最新版香菇多糖抗氧化增效剂的研究毕业设计.docx

1、最新版香菇多糖抗氧化增效剂的研究毕业设计青岛农业大学毕 业 论 文（设计） 2014年 6 月 6 日目录摘要 IAbstract II1引 言 11.1 立项背景及依据 11.2 研究现状 11.2.2抗氧化协同作用研究现状 31.3 主要研究内容 42材料与方法 42.1 材料 42.1.1 原料 42.1.2 试剂 42.1.3 仪器 52.2 方法 52.2.1 多糖、多肽、皂苷等活性物质的提取及制备 52.2.2 四种提取物含量测定 62.2.3 不同提取物抗氧化实验 72.2.4提取物与香菇多糖配比增效实验 72.2.5 最佳搭配物质与香菇多糖的抗氧化最佳配比实验 83结果与讨论

2、83.1四种提取物抗氧化能力的测定 83.1.1 四种提取物还原能力测定 83.1.2 四种提取物清除DPPH能力测定 93.1.3四种提取物清除羟自由基活性结果 93.2 三种提取物对香菇多糖的抗氧化增效实验 113.2.1三种提取物与香菇多糖复配物还原能力测定结果 113.2.2 三种提取物与香菇多糖复配物DPPH清除能力实验 113.2.3三种提取物与香菇多糖复配物OH清除能力实验 123.3 最佳增效剂与香菇多糖抗氧化配比实验 133.3.1不同配比复合物还原能力的测定 133.3.2不同配比复合物清除DPPH能力测定 143.3.3不同配比复合物清除羟自由基能力测定 144结论 15

3、致谢 16参考文献 17 香菇多糖抗氧化增效剂的研究食品质量与安全专业 任嘉玮 指导教师 王凤舞摘要：本文研究了大豆多肽、大枣多糖、三七皂苷对香菇多糖抗氧化能力的协同增效作用。采用复合酶法制备香菇多糖，微波辅助提取大枣多糖、碱溶酸沉协同酶解法制备大豆多肽、醇提法制备三七皂苷。将大豆多肽、大枣多糖、三七皂苷与香菇多糖分别进行体外还原能力，清除OH和DPPH能力的测定。再按照一定的比例分别与香菇多糖复配后进行上述三种活性测定，得到最佳的协同抗氧化增效剂。结果表明，还原能力：三七皂苷香菇多糖大枣多糖大豆多肽，DPPH清除能力：香菇多糖三七皂苷大枣多糖大豆多肽，OH清除能力：三七皂苷香菇多糖大枣多糖大

4、豆多肽。抗氧化协同实验结果表明：大枣多糖和三七皂苷对香菇多糖有协同增效作用，其中大枣多糖的增效作用最强，基本上能提高10%左右。在香菇多糖和大枣多糖的质量比为7: 3时协同抗氧化能力最强。综合分析，大枣多糖为三种物质中香菇多糖抗氧化能力的最佳增效剂。关键词：香菇多糖；大枣多糖；大豆多肽；三七皂苷；抗氧化；协同增效Effects of Peptides, JDP and PNS on Antioxidant Activity of LentinanStudent majoring in Food Quality and Safety REN Jiawei Tutor WANG Fengwu Ab

5、stract:To know the synergistic effect of jujuba polysaccharide, soybean peptides and panax notoginseng saponins on antioxidant activity of Lentinan. Four antionxidant components were extracted to test the antioxidant activity (the reducing power, the ability of scavenging DPPH and OH) and compared t

6、hese abilities of the mixture which are mixed with Lentinan, respectively. Then choose the best antioxidant mixture and adjust the proportion of them in antioxidant activity experiment. And Lentinan (Len) was obtained by composite enzymatic method, Jujuba polysaccharide (JDP) was extracted by the mi

7、crowave method, soybean peptides was made by acid precipitation and the composite enzymatic method, panax notoginseng saponins (PNS) was extracted by alcohol precipitation method. The results demonstrated that the reducing power: PNSLenJDPpeptides; the ability of scavenging DPPH: LenPNSJDPpeptides;

8、the ability of scavenging OH: PNS Len JDP peptides. The synergistic effect experiments demonstrated that JDP and PNS both have good synergistic effect, but JDP uncommonly increased the Lens antioxidant activity, basically increased by 10%. Therefore, JDP has the best synergistic effect of antioxidan

9、t activity in the three extracts. The best antioxidant ratio of PNS to JDP is 7: 3.Key words:Lentinan(Len); Jujuba polysaccharide(JDP); soybean peptides; panax notoginseng saponins(PNS); antioxidant activity; synergistic effect 1引 言1.1 立项背景及依据 多糖具有广泛的药理作用，如作为免疫调节剂，促进细胞因子生成，活化补体；抗肿瘤、抗病毒、抗感染、抗消化性溃疡、抗氧

10、化、防衰老、降血糖血脂等，而且毒性相对较低。香菇（Lentinus edodes）是侧耳科（Pleara taco）的担子菌，含有多种有效药用成分，其中香菇多糖（Lentinan，LNT）是目前研究很热门的话题。研究表明，香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫、抗氧化和刺激干扰素形成等功能并且对正常细胞不产生毒副作用1。大豆多肽是大豆蛋白经酶促水解后制得的一定分子量范围的多肽混合物，以 36 个氨基酸组成的小分子肽为主，还含有少量大分子肽、游离氨基酸等成分2。不仅能为人体提供生长发育所需的氨基酸、能量等，还具有防病治病和提高人体免疫力的功效。大枣为鼠李科植物的成熟果实，可药食两用。大枣富含糖类、

11、纤维素、维生素、氨基酸、蛋白质、矿物质等营养成分，特别是含有多糖、芦丁、环磷酸腺苷(c-AMP)等活性成分，这些成分使红枣具有多种生物保健功能。大枣中的多糖成分具有多种生物活性，能提高机体的免疫能力，且对正常细胞无毒副作用，是理想的免疫增强剂3。三七（Panax notoginseng）为五加科人参属植物， 以干燥的根入药，是我国特有的名贵中药材，也是我国最早的药食同源植物之一。三七总皂苷（Panax notoginseng saponins，PNS）是三七的活性成分。据现代化学和药理学研究发现在抗氧化损伤、抗衰老、提高机体免疫力等方面的药理作用显著优于人参总皂苷，对脑血管缺血缺氧损伤、脑缺血

12、再灌注损伤有保护作用，对脑神经细胞凋亡有抑制作用4。 衡量某一物质的抗氧化效果，采用体外抗氧化体系时，由于抗氧化作用机制不同，有可能产生的结果也不一致，所以一般要求至少采用两种方法来衡量样品的抗氧化活性。本实验以香菇多糖为主要研究对象，采用3种抗氧化活性检测方法（还原能力测定，清除OH和DPPH能力测定）研究大豆多肽、大枣多糖及三七皂苷对香菇多糖抗氧化的协同作用，以期为食品资源的开发利用提供更多的理论依据。1.2 研究现状 1.2.1 多糖、皂苷和多肽抗氧化性质研究现状1.2.1.1抗氧化多糖多糖的抗氧化研究较多，主要集中在真菌及有功效的植物中。黄磊5测定三种不同多糖组分在邻苯三酚自氧化体系和

13、Fenton体系中清除自由基的能力，得到抗氧化能力由强到弱依次为Len-40Len-60Len-80。张全斌等6采用体外实验研究海带褐藻多糖硫酸酯对超氧阴离子自由基、羟自由基、DPPH的清除作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血和大鼠肝匀浆脂质过氧化的保护作用。结果表明海带褐藻多糖硫酸酯对超氧阴离子自由基具有良好的清除作用，IC50为20.3g/mL。其对羟自由基的清除作用较弱，对DPPH的作用很弱。滕利荣等7研究了热水法及复合酶法提取百合多糖(LBP)的最佳条件，发现复合酶法提取的多糖在体外的抗氧化活性均显著高于热水法提取的多糖，对超氧阴离子及羟自由基有抑制作用。冯义莉等8对香菇发酵液中多糖

14、成分进行研究，得到其抗氧化活性。徐桂兰等9提取香菇和鸡腿菇中的多糖，测定多糖抗食用油脂的氧化作用。利用Fenton反应检测其对羟自由基的清除作用，对超氧阴离子自由基的清除作用以及在模拟胃液条件下清除NO2-的作用。结果表明：两种多糖提取物都具有体外抗氧化性能，香菇多糖提取物的抗活性氧自由基能力和清除NO2-的能力优于鸡腿菇多糖提取物。亓树艳等10通过设计正交试验优化水浸、超声和微波等方法提取大枣多糖的工艺，并通过体外抗氧化研究得到在多糖提取率以及抗氧化作用效率。其中微波法提取大枣多糖效果最佳。0.0750.135 mg/mL大枣多糖对羟自由基最大清除率为48.5（微波法）。1.2.1.2抗氧化

15、皂苷 周琳，曾英等11通过正交实验得到提取三七总皂苷的最佳方法为超声复合酶法。提取液中总皂苷含量为10.33%，提取物得率为35.17%。王步江等12以苦瓜皂苷对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除率作为考查指标，确定了苦瓜皂苷的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度70%，料液比l:15，温度55，提取时间2.5h。0.4mg/mL苦瓜皂苷对超氧阴离子自由基的清除率达到92.5%，对羟基自由基(OH)的清除率达到78.9%。李鹏，李绍平13等以三七总皂苷、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1含量为指标，得到以甲醇为溶剂，药材粒径为0.30.45mm，提取温度150，提取压力6.895MPa，提取15min，提取1次时，能高效提取三七皂苷类成分。1.2.1.3抗氧化多肽 植物抗氧化肽的研究很多，主要集中在豆类、玉米等。大豆蛋白是目前研究地最多的植物抗氧化肽原料。刘秀红等14以大豆为原料，利用木瓜蛋白酶进行水解，制备了大豆抗氧化肽。吴永沛等15也以大豆为原料，采用固态发酵法获得活性较强的抗氧化肽。包怡红等16以山核桃为原料，采用混合的风味蛋白酶，制备出具有较强清除自由基能力的山核桃肽。程云辉等17以麦胚为原料，通过碱性蛋白酶水解，发现其蛋白水解液具有很强的超氧阴离子自由基清除能力。刘宇等18以鹰嘴豆为原料，利用碱性蛋白酶水解，制得了