；m

7、y为样品重；mz为炽灼后（坩埚+样品）恒重（3）结果判断 本品的灰分小于或等于13.0%，判为符合规定。4.3.3.3 酸不容性灰分 照酸不溶性灰分测定法（中国药典2010版一部附录 K）（1）操作方法 取4.3.2项下所得灰分的，在坩埚中小心加入稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不容性灰分的含量（%）。（2）记录 记录供试品取用量、炽灼温度、炽灼时间、酸不溶性灰分的计算和结果。 计

8、算公式： mzmp 酸不溶总灰分= 100% my式中：mp 为坩埚恒重；my为样品重；mz为炽灼后（坩埚+样品）恒重（3）结果判断 本品的灰分小于或等于4.0%，判为符合规定。.3.3.4浸出物照水溶性浸出物测定法项下的热浸法（中国药典2010版一部附录 ）（1）操作方法 取本品4g，精密称定，置250ml的锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，精密称定，静置1小时后，连接回流冷凝管，加入至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，在称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取25ml,置以干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，与105干燥3小时，置干

9、燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品的水溶性浸出物的含量（%）。（2）记录 记录供试品取用量、加70%乙醇量、滤液取用量、干燥温度、干燥时间、浸出物的计算和结果计算公式： （mz-mp）V 浸出物= 100% my25式中：mp为蒸发皿恒重；my为样品重；mz为干燥后（蒸发皿+样品）恒重； V为加70%乙醇量。（3）结果判断 本品的浸出物不少于20.0。判为符合规定。4.3.5 含量测定 照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部 附录V A)及高效液相色谱法（附录 ）测定。4.3.5.1 总黄酮 （1）操作方法对照品溶液的制备 精密称取在120 减压干燥至恒重的芦丁

10、对照品，加70乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加70乙醇至刻度，摇匀，制成每lml含无水芦丁 0.2mg的对照品溶液。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.Oml、2.Oml、3.Oml、4.Oml、5.0ml、6.0ml，分别置25ml量瓶中，加水至6m1，加5亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10硝酸铝溶液1ml，混匀，放置6分钟，加氧化钠试液10m1，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟：以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部 附录 V A)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。测定法 取本品装量差异项下的内容物

11、，混匀，取约1.2g精密称定，置lOOml量瓶中，加70乙醇70ml，置水浴上微热并时时振摇30分钟，放冷，加70乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量，计算，即得。（2）记录 记录供试品称样量、样品溶液体积、对照品溶液芦丁的浓度、供试液浓度、试液吸收度以及计算结果。计算公式： C V 总黄酮含量= 100% M式中： M为样品重； V为样品溶液体积 C为对照品溶液芦丁的浓度（3）结果判定 本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H3oO16)计，不得少于5.4%。

12、4.3.5.2 山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部 附录 )测定。（1）操作方法色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为235nm。理论板数按山栀苷甲酯峰计算应不低于3000。时间/分钟 流动相A（%） 流动相B（%）0 -11 9 9111-35 918 918235-45 18 82 对照品溶液的制备 取山栀苷甲酯对照品、8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml各含30g的混合溶液,即得。供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.6g,

13、精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量.用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml.置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得,测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l,注入液相色谱仪,测定,即得。（2）记录 记录对照品浓度、对照品峰面积、样品峰面积、样品称样量、含量的计算和结果。A样C标V样计算公式 ： C样= 100% A标m样1000 式中：C样：样品百分含量A样：样品峰面积m样：样品称样量A标：对照品峰面积C标：对照品浓度V样：样品溶液体积（3）结果判定 本品按干燥品计算,含山栀

14、苷甲酯( Cl7 H26 O11)和8-O-乙酰山栀苷甲酯(C19 H28 O12 )的总量不得少于0.50%。4.3.5.3 木犀草素 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部 附录 )。（1）操作方法 色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以甲醇-0.4磷酸溶液（55：45）为流动相；检测波长为350。理论板数按木犀草素峰计算应不低于1500。 对照品溶液的制备 精密称取木犀草素对照品适量，加甲醇制成每含20的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约1，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2.5mol/L盐酸甲醇溶液25ml，密塞称定重量，加热回流30分钟，

15、放冷，再称定重量，2.5mol/L盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液，置10量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各，注入液相色谱仪，测定，即得。（2）记录 记录对照品浓度、对照品峰面积、样品峰面积、样品称样量、含量的计算和结果。A样C标V样计算公式 ： C样= 100% A标m样1000 式中：C样：样品百分含量A样：样品峰面积m样：样品称样量A标：对照品峰面积C标：对照品浓度V样：样品溶液体积（3）结果判断 本品按干燥品计，含木犀草素（15106）不得少于0.15 独一味饮片原始检验记录批 号规 格检验项目数 量请检部门检验日期年

16、月 日来 源报告日期年 月 日检验依据独一味饮片内控质量标准及中华人民共和国药典2010版一部【性状】本品叶莲座状交互对生，卷缩，展平后呈 ，长 cm，宽 ，先端钝或圆形，基部 或下延成 ，边缘具 ；上表面 ，下表面 ；脉扇形， ，突起；叶柄 。果序略呈 ，长 cm；宿萼棕色，管状 ，具5棱线，萼齿5，先端具 。小坚果到卵状三棱形。 。 结论： 【鉴别】 （1）本品粉末 。非腺毛众多，23个细胞组成，直径1015m,壁 ，有疣状突起。叶肉细胞呈 ，内含众多 ，长 m。气孔 。纤维 ，壁孔 。 结论： （2）取本品粉末1g，加乙醇10ml,加热回流15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取独一味对

17、照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液510l和对照药材溶液5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（4：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以磷钼酸试液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显 。 1： 2： 结论： 【检查】 水分：照水分测定法（附录 H第一法）测定，不得过13.0%。项目序号称量瓶恒重样品重（瓶+样品）105干燥5h后重105继续烘1h后（瓶+样品）重如未恒重：105继续烘1h（1）（2）计算：第1页 共4页 检验人： 复核人： 日 期： 年 月 日 日 期： 年 月 日 （1）

18、100%= （2） 100%= 平均值： = 结论： 总灰分 不得过13.0% (附录 K)项目序号坩埚恒重/g样品重/g（坩埚+样）550炽灼4h后重/g550继续炽灼1h后（坩埚+样）恒重/g如未恒重550继续炽灼1h（1）（2）计算： （1） 100%= （2） 100%= 平均值： = 结论： 酸不容性灰分 不得过4.0% (附录 K)项目序号坩埚恒重/g样品重/g（坩埚+样）550炽灼4h后重/g550继续炽灼1h后（坩埚+样）恒重/g如未恒重550继续炽灼1h（1）（2）计算： （1） 100%= （2） 100%= 平均值： = 结论： 浸出物 照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法（

19、附录）测定，用70%乙醇作溶剂，不得少于20.0。项目序号蒸发皿恒重/g样品重/g加70%乙醇量/ml（皿+样）105干燥3h后重/g（1）（2）计算： （1） 100%= （2） 100%= 平均值： = 结论： 【含量测定】 总黄酮： 照紫外-可见分光光度法（中国药典2010版一部附录V A）对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品 mg91.7%，置 ml量瓶中,加70乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷，加70乙醇至刻度，摇匀，即得。C对 = mg/ml。第2页 共4页 检验人： 复核人： 日 期： 年 月 日 日 期： 年 月 日 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、

20、4ml、5ml、6ml，分别置25ml量瓶中，加水至6m1，加5亚硝酸钠溶液1ml，混匀，放置6分钟，加10硝酸铝溶液1ml，混匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液10m1，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应的溶液为空白。照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部 附录 V A)，在500nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标， 绘制标准曲线。测定法：取本品约1.2g精密称定，置l00ml量瓶中，加70乙醇70ml，置水浴上微热并时时振摇30分钟，放冷，加70乙醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置25ml量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至6ml”起，依

21、法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度，计算，即得。 本品按干燥品计算，含总黄酮以芦丁(C27H3oO16)计， 不得少于5.4%。 供试品称样量： 1 2 供试液吸收度： A1 A2 供试液浓度： C1 C2 计算：1 100% =2 100% = 平均值： = 结论： 山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部 附录 )测定。色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为235nm。理论板数按山栀苷甲酯峰计算应不低于3000。时间/分钟 流动相A（%） 流动相B

22、（%）0 -11 9 9111-35 918 918235-45 18 82 对照品溶液的制备 取山栀苷甲酯对照品、8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml各含30g的混合溶液,即得。供试品溶液的制备 取本品粉末(过三号筛)约0.6g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量.用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液2ml.置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得,测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l,注入液相色谱仪,测定,即得。本品按干燥品计算,含山栀苷甲酯( C

23、l7 H26 O11)和8-O-乙酰山栀苷甲酯(C19 H28 O12 )的总量不得少于0.50%。山栀苷甲酯： A对1 A对2 A对平 M1 M2 C对 A样1 A样2 计算： 1 100% = 检验人： 复核人： 日 期： 年 月 日 日 期： 年 月 日第3页 共4页 100% = 平均值： = 8-O-乙酰山栀苷甲酯： A对1 A对2 A对平 M1 M2 C对 A样1 A样2 计算： 1 100% =2 100% = 平均值： = 含山栀苷甲酯和8-O-乙酰山栀苷甲酯的总量 = 结论： 木犀草素 照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部 附录 D)。 色谱条件与系统适应性试验以十八烷

24、基硅烷键合硅胶为填充剂：以甲醇-0.4磷酸溶（55：45）为流动相；检测波长为350n。理论板数按木犀草素峰计算应不低于1500。 对照品溶液的制备 精密称取木犀草素对照品适量，加甲醇制成每1ml含20g的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.6，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人2.5mol/L盐酸甲醇溶液25m1，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用2.5mol/L盐酸甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液2ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20，注入液相色谱仪，测定，即得。本品按干燥品计，含木犀草素（15106）不得少于0.15 A对1 A对2 A对平 M1 M2 C对 A样1 A样2 计算： 3 100% =4 100% = 平均值： = 结论： 结果判定本品按独一味饮片内控质量标准及中国药典2010版一部检验，结果 第4页 共4页 检验人： 复核人： 日 期： 年 月 日 日 期： 年 月 日