微生物与生化药学 问答题.docx

1、微生物与生化药学 问答题微生物与生化药学 问答题第二章 基因工程制药1、 利用基因工程技术生产药物得优点？答：1、大量生产过去难以获得得生理活性蛋白与多肽，为临床使用提供有效得保障；2、 可以提供足够数量得生理活性物质， 以便对其生理、生化与结构进行深入得研究，从而扩大这些物质得应用范围；3、可以发现、挖掘更多得内源性生理活性物质；4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在得不足之处，可通过基因工程与蛋白质工程进行改造与去除；5、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。2、 基因工程药物制造得主要步骤？答：目得基因得克隆；构建 DNA 重组体；将 DNA 重组体转移入宿主菌构建工程菌；工程菌得发酵；

2、外源基因表达产物得分离纯化；产品得检验等。3、 化学合成目得基因得先决条件？答：较小得蛋白质或多肽得编码基因可以采用人工化学合成，其先决条件：已知目得基因得核苷酸序列或蛋白质得氨基酸序列，按相应得密码子推导出 DNA 得碱基序列。4、 人工合成基因得限制有哪些？答：1、不能合成太长得基因，5060 个碱基对；2、人工合成碱基对时，遗传密码得简并会为选择密码带来很大得困难：3、费用高。5、 基因工程宿主菌应满足那些要求？目前应用最广泛得宿主菌有哪些？答：1、容易获得较高浓度得细胞；2、能利用廉价易得得原料；3、不致病、不产生内毒素；4、发热量低， 需氧低，适当得发酵温度与细胞形态；5、容易进行代

3、谢调控；6、容易进行 DNA 重组技术操作；7、产物得产量、产率高，产物容易提取。宿主菌可分两大类：1、原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌；2、真核细胞：酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。6、 表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？答：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2、具多个限制酶切点，但每种切口最好只有 1 个，以便与外源基因连接。3、具有某些标记基因，便于进行筛选。4、所产生得 mRNA 必须有翻译得起始信号。5、具有很强得启动子。6、有很强得终止子。常用载体有：1、细菌细胞得质粒。2、噬菌体载体。7、 真核基因在大肠杆菌中得表达形式？答：有三种形式：(1)融合蛋白得表达形式

4、。（由一段短得原核多肽与真核蛋白结合在一起得蛋白质,称为融合蛋白、。 ）(2)非融合蛋白得表达形式。(3)分泌型表达形式。8、 表达用得酵母菌应满足哪些条件？答：表达用得酵母宿主菌应具备：1 体生长力强、2 菌体内蛋白酶要较弱、3 菌株性能稳定、4 分泌能力强。9、基因工程菌在发酵过程中对发酵罐有哪些要求？答：要提供菌体生长得最适宜条件；培养过程不得污染，保证纯菌培养； 培养及消毒过程中不得游离出异物；不能干扰细菌代谢活动。10、离子交换层析得原理？答：当离子交换剂处于水溶液中时，活性离子可以从活性基因上解离下来，在基质骨架与溶液间自由迁移，并可与溶液间得同性离子，因与活性基因得化学亲与力不同

5、而发生交换，即发生离子交换作用。11、疏水层析得基本原理？答：蛋白质表面多由亲水基团组成，也有一些疏水性较强得疏水区。 在高盐浓度时，蛋白质表面疏水部位得水化层被破坏，暴露出疏水部位，疏水作用增强，与固定相上得疏水基团产生疏水性作用而被吸附；盐浓度降低时蛋白质疏水作用减弱，目得蛋白质被逐步洗脱下来。12、亲与层析得基本原理？答：通过将具有亲与力得两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上，利用分子间亲与力得特异性与可逆性，对另一个分子进行分离纯化。（被固定在基质上得分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲与层析得固定相，称为亲与吸附剂。 ）13、凝胶过滤层析得优缺点？答：优点：设备简单、操作

6、方便、样品回收率高、实验重复性好、不改变样品生物学活性。缺点：分辨率较低，尤其就是相对分子质量相近得分子之间。第三章 细胞工程制药1、动物细胞得生理特点？答：1 细胞分裂周期长（动物细胞分裂所需时间一般为 1248h。 ） 。2 细胞生长需贴附于基质，有接触抑制现象。3 二倍体细胞寿命有限（异倍体细胞系寿命长） 。4 对生长环境要求敏感。5 培养基要求高。6 合成得蛋白质有修饰。2、动物细胞培养时加入血清得作用机制？答：提供基本营养物质； 提供激素与各种生长因子；提供贴附因子与伸展因子；对培养中得细胞起到某些保护作用；提供 PH缓冲物质，调节培养基 PH；影响培养系统中得某些物理特性如：剪切力

7、、黏度、渗透压与气体传递速度等。3、无血清培养基得优点？答：优点：可避免血清批次间得质量变动，提高细胞培养与实验结果得重复性。避免血清对细胞得毒性作用与血清源性污染； 避免血清组分对实验研究得影响；有利于体外培养细胞得分化；可提高产品得表达水平并使细胞产品易于纯化。（缺点：主要表现为细胞得适用范围窄，细胞在无血清培养基中易受某些机械因素与化学因素得影响，培养得保存与应用不如传统得合成培养基方便。 ）4、动物细胞大规模培养得方法有哪些？答：根据培养细胞得种类：原代细胞培养与传代细胞培养。根据培养基得不同：液体培养与固体培养。 根据生产实际：贴壁培养、悬浮培养与贴壁-悬浮培养（假悬浮培养） 。5、

8、动物细胞悬浮培养得优缺点？答：优点：适用得细胞较广；容易更换培养液； 容易采用灌流培养得方式使细胞达到高密度。缺点：操作比较麻烦； 培养条件不易均一；传质、传氧较差；不能有效监测细胞得生长；需要合适得贴附材料与足够得面积； 扩大培养比较困难，投资大。6、动物细胞贴壁培养得优缺点？答：优点：操作简单，培养得体积大、成本低；培养条件比较均一； 传质、传氧较好；传代时无需消化分散； 容易扩大培养规模。缺点：由于细胞体积较小，难采用灌流培养，细胞密度较低7、动物细胞包埋或微囊培养得优点？答：包埋在在体内得细胞可以获得保护，避免了剪切力得损害。可以获得较高得细胞密度，一般都在 107108 个/ml 以

9、上。可以使产品浓缩在微囊内，利于下游产物得纯化。可以采用多种生物反应器进行大规模培养。8、动物生物反应器得作用、类型及应满足哪些条件？答：应满足得条件：材质无毒；结构得传质、传热与混合性能；密封性好；参数能自动检测与调控；长期连续运转；内面光滑、无死角；拆装、清洁、维修与消毒；设备成本。动物生物反应器得作用：就是给动物细胞得生长代谢提供一个最优化得环境，从而使其在生长代谢过程中产生出最大量、最优质得所需产物。反应器类型：搅拌罐式反应器、气升式生物反应器、中空纤维式生物反应器、透析袋或膜式生物反应器与固定床或流化床式生物反应器。第四章抗体工程制药1、免疫导向疗法为什么没有成功？从哪些方面可以对单

10、克隆抗体进行改造？答： 阻碍： A 单克隆抗体得均就是鼠源性抗体， 应用于人体可内可产生人鼠源抗体， 加速了排斥反应， 在人体内得半衰期只有 5-6h，难以维持有效药物得作用靶组织时间。B完整得抗体份子 Ig 分子质量过大，难以穿透实体肿瘤组织，达不到有效得治疗浓度。改造：A降低单克隆抗体得免疫原性。 B降低单克隆抗体得相对分子质量（1）人-鼠嵌合抗体：由人抗体得恒定区与鼠源单抗得可变区融合得到。（2）、改型抗体：把鼠抗体得 CDR 序列移植到人抗体得可变区内，所得到得抗体（3）小分子抗体小分子抗体包括：Fab、 Fv 或 ScFv 、 单域抗体、 最小识别单位。这些部位都可以改造。2、单克隆

11、抗体得制备流程及方法。流程：将有用抗原免疫过得淋巴细胞与骨髓瘤用 PEG 进行杂交融合。把融合得细胞在 HAT 培养基上选择出来。将选择后得整合细胞分散，培养成杂交瘤细胞。使能产生单克隆抗体得杂交瘤细胞克隆化。杂交瘤细胞抗体得性状得鉴定。单克隆抗体得大量制备，一就是在培养液中大更就是繁殖，二就是注入纯系小鼠腹腔中大量繁殖。单克隆抗体得纯化。制备方法：体内诱生法与体外法。3、动物体内诱生法制备单克隆抗体得优缺点答：优点：简单，比较经济，所得单克隆抗体量较多且效价较高，可有效地保存杂交瘤细胞株与分分离已污染得杂菌得杂交瘤细胞株。缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠得多种杂蛋白，给纯化带来难度。4、鼠源性单

12、克隆抗体改造后得抗体类型及各自得特点？答：人-鼠嵌合抗体：保持鼠源性单克隆抗体得抗原结合特异性，但对人免疫原性大幅下降了。改型抗体：鼠源性单克隆抗体得互补决定区（ CDR 区）序列替换人得 Ig 分子中得 CDR 序列。基本消除免疫原性。小分子抗体：Fa b 将 I得重链在铰链区得 C 端裂解，获得两个完全相同得抗原结合片段。才铰链区与二硫键相连。有完整得生双价抗体活性，相对分子质量减少为三分之一，排斥反应也降低，人体内很稳定。Fv 含有 L 链与 Fd 链一半得 N 端可变区。有完整得抗体相似得结能力，相对分子质量减少为六分之一。单链抗体 scFv：单链易改造；体内半衰期短，免疫原性低；稳定

13、性低，重轻链之间得分子间作用力弱；功能单一，只能与一种抗原特异性结合；亲与力低，稳定性差，体内清除过快。域抗体：只由一个 CDR 构成。5多功能抗体得优点。答：具有高亲与力性能，由于具有多个结合价，可同时与细胞膜上相邻得两个或多个靶抗原结合，与肿瘤细胞表面抗原得多价结合有利于肿瘤得影像分析及治疗。6、有应用价值得多功能抗体应具备有哪些特征。能高选择性，高亲与性地同靶抗原或肿瘤相关抗原结合。在血循环中，与效应细胞或细胞毒触发分子有较低亲与力。应为人源化抗体，最大限度地减少人抗鼠蛋白得排斥反应，使得复给药不受限制。分子应大小适中，既能渗透到肿瘤组织内部，又能保证适当得滞留时间。7、抗体导向酶-前药

14、疗法中酶与前药有哪些要求？答： （1）对酶得要求：活化酶最好来自非哺乳动物，而人体内不存在相应得类似物，以保证高度得特异性。酶还能通过化学交联与单抗结合，在较长得一段时间内保持稳定性与活性。（2）对前药得要求：前药本身应无活性或活性很低，只能被相应得酶活化为高度扩散性得小分子，以实现在肿瘤组织内得广泛分布与杀伤肿瘤细胞。而且前药还 应具有极短得生物半衰期，避免重新进入循环产生非特异性毒性。第六章 酶制药工程1、用微生物生产酶制剂得优点：答： （1）微生物种类多，品种齐全（2）微生物生长繁殖快，生长周期短，产量高（3）培养方法简单，原料来源丰富，价格低廉，经济效益高，并可以通过控制培养条件来提高

15、酶得产量（4）微生物具有较强得适应性与应变能力2、优良得产酶菌株应满足哪些要求：答：1 繁殖快，产酶量高，酶得性质应符合使用要求，最好就是产生胞外酶得菌，2 不就是致病菌，在系统发育上与病原体无关，也不产生有毒物质，3 产酶性能稳定，不易变异退化，不易感染噬菌体，4 能利用廉价得原料，发酵周期短，易于培养3、固定化酶得优点：答：1 可以较长时间内多次使用，酶得稳定性高。2 反应后，酶与底物与产物易于分开，易于纯化，产品质量高。3 反应条件易于控制。4 酶得利用率高。5 比水溶性酶更适合于多酶反应。4、物理吸附法制备固定化酶得优缺点：答：优点：操作简单，可选用不同电荷与不同形状得载体，固定化过程与纯化过程同时实现，酶失活后载体仍可以再生。缺点：最适吸附酶量五规律可循，对不同得载体与不同酶得吸附条件不同，吸附量与酶活力不一定成平行关系，同时载体与载体之间结合力不强，酶易于脱落，导致酶活力下降并污染产物。