Thermo U3000 HPLC操作规程.docx

1、Thermo U3000 HPLC操作规程Thermo U-3000 HPLC操作规程聊城市药品检验所 文件编号:ZY-Y?Z-27 标准操作规程 第1版 Ultimate 3000 HPLC 生效日期:2013年01月16日 一、 开机: 1、打开电源，打开仪器接线板电源开关; 2、打开电脑显示器电源，打开电脑主机电源(POWER)，启动电脑; 3、依次打开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源; 4、选择开始,程序,Chromeleon,Sever Monitor或双击屏幕右下角快捷图标,出现对话界面后点击,tart启动,等Dongle序号出来以后(表示Sever Monitor程序运行正常

2、)可以点击Close来关闭界面。 5、打开“开始”/“程序”/“Chromel”/“Chromeleon”或双击在桌面上的Chromeleon图标(工作站主程序)打开 HPLC软件系统主界面。 二、系统设置 1、点击快捷方式见“默认面板”进入面板的设置。 2、进入泵的面板: 2.1点击“连接”;在流动相A、B、C、D选择将要做的(比如要用A相，就把它设置成100%) 2.2将仪器的“Purge”阀拧开，点击软件上的“purge”进行排气泡(若没进行更换流动相，可以不用排气泡)，大约4分钟后;再次点击“purge”停止排气泡，(purge设置3.00ml/min)将仪器的“Purge”阀拧紧即可

3、; 2.3将流速设置1.00ml/min(根据实际需要自己设置相应的流速)，将压力的下限值设在8个左右，上限值设置280左右;打开泵的流速。 3、进入自动进样器的面板 3.1点击连接，在“温箱控制”设置实际所需要的稳定值 3.2若注射器内有气泡，点击“灌注针”进行气泡的排除;若针需要清洗，点击“清洗针” 3.3若要进行满环进样(20uL)，点击“更多选项”，在“进样模式”选择“FullLoop”否则选择“Partial”; 4、进入紫外检测器的面板 4.1点击“连接” 4.2点击“紫外灯”将氘灯打开(若需要可见光，请点“可见灯”) 4.3在“波长”栏设置实际所需要的波长 5、采集波长 在灯打开

4、3分钟后，点击快捷方式键蓝色的圆点，在弹出的窗口选择紫外“UV”，点击确定，即开始采集基线。当基线走平稳后就可以进行进样分析。 三、方法设置和数据分析 1、样品方法的编辑与运行(请参照软件说明书) 1.1点击“文件”;“新建”弹出的窗口依次建立程序文件，方法文件，样品表; 1.2在仪器平衡好后(开机至少半小时)，点击蓝色的圆点停止采集基线;再点击快捷键“开始/停止批处理”，在弹出的窗口添加你所需要做的样品，点“开始”即开始进样。 2、数据的分析(请参照软件说明书) 2.1数据的选择:在资源管理中(在快捷方式键点击“浏览器”图标进入)，选择你所要分析的样品。 2.2双击已进样完成的样品，点击“Q

5、NT-编辑处理”进入数据处理界面。依次在“综合”“检测”“峰表”“数量表”栏进行相应的设置。设置完成后点保存。 3、数据报告的编辑与数据备份: 3.1选择报告模板: 在数据查看窗口中，打开“编辑”菜单，选择“打印机布局”即进入报告界面，根据 结果需要，选择合适的报告模板，比如选择“峰分析报告”;常用模板如下:(“Intergration”单一样品的标准报告”;“Calibration(Curr.P)”单标准校正曲线报告;“Peak Analysis”峰分析报告;“Calibration(Batch)”混标的校正曲线报告;“Summary” 数据统计分析报告 ) 3.2报告模板的编辑: 在报告界

6、面下，打开“编辑”菜单，选择“布局模式”打开报告布局编辑功能; 3.2.1标题及方法信息:双击报告标题或方法信息部分对内容进行更改或替换(双击后会出现可更换内容的对话框，根据对话框中信息选择需要替换或更改的信息)。 13.2.2报告结果内容:双击结果部分标题对相关信息进行更改或替换;如果需要增加则在表下部的空白区右键，根据需要选择“Insert”插入表格或信息;在双击出现的窗口第一行中可能进行数学组合(，、,、?)。 3.2.3谱图:双击谱图，在弹出的窗口中对相关信息及内容项进行修改和编辑;“叠加” 为谱图的叠加，当选择后点“增加”进行谱图的增加，选择过程注意检测通道的选择”; 3.3数据的备

7、份与输出: 3.3.1数据的备份:在资源管理器中选择需要备份的文件源，打开“文件”菜单，选择“备份”，在弹出窗口中选择数据保存的目标位置，点“开始”开始数据备份，最后点“完成”完成。 3.3.2数据的输出:变色龙软件提供数据文件以“PDF、ASCII、EXECL、TXT、CMB”等文件形式输出，以满足不同的需要。选择相就的数据文件(样品)，打开“文件”菜单，选择“批次报告”项，在弹出窗口中选择报告方法，去除“打印输出”标记，点击“Export”，在弹出窗口中选择文件所需的文件类型及所需输出的报告类型后下一步，确定输出文件保存位置后“OK”，完成。 3.3.3数据的恢复:在备份文件的文件夹中双击

8、备份文件在弹出窗口中选择恢复文件的目录后按“开始”进行恢复。在弹出窗口中同法操作即可。 四、关机及注意事项 1 关机: 1.1冲洗并保存色谱柱及系统。 1.2关闭泵流速，检测器氘灯，断开连接，关闭工作站。 1.3关闭检测器、柱温箱、自动进样器、泵的电源。 1.4关闭计算机。关闭UPS电源。 2 注意事项: 2.1溶剂泵的使用注意事项: 2.1.1使用时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转会磨损柱塞、缸体和密封环，最终产生漏夜。 2.1.2防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其他任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体颗粒。流动相过滤，可采用滤膜

9、(0.2um或0.45um)等滤过。 2.1.3输液泵的工作压力不能超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏夜。 2.1.4流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量的气泡， 泵就无法正常工作。 2.1.5溶剂泵长期不用时，用甲醇以1.0ml/min冲洗各个通道。泵的清洗液要勤换。每次开启泵之前要排除管道中是气泡。 2.1.6流动相由无机盐溶液转换有机溶剂前要用去离子水清洗管路。转换不同流动相时注意两者是否容易混合或者发生反应。长期不用或运输前要到空清洗液瓶。 2.2色谱柱的使用注意事项: 2.2.1避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使

10、色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，进样阀的转动不能过缓。 2.2.2一般说来色谱柱不能反冲，只有生产厂家指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。 2.2.3选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析之前被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被破坏。 2.2.4避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是有相似固定相的短柱

11、，也有用浸透限制固定相短柱。保护柱可以经常更换。 2.2.5保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲液留在柱内静置过夜或更长时间。 2.3检测器的使用注意事项: 2.3.1长时间检测池中无流动相流动时，关闭检测器氘灯。 2.3.2不要将物品或其他仪器档住检测器的散热孔。 2.3.3检测器安装的位置应没有震动，温度变化不大，避免阳光直射。 2.3.4在关灯命令发出后，再次开灯须等待5分钟以上的时间。否则灯会因为过热而损坏。 ZY-CX-WH-201301 Ultimate 3000 HPLC文件编号 批准人 杨瑞恩 维护程序 2013.01.16 起 草

12、 人 赵文法 生效日期 说 明 审 核 人 孙大赢 审核意见 同意 1、流动相的抽作要求: 高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤; 流动相脱气至关重要(可采用抽滤，超声波脱气等方法) 2、吸滤头: 特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。 3、单向阀:如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗 4、泵头: 泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液，或更换柱塞杆及其密封

13、垫等) 5、过滤器: 当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染， 拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。 6、排液阀: 此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。 7、自动进样器: 平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。 8、流通池: 在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。 9、工作站: 出现死机可重起计算机;不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拔接口

14、、重新安装软件 Ultimate 3000 HPLC维护程序 第1页 共1页 ZY-CX-HC-201301 Ultimate 3000 HPLC文件编号 批准人 杨瑞恩 期间核查程序 2012.10.26 起 草 人 赵文法 生效日期 说 明 审 核 人 孙大赢 审核意见 同意 1目的 在仪器设备两次检定之间，进行期间核查，验证设备是否保持校准时的状态，确保检验结果的准确性和有效性。 2 核查项目 标准曲线相关系数、定量重复性、检出限(DL)、基线噪声和基线漂移。 3 使用的标准物质 萘 4核查依据 4.1 高效液相色谱使用说明书。 4.2 JJG 705-2002液相色谱仪检定规程 5核查

15、方法 5.1环境条件 5.1.1安装仪器的房间应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。 5.1.2仪器应平衡地放在工作台上，便于操作，周围无强烈的机械振动和电磁干 扰，仪器接地良好 5.1.3环境温度10,30?，8小时内温度波动不超过?3?，相对湿度低于85%。 5.2电源要求 电源电压:220?22V 电源频率:50?0.5Hz 5.3仪器与试剂 秒表，分度值小于0.1s;电子天平，最大称重200g，最小分度0.1mg 容量瓶;甲醇(色谱纯) 色谱用水 5.4核查方法 5.4.1泵流量设定值误差S、流量稳定性误差S的检查。 SRUltimate 3000 HPLC 期间核查程序

16、 第1页 共3页 5.4.1.1技术要求 5.4.1.2按5.4.1.1表设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过 的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10,25min，称重。按式(1)、(2)计算S和S。 SRS=(Fm-Fs)/Fs100%(1) SS=(Fmax-Fmin)/F100%(2) R式中:S-流量设定值误差，% SFm =(W2-W1)/(i?t)，流量实测值，mL/min; W2-容量瓶+流动相的重量，g; W1-容量瓶的重量，g; FS-流量设定值，mL/min; i-实验温度下流动相的密度，g/cm3; t-收集流动相的时间，min; S-流量稳

17、定性误差，%; RFmax-同一组测量中流量最大值，mL/min; Fmin-同一组测量中流量最小值，mL/min; F-同一组测量中流量的算术平均值，mL/min。 5.4.1.3注意事项:流量最高值的设定可根据实验室的要求而定。流量测量顺序可 以随意选择，但不是设定某一流量后连续测量三次，每次改变流量后至少要等5min待流量稳定后，方可收集流动相。 5.4.2 紫外检测器基线漂移和基线噪声检查 5.4.2.1 技术要求 基线漂移?1.010-4AU/h 基线噪声?1.010-5AU Ultimate 3000 HPLC 期间核查程序 第2 页 共3页 5.4.2.2设置紫外吸收波长254n

18、m连接1V/AU档，满刻度吸光度单位为2伏特。流 动相100%甲醇，流量1.0mL/min，参比池为空气，开机待基线稳定后，记录10min，计算基线漂移和噪声。 Nd,KB 式中:Nd-检测器基线噪声 K-衰减倍数 B-测得的基线峰-峰高对应的记录仪标度，AU 5.4.3定性、定量测量重复性的检查 5.4.3.1技术要求 a. 定性测量重复性误差(8次测量)RSD定性?1.5% b. 定量测量重复性误差(8次测量)RSD定量?3.0% 5.4.3.2选择一种适当的标准溶液(萘)或稳定的待分析样品，记录保留时间和峰面积，连续测量8次，按式(3)，计算相对标准偏差RSD(%)。 RSD即为定性定量测量重复性相对标准偏差。 定性(定量)式中:iX-第i次测得的保留时间或峰面积; X-n次测得结果的算术平均值; I-测量序号; n-测量次数。 6 核查结果与处理 6.1 应做好仪器参数、方法、测试结果记录，点检合格后方可使用。 6.2 发现性能达不到规定要求，应做好记录，按设备管理程序执行。 6.3 本仪器核查周期为一年。 7.相关记录 7.1高效液相色谱仪核查记录 Ultimate 3000 HPLC 期间核查程序 第3页 共3页