专题2 微生物的培养与应用教师.docx

1、专题2 微生物的培养与应用教师专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养1（2014凉州区模拟）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数请回答与此实验相关的问题（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源除此之外，培养基还必须含有的基本成分是无机盐和水（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是高压蒸汽灭菌（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养，培养的温度设定在37要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验（4）培养20小时后，观察到平板

2、上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有多种细菌一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越高（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐盐（或NaCl）细菌，这种培养基（按功能分）被称为选择培养基2（2014眉山模拟）某猕猴桃种植基地为解决猕猴桃滞销易腐烂问题，引进果酒、果醋生产线进行猕猴桃的深加工，获得了较好效益，比生产流程如图所示，据图回答：（1）侯选菌A、B在结构上的主要区别是A具有成形的细胞核；在筛选最适菌A时，可用重铬酸钾试剂来检测酒精生成的多少（2）在纯化侯选菌A时，最好选择平板划线法法将菌种A接种于固体培养基上（3）菌种的扩大培养应在无菌恒温箱中进行在进行菌种A

3、的扩大培养过程中，锥形瓶的瓶口应打开，并适时振荡锥形瓶（4）将猕猴桃加工成果汁时，为提高果汁的产量和品质，应加入适量的果胶酶酶，该酶能瓦解植物细胞的细胞壁及胞间层（5）在发酵罐中生产果酒、果醋过程中，其温度应分别控制在1825、30353（2015长沙校级模拟）如图1是某同学制作果酒、果醋的实验流程示意图（1）发酵罐1和发酵罐2中的微生物在结构上的主要区别是前者有核膜包被的细胞核（有成形的细胞核），要保证酒精发酵和醋酸发酵的正常进行，除了满足适宜的温度、pH等条件外，还需做到酒精发酵时不通入氧气，醋酸发酵时连续通入氧气（2）判断发酵罐1中优势菌种的数量最简单的实验方法是显微镜直接计数法，通过此

4、种方法统计获得的优势菌种的数量往往大于（大于、小于）发酵罐1优势菌种活菌的实际数量（3）图2表示纯化菌种的操作过程，过程一是平板划线法方法，过程二是稀释涂布平板法方法，欲从发酵罐2中分离出优势菌种并进行计数应选用过程二（4）分离并获得菌种后，若需长期保存，应使用甘油管藏法4（2015辽宁校级模拟）阅读如下材料，回答下列问题：资料：相传，清康熙八年，安徽举子王致和，京考未中，在京城做起了卖豆腐的生意一天，他发现没卖完的豆腐长了白毛，舍不得丢弃，就将豆腐装入坛内撒盐腌了，再密封起来，秋末开坛意外制成了“闻着臭，吃着香”的腐乳资料：19世纪中期，法国的酿造业曾一度遭受毁灭性的打击在生产过程中出现了葡

5、萄酒变酸、变味的怪事经研究，法国科学家巴斯德发现，导致生产失败的根源是发酵物中混入了杂菌（1）中国的传统发酵技术源远流长，是人类对微生物的利用，其中制作腐乳的微生物主要是毛霉，制作果酒的微生物是酵母菌，它是兼性厌氧微生物，在无氧条件下能进行酒精发酵，其反应式为C6H12O62C2H5OH+2CO2（2）在腐乳制作过程中，微生物生长的温度控制在1518；加盐腌制，盐可以析出豆腐中的水分，同时，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质（3）从资料中看出，防止杂菌入侵，获得纯净的培养物是研究和应用微生物的前提在无菌技术中，对操作者用酒精擦拭双手属于消毒，对金属用具、玻璃器皿、培养基等要进行灭菌，其中

6、，培养基只能用高压蒸汽灭菌（4）通常在一环境中微生物有多种混合在一起，若要对某种微生物进行纯化，最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法6（2015巴中模拟）如图是研究者从热泉中筛选能高效产生耐高温淀粉酶嗜热菌的过程（1）从物理状态上来说，号培养基属于固体培养基，配制时一般加入琼脂作为凝固剂（2）进行过程的目的是稀释；过程所使用的接种方法是稀释涂布平板法法（3）、号培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是先调节pH，后灭菌；一般对配置的培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌（4）细菌种群在进化过程中，导致其进化的原材料是基因突变5（2015浦东新区一模）回答下列有关微生物的问题炭疽杆菌能引起人畜患

7、炭疽病对炭疽病疑似患者，可通过图1所示鉴定炭疽杆菌的实验进行确诊表1是培养炭疽杆菌的血琼脂培养基成分，其中实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌蛋白胨10g牛肉粉3g氯化钠5g脱纤维羊血（含多种生长因子）50mL琼脂15g表1去离子水1000mL（1）据表1分析“血琼脂培养基”属于（多选）通用培养基 选择培养基 固体培养基 液体培养基（2）为从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，将采集到的患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培养基表面，用无菌玻璃刮铲涂匀，这种接种方法称为稀释涂布平板法图2所示的四种菌落分布图中，不可能由该方法得到的是D（3）制备图1中的液体培养基时需采取高压蒸汽灭菌方法灭菌，目的是杀死

8、微生物及芽孢（4）据图1分析，接种可疑菌后，经35培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是细菌大量繁殖，对照组试管中应加入等量生理盐水，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低（填“高”或“低”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清（5）对排除的疑似患者及易感人群，可采取的最有效的预防措施是接种炭疽疫苗6（2015嘉定区一模）回答有关微生物的问题急性肠胃炎是由细菌通过消化道进入人体导致的因此检验饮用水的细菌含量是有效监控疾病发生的必要措施请回答下列与检验饮用水有关的微生物问题：（1）接种

9、微生物的方法有很多，图1中过程所示为稀释涂布法图2所示的四种菌落分布图中，不是由该方法得到的是图D（2）不论何种培养基，在各成分溶化后灭菌前，要进行的是调PH（3）用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是什么？分别计数3次，取平均值；使实验结果更加准确可靠（4）从结构上看，与大肠杆菌属于同一类生物的是A、C、D（多选）A嗜盐菌 B黏菌 C颤藻 D螺菌 E霉菌为了检测大肠杆菌对抗生素的敏感性，在37培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板将分别含有A，B，C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，结果见图3（5）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最

10、好选择的抗生素是青霉素若透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是该抗生素的抗性突变菌株（6）治疗肺结核的常用抗生素是利福平，写出其抑菌机理：利福平可以抑制结核杆菌RNA的合成7（2013宝山区二模）泡菜是一种历史悠久的大众喜爱的发酵蔬菜制品，但近年科学研究发现，蔬菜在腌制过程的某些阶段会产生较多的亚硝酸盐乳酸菌是泡菜生产中的主要生产菌种，不同乳酸菌的繁殖周期不同某兴趣小组希望获得生产周期短、亚硝酸盐含量低的泡菜在一定的环境条件下，对此进行了相关研究（假设不同乳酸菌在一个繁殖周期中产乳酸量相近）（1）从实验目的分析，研究需要解决的问题主要有确定常见乳酸菌的泡菜生产周期、常见

11、乳酸菌腌制过程中亚硝酸盐含量的变化规律选取6种泡菜老液，筛选优良的乳酸菌菌种筛选示意路线图如下：（2）乳酸菌的培养条件除了适宜的温度、pH之外，还必须保证厌氧条件（3）初筛、复筛宜选择固体（固体或液体）培养基，当复筛的培养基中出现单菌落即可接种到斜面保藏 增值培养宜选择液体（固体或液体）培养基测定亚硝酸盐含量：取6组相同的泡菜坛，每个坛中加入等量的冼净灭菌的新鲜蔬菜，再分别倒入等量的煮沸已冷却的10%盐水和等量的乳酸菌（分别从泡菜老液中筛选所得）封坛前测定亚硝酸盐含量，封坛后置于同一环境中（4）在腌制过程中，坛中会出现溶液量增多现象，主要原因是外界溶液浓度高使蔬菜细胞渗透失水（5）封坛一段时间

12、后，需要开坛测定亚硝酸盐含量的变化，并进行实验数据记录，请设计实验记录表：（6）根据上述的实验结果，筛选合适的乳酸菌作为菌种来制作泡菜而最佳食用泡菜的时间，应该选择亚硝酸盐含量最低的时间（阶段）食用时间段8（2015陕西校级一模）多环芳烃是具有致癌、致畸、致突变作用的全球性污染物，是煤、石油、有机高分子化合物等有机物不完全燃烧时产生的挥发性碳氢化合物，包括萘、蒽、菲、芘等150余种化合物某研究小组从一污水处理厂的污泥中筛选到一株可降解萘、蒽的细菌，命名为BDP01（1）该研究小组所用的培养基应以萘或蒽作为唯一碳源，其目的是筛选出BDP01菌株，从功能看该培养基类型属于选择培养基（2）接种时所用

13、的接种环通过灼烧灭菌，在第二次及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，该分离纯化方法称平板划线法（3）下面的图1和图2为该研究小组进行的其中两个实验的实验结果图，菌株的生长量以分光光度计于600nm处测定的光吸收值（OD600）表示（图1不同培养温度对BDP01在萘、蒽培养基中生长量的影响）（图2不同pH对BDP01在萘、蒽培养基中生长量的影响）测定菌株生长量时用液体培养基，并需振荡培养这样一方面可使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能增加溶液中的溶氧量由图1可见，菌株生长量较高的温度范围是3035图2结果表明，BDP01对pH的适应范围较小，在酸性条件下的生长量

14、要小于碱性条件下的结合图2推测，进行图1相关实验时培养基的pH最可能为7.0（用图2中相关数值表示）9（2015普陀区一模）回答下列有关微生物及其培养的相关问题常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母请分析回答：（1）微生物实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是高压灭菌、干热灭菌；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该将器皿图1是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙指示的结构依次是安全阀、排气阀（2）制备酵母菌培养基要进行平板操作，待平板冷凝后，要

15、将培养皿倒置，其主要原因是防止冷凝水污染培养基（3）取从自然界中采集的葡萄，然后在超净台上将葡萄置于0.1%氯化汞水溶液中进行表面消毒5min，再用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后进行纯化培养图甲是经上述纯化培养的结果，在培养基上接种时划线的顺序是依次是132（用编号表示）研究者在经过甲接种后得到了一个经培养后菌落分布如图乙所示的平板，推测接种时可能的操作失误是涂布不均匀为了确定培养基是否被污染，需要进行的操作是：培养空白平板（4）下表为某学生在筛选培养能利用木糖发酵的酵母菌时所配置的培养基配方，请指出其中的明显不足之处应该以木糖为唯一碳源K2HP04FeS04MgS04.7

16、H20NaNO3KCl蔗糖木糖琼脂蒸馏水0.1g0.001g0.05g0.3g0.05g3.0g3.0g2og100mL（5）再将目的基因连接到具有尿嘧啶合成酶基因作为标记基因的质粒上，并将所得的重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏尿嘧啶合成能力能力的酿酒酵母作为受体菌（6）将经上述流程培养获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试随着发酵的进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能既能利用木糖，又能耐受酒精，即说明所需菌株培育成功10（2014徐汇区一模）回答下列关于微生物的问题临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验

17、步骤进行实验，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性（1）为了从样本中获取致病菌菌落，可用划线法或稀释涂布法将样本借种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得（2）获得致病菌菌落后，在进行扩大培养时，应选用液体培养基（3）为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，取该单菌落适当稀释，接种于固体培养基表面，在37培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板将分别含有A，B，C三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A敏感；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B不敏感；含C滤纸片周围的透明圈比含A的小，且透明圈中出现了

18、一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素C的耐药菌（4）根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选择抗生素A（5）用来判断选择培养基是否起到了选择作用，要设置的对照是CA未接种的选择培养基 B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基 D接种了的选择培养基课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1（2014龙凤区校级模拟）人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括接种工具、培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用

19、的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌（答2种）（2）采用稀释涂布平板法将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火焰旁旁进行操作接种后的培养皿倒置于37的恒温箱中培养（3）用含有酚红指示剂培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于鉴别培养基若培养基中存在有脲酶的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的氨，遇培养基中加入的酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数BA多 B少 C相等 D几乎为零2（2014兰

20、州模拟）尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌），培养基成分如表所示，实验步骤如图所示，请分析回答问题：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10g尿素1g琼脂15g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL（1）此培养基能否用于植物组织培养？为什么？不能，缺乏植物激素（2）如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图则获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法，图B效果的接种方法是

21、平板划线法，一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高（答出一条即可）（3）“目的菌”生长所需的氮源来自培养基中的尿素，其同化作用类型是异养型（4）培养基中加入尿素的目的是筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌），这种培养基从功能上属于选择培养基3（2013正定县校级三模）【生物选修1生物技术实践】某研究小组设计了以下实验探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）实验步骤如图所示，培养基成分如表所示请分析回答问题：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0

22、g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL（1）培养基中加入尿素的目的是筛选目的菌，这种培养基属于选择培养基（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖，实验需要振荡培养，原因是为目的菌提供氧气（3）转为固体培养时，常采用涂布平板（划线）的方法接种，获得单菌落后继续筛选（4）下列材料或用具中：培养细菌用的培养基与培养皿；玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；实验操作者的双手需要灭菌的是；需要消毒的是（填序号）（5）在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落A同学的实验结果产生的原因可能有（填序号）由于土样不同 由于

23、培养基污染 由于操作失误 没有设置对照（6）在该实验中，可以通过检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解，所依据的原理是微生物产生的脲酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高所用方法是在培养基中加入酚红指示剂，若尿素被分解，则培养基变成红色4（2014浦东新区一模）回答下列关于微生物的问题尿素是一种重要的农业氮肥，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们尝试从土壤中筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）他们设计的实验步骤如图所示，如表是培养基成分KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO47H2O0.2g葡萄糖10g尿素CO（NH2）21g琼

24、脂15g将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL（1）此培养基按物理状态属于固体培养基（2）培养基中加入尿素的作用是AB（多选）A筛选目的菌 B作为氮源 C作为碳源 D杀死杂菌（3）图中稀释步骤的目的是获得单个菌落（4）此实验操作过程中，接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌，灭菌温度为121；接种时应无菌操作，这两个步骤的目的是为了使培养基接种培养后，培养基中AB（多选）A无杂菌 B只有目的菌 C无菌 D有土壤中的固氮菌5（2015海南模拟）一种广泛使用的除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤为修复被该除草剂污染的土壤，可按图甲程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水

25、中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度各取0.1mL已稀释10 3倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为5.61012（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是在无氮的培养基中添加该除草剂（3）接种技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，培养时，只有很少菌落出

26、现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是培养基缺少这些细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了这些细菌的生长（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气，有透明带菌落利用的氮源主要是该除草剂，据此可筛选出目的菌实验结果如图乙显示的AE五种菌株中，E是最理想菌株（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：接种的菌种一般培养基实验处理及结果A不生长添加营养物质甲，能生长B不生长添加营养物质乙，能生长A+B能生长不添加营养物质甲、乙就能生长突变株A不能在一般培养基上生长的原因是突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶突变株A和B混合在

27、一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是突变株A生长需要的营养物质甲，突变株B可以提供；突变株B生长需要的营养物质乙，突变株A可以提供6（2012秋慈溪市校级月考）尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌的分解作用，才能被植物吸收利用某同学要分离出土壤中能分解尿素的细菌，并尝试进行计数，培养基配方如下：K2HPO4NaClH2O葡萄糖尿素酚红琼脂0.12g0.12g15mL0.025g2.0g0.25mg0.5g（1）分解尿素的细菌都能合成脲酶，该种细菌在生态平衡中起到什么作用？参与了氮循环（或维持氮平衡）写出细菌分解尿素的方程式（2）根据培养基的成分判断，该

28、同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？不能（能/不能），原因是琼脂是未被纯化的混合物，内含一定的含氮化合物，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物（3）分离得到分解尿素的细菌后，如果要扩大培养，则应选择 培养基进行培养培养一段时间后，使用 对微生物细胞进行计数计数过程中，下列哪种行为会影响计数的准确性AA计数时直接从静置培养的试管底部取培养液进行计数B如果方格内微生物细胞数量多于300 个，培养液先稀释后再计数C如果微生物细胞有粘连，要数出团块中的每一个细胞D压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数7（2012嘉定区一模）（四）回答下列有关微生物和进化的问题莠去津是一种除草剂，它是

29、一种在土壤中不易被降解的含氮的有机化合物由于莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，某A课题小组的同学按下面程序选育能降解的细菌（目的菌）（1）从使用莠去津农田中，发现了能遗传的耐莠去津杂草，以下对其解释正确的是DA部分杂草适应了莠去津B莠去津使部分杂草产生了突变C部分杂草为了适应莠去津而产生了定向变异D莠去津对杂草的不定向变异进行了定向选择（2）A组选用长期使用莠去津的土壤，原因是莠去津自然选择作用使得土壤中可含有目的菌（3）上图示利用划线法法将微生物接种在固体培养基上，其目的是把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，最终通过培养后出现单个菌落（4）另外一个B课题小组对以上过程提出异议，认为最终得到菌落除了能降解莠去津的细菌的以外，可能还有另外一类自生固氮菌菌B小组查阅资料，发现含过量莠去津的培养基不透明，他们在A组的基础之上，将菌夜涂布在含过量莠去津的无氮培养基上，实验结果如图在此固体培养基中，无透明菌落利用的氮源主要是氮气；有透明带菌落利用的氮源主要是