硅胶柱层析.docx

1、硅胶柱层析硅胶柱层析硅胶柱层析原理 硅胶层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离， 一般情 况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附，整个层析过程 即是吸附、解吸、再吸附、再解吸过程。硅胶柱层析流动相 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统；极性较大的用甲醇：氯仿系统；极性大的用 甲醇：水：正丁醇：醋酸系统；拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸硅胶柱层析惯用方法1.称量。 200-300 目硅胶，称 30-70 倍于上样量；如果极难分，也可以用 100 倍 量的硅胶 H。干硅胶的视密度在 0.4 左右，所以要称 40g 硅胶，用烧杯量 100ml 也可 以。2.搅成匀浆。加

2、入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油 醚 / 乙酸乙酯 /丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿 /醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯 / 丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1% 的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。3.装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约 1/3 体积石油醚（氯仿），装 上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在 蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。4.压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加

3、压，直至流速恒定。 柱床约被压缩至 9/10 体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度 提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。5.上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一 团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表 面。6.过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不 好，推荐用梯度洗脱。收集的例子： 10mg 上样量， 1g 硅胶 H， 0.5ml 收一馏分； 1- 2g 上样量， 50g 硅胶（ 200-300 目）， 20-50ml 收一馏分。7.检测。要更多地使用专用喷显剂，如果

4、仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的 灵敏度一般比喷显剂底 1-2 个数量级。8.送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体， 可过一小凝胶柱， 作为送谱前的最后纯化手段。 可除去氢谱 1.5ppm 左右所谓的 “硅胶 峰硅胶柱清洗方法 正相的我们一般都只使用一次，反相的才反复使用。 在做实验时我们用硅胶装的玻璃柱在使用时一般都是一次性的， 但如应用至规模化生产时这 样的操作不免很浪费，可以想像，一根装有接近 200kg 硅胶填料的柱子在使用一次后就扔 掉的壮观景象。当然，重复使用的情况一般在物料纯度较高，色素很少的情况下才能实现。 我们曾经尝试过装好的柱子 （180kg

5、 填料）可以重复使用近 12 次，而且在使用的过程中，第 一次的效果并不是最好的， 从第二次开始到后来层析的效果比较稳定， 效果也不错， 然后是 有一个缓慢下降的趋势，到最后不能使用却是突然性的。如果物料纯度确实太差，那也没办法，只能将用过的硅胶拿去再生后重复使用了。硅胶在使用过程中因吸附了介质中的水蒸汽或其他有机物质， 吸附能力下降， 可通过再生后 重复使用。一、硅胶吸附水蒸汽后的再生 硅胶吸附水份后， 可通过热脱附方式将水份除去，加热的方式有多种，如电热炉、烟道余 热加热及热风干燥等。脱附加热的温度控制在 120-180 为宜，对于蓝胶指示剂、变色硅胶、 DL 型蓝色硅胶则 控制在 100

6、-120 为宜。各种工业硅胶再生时的最高温度不应超过以下限度：粗孔硅胶不得高于 600 ；细孔硅胶不得高于 200 ； 蓝胶指标剂（或变色硅胶）不得高于 120 ；硅铝胶不得高于 350 。再生后的硅胶，其水份一般控制在 2% 以下即可重新投入使用。二、硅胶吸附有机杂质后的再生 焙烧法对于粗孔硅胶， 可放在焙烧炉内逐渐升温至 500-600 ，约经 6 8 小时至胶粒呈白色或 黄褐色即可。对细孔硅胶，焙烧温度不能超过 200 。 漂洗法 将硅胶在饱和水蒸汽中吸附达到饱和后放热水中浸泡漂洗，并可结合使用洗涤剂以除去 废油或其它有机杂质，再经净水洗涤后烘干脱水。 溶剂冲洗法 根据硅胶吸附有机物种类

7、，选用适当的溶剂将吸附在硅胶内的有机物溶出，然后将硅胶 加热以脱除溶剂。三、硅胶再生应注意的问题 烘干再生时应注意掌握逐渐提高温度，以免剧烈干燥引起胶粒炸裂，降低回收率。 对硅胶焙烧再生时，温度过高会引起硅胶孔结构的变化而明显降低其吸附效果，影响 使用价值。 对于蓝胶指示剂或变色硅胶， 脱附再生的温度应不超过 120， 否则会因显色剂 逐步氧化而失去显色作用。 经再生后的硅胶一般应过筛除去微细颗粒，以使颗粒均匀 正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns此色谱柱填充的是改性硅胶材料。

8、向柱内导入碱性溶剂（ pH7.0）或酸性溶剂（ pH2.0）会导致柱子损坏。 在使用这个柱子之前， 你要充分地熟悉这本手册讲 述的内容。未正确地使用不能享受保修待遇。1 简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。 硅胶形态的柱子用 于正相（非水）条件。反相（C8，C18，ODS，RP-8和 RP-18）通常用于反相条件（水相）。 极性胶联型（ APS，diol ，CN和 NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。 建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下， 这是因为柱子在特定的条 件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。也不建议 将硅胶柱用在反相

9、条件下或者将方向柱用在正相条件下， 这是因为这种过程会发 生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。2 色谱柱老化在开始分析工作以前， 柱子必须经过正确的老化。 一个没有正确老化的柱子可能 会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。A在反相条件下老化 要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗， 然后你选用的洗脱液进行平衡。 在发货以前， 每根柱子都已经测试过并进行了老化。 因此没有必要在第一次使用 时用水冲洗）。如果流动相中使用了添加物 （例如缓冲液或离子对试剂） ，建议使用正确比例的 但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。 缓冲冲洗应当首先以低流速进行， 最后 再使用正

10、常流速。B在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。 柱子的干燥 （激活）或润湿（失活） 可能是需要的。 使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。 干燥柱子可以使用无 水的二氯甲烷。C对于极性键合柱的特殊说明 由于这些柱子可以用于反相或者正相条件， 在进行老化以前， 一定要首先检查你 要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。 如果这些溶 剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。3洗脱液注意第节和第 2 节。一定不要使用 pH低于 2 或者高于 7 的缓冲液，这是由于它 们会改变固定相的性质。极性键合柱最好使用在 3到5 之间。在使用以前，洗 脱液要进行

11、脱气，以及使用 0.5 微米的滤膜过滤，以免发生检测和泵送问题。一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长，否则你的柱子会堵 塞，柱压会升高到无法接受的水平。4 流量和压力 注意：最高压力：不锈钢柱： 4500psi ；玻璃柱： 3000psi 增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。如果你想更换柱子， ，要降低流量至 0，等待洗脱液完全流出柱子为止 （2 分钟）。 拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。使用保护柱（见第 6 节）会防止污染物沉积在分析柱上。5样品准备 保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。你必须防

12、止将疏水性 / 与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱， 不管是来自流动相还是样品。 特别地， 要 禁止导入颗粒杂质。 这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能 去除。6保护柱一定要使用保护柱， 因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选 择性。对于 ChromSep 柱我们建议使用正确型号的 ChromSep 保护柱。这个柱子 的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。 当柱压增高的或者观察到柱效降低 的时候就需要更换保护柱了。对于常用不锈钢柱，我们建议使用相同型号的 Chromguard High Efficiency （高效）柱 （10X3.0mm） 或 High C

13、apacity （高容 量）柱 （50X3.0mm）。7进样量和浓度柱子的最大载样量取决于：柱子的型号， 使用的条件和样品的类型。 很难给出一个一般的指示。注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。8温度HPLC柱最好在柱温箱中使用。重复性取决于温度控制。最佳的温度与特定的应 用有关。温度影响洗脱液流动的线速度。在使用 ChromSep玻璃柱的时候，一定 要调节流速使压力保持在 3000psi 以下。9贮存一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱贮存溶剂应当含有至少 20%的有机溶剂，以防止有细菌的生长。10 柱效损失的可能原因1 额外的峰展宽。当使用小直径或者

14、长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能 比较明显。 要保证管路的长度和内径都保持最小。 检查进样体积和检测器检查池 体积是否适用于柱体积。2 洗脱的平衡时间不够。3 不正确柱温。4 不正确的修正浓度。5 床压缩。使用了过大的洗脱流速。将柱子反向，使用低流速。11.柱效丧失和 /或高背压1颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上（它们都会使背压增高）。如果柱压增高 了，将柱子与进样器断开， 运行泵， 以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污 染（样品、洗脱液和系统）。倒转柱子，以反向的流动来冲洗柱子。如果这样不 能解决问题，更换进口过滤器或者筛板。2微生物在洗脱液中生长。倒转柱子，尝试以反向的流动来将污染物冲洗

15、出柱 子。更换进口过滤器或者筛板。3有蛋白质脂肪，油脂污染或者极性化合物等污染。再生柱子（见第 12 节）12. 再生1再生反相色谱柱a首先倒转柱子。b 以大约最佳流速的 40%的流速冲洗柱子大约 45-60 分钟，使用的溶剂的顺 序要按照水甲醇异丙醇二氯甲烷异丙醇甲醇水进行。c 柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡 注意：在使用另外的淋洗方法的时候， 一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液， 保 证其后的洗脱液可以混溶。2再生硅胶柱 a首先倒转柱子。b以大约最佳流速的 40%的流速冲洗柱子大约 45-60 分钟，使用的溶剂的顺序 要按照异辛烷（或己烷）乙酸乙酯干燥的异辛烷（或己烷）进行。c柱子

16、转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。3. 再生极性键合柱 取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件。 注意：绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱， 因为可能与固定相发生反应。 四氢 呋喃作为替代可以使用。作者: ruitao 发布日期 : 2008-11-13我用的普通硅胶的柱料 , 不是液相上的反相柱 , 感觉吸附的厉害 ,有颜色. 请问怎 么再生啊硅胶柱层析惯用的方法：匀浆法。1。称量。200-300 目硅胶， 称 30-70倍于上样量； 如果极难分， 也可以用 100 倍量的硅胶 H。 干硅胶的视密度在 0.4左右，所以要称 40g硅胶，用烧杯量 100ml 也可以。2

17、。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚 /乙酸乙酯/丙酮体系， 就用石油醚拌； 如果洗脱剂是氯仿 /醇体系， 就用氯仿拌。 如果不能搅成匀浆， 说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯 /丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预 先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去 1% 的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。3。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约 1/3 体积石油醚（氯仿） ，装上蓄液球，打开柱下活塞， 将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油 醚（氯仿）将其冲入柱中。4。压实。沉降完成后，加入更多的石油

18、醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约 被压缩至 9/10 体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且 可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉 塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐 用梯度洗脱。收集的例子： 10mg上样量， 1g硅胶 H， 0.5ml收一馏分； 1-2g上样量， 50g 硅胶（ 200-300 目）， 20-50ml 收一馏分。7。检测。要更多地使用专用喷显

19、剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一 般比喷显剂底 1-2 个数量级。8。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小 凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱 1.5ppm 左右所谓的 “硅胶 ”峰。1.先根据 TLC 方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质 Rf 值之差最大化2.将柱子必须装平整、均匀3.考虑有限柱填料的吸附量4.可考虑用剃度法分开并洗脱关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是 样品层比较薄） ，这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二 厘米，

20、那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只 有 0.5 厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多 的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说， 不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费） 。现在见到的柱子径高比一般在 1：510，书中写硅胶量是样品量的 3040 倍，具体的选 择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分 rf 在 0.2 0.4，杂质相差 0.1 以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如 200 毫克的样品，用 2cm20cm 的柱子 ）；如果相差不到 0.1，就要加大柱子，我

21、觉得可以增加柱子的直径，比如用 3cm 的，也可以减小淋洗剂的极性等等。真空液相层析即 vacuum liquid chromatography（VLC）, 即用真空代替压力进行层析， 具体方法 可见 Synthesis,2001,No,16,2431-,and J chem edu,1997,10,1222- 干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入 1-3 倍的 粗硅胶，晾干或旋干， 干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。 装好的柱子上留一段溶剂， 把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫

22、柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相 的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望 能有所帮助。柱子可以分为：加压，常压，减压。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所 以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分 离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过 硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结） ，以及有些比较易分解的东西可能得 不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长） 。以前曾经大量的过 减压柱，对

23、它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念 头了。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力 的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行） 。特别是在容易分解 的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅 胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。也 是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定

24、要用可密封的，遵循 schlenk 操作。至于是 加压、常压、减压，随需而定。因为是 schlenk 操作，所以点板是个问题，如果样品是显 色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。如果样品无色，只好准备几十 个 schlenk 瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。像我以 前过一根无水无氧柱，需要六个 schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。 无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基裸露在外， 很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中 性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。 听说有个

25、方法，就是用石英做柱子，然后用 HF254 做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一 照就知道产品在哪里了，没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详参详。关于湿法、干法上样。湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好 ，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一 般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较 好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶 那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱

26、（比如 DMF,DMSO 等，会随着溶剂一起走， 显色是一个很长的脱尾） ，这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是 1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样 品没有吸附在硅胶上） 。溶剂的选择。当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。文献中有写用 正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因 为极性很小，有时还是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别 让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸 附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在

27、柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些 。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后 继处理，比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。 由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛） ，我们这里是用 10 升或 25 升的塑 料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色 的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过 原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。这里要注意的是

28、，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和 乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋 洗时比较合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为 在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和 你下面要过的样品有反应那就惨了。关于操作问题。1装柱。 柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。 干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧 密（太密了淋洗剂走的太慢） ，一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来） 。书中写 的都是不能见到气泡，我觉得在

29、大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就 全下来了。当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是 开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！2加样。 用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再 加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。 加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（ 24cm 就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。3淋洗剂的选择。 感觉上要使所需点在 rf0.2 0.3 左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过 柱子就

30、用那种极性，如果 rf 在 0.6，即使相差 0.2 也不容易在柱子上分开，因为柱子是一 个多次爬板的状态，可以通过公式的比较： 0.6/0.8 一次的分离度，肯定不如（ 0.2/0.3 ）的三次方或四次方大。4样品的收集。 用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比 较强的话，就不容易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可以 采用氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就 收到了三个样品， wuwu 。如果都用小试管那工作量又太大。5最后的处理。 柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂

31、质也会累积到产品中，所以如果想送 分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没 了，必要时进行重结晶。实验室常用的正向柱分离有加压、 常压和减压等， 我原是做天然产物全合成的， 也做过少量 天然产物分离工作。还常用到反向柱。正向柱分离1.TLC1）加压、常压柱主点 Rf 0.5 左右，相近的组份要能分开。2）减压柱主点 Rf 0.1 左右，相近的组份要能分开，或次组份在原点。2.硅胶或氧化铝等1）加压、常压柱60 到 200 目2）减压柱300 目以上 大空树脂挺好，但自己用得少。硅藻土很多时侯也很好。3.柱径 好分、量大，柱径可大些；难分、量小，柱径可小些。4

32、.柱长 与柱径相似，好分、量大，柱长可短些。5.制样 减压一般是干法拌样；加压、常压可干法拌样，也可湿法备样。6.洗脱液 老板科研经费多，用加压、常压耗溶剂太多；要想给老板省钱，给自己省时间，就用减压。7.接液 主点未出，多接；主点快出来及快出完，少接。8.收率 对同一样品且同量减压一般收率低；加压、常压一般收率高。9.备柱 无论减压、加压、常压；无论干法、湿法备柱。填料要想法压实，且备柱或过柱时均不可有 气泡、断层、干柱（减压除外。 ），否则一切从头开始。过硅胶柱的经验一、装柱装柱子（添硅胶） 时，常用的有两种方法： 即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法，硅胶（ 称为固定相更为广义 ）的上表面一定要 平整