菌落总数实验报告.docx

1、菌落总数实验报告检验报告实验名称： 菌落总数的检验 实验方法：平板计数法 商品名称：夸夸唔、有友、奇爽、乐棒 棒、香猪脆、香脆肚。参照标准： GB4789-17 2011 总负责人：熊经理 检验人员 : 徐恒琴、崔艳霞、游惠 检验时间： 2011 年 7月 268 月 6 号2011 年 8 月 8 日菌落总数的检测平板计数法一、实验目的 为了进一步了解与熟悉我们产品的操作规范和关键点的控制，掌握 菌落总数的检验方法和了解超净工作台的操作规范。二、实验仪器设备和所需试剂及试剂的配制。1 、实验仪器及设备杀菌锅 YXQLSSU 编号 5090、无菌超净工作台 SW CJIC 编号 24、 JJ-

2、Z 型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱 GHP 9080、 出厂编号13475、烘箱 ZFD5040（全自动型鼓风干燥箱） 、蒸馏水制备机、灭菌过 的 250ml 锥形瓶、 1ml 吸量管、 10ml 的吸量管、酒精灯、锥形瓶 1000ml、 培养皿、电子天平 AL104、电磁炉、锅、锅铲、 PH试纸、恒温水浴锅 HH 4 出厂标号。2、试验试剂及配制主要试剂：琼脂、无菌生理盐水、无菌水、 75%的酒精、 1moL/L 氢氧 化钠、 1moL/L 的盐酸。药品试剂琼脂：准确称取胰蛋白胨、 酵母浸膏、葡萄糖、 琼脂、蒸馏水 2500ml， 加入至锅中煮沸溶解， 先加入琼脂将其熬化， 在加入其它样

3、品， 直至样品 熬化即可关掉火，冷却后调解 PH值（左右即可）。酸性用氢氧化钠调节、 碱性用盐酸进行调节，将在 1200C高压灭菌 15min 即可。无菌生理盐水：准确称取氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中。无菌水：吸取 1000ml的蒸馏水，将在 1200C高压灭菌 15min 即可。1moL/L 氢氧化钠：称取 40g 的氢氧化钠溶于 1000ml 的蒸馏水中在 1200C高压灭菌 15min 即可。75%的酒精：分别吸取 400ml的 95%的无水乙醇和 100ml的蒸馏水与 500ml 的容量瓶中。1moL/LDE 盐酸：移取浓盐酸 90ml，用蒸馏水稀释至 1000ml，在 1200

4、C 高压灭菌 15min 即可。三试验步骤1 、样品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 ml 磷酸盐缓冲液 或生理盐水的无菌均质杯内， 8000 r/min 10000 r/min 均质1 min 2 min ，或放入盛有 225 ml 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质 器拍打 1 min 2 min ，制成 1:10 的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取 25 ml 样品置盛有 225 ml 磷酸盐缓冲 液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中， 充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 36 1 48 h 2 h.2、检样与接种： 25 g（ml）

5、 样品+225 ml稀释液，均质， 10 倍系 列稀释选择 2 个3 个适宜稀释度的样品匀液，各取 1 ml 分别加入 无菌培养皿内。用1 ml 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液 1 ml ，沿管 壁缓慢注于盛有 9 ml 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不 要触及稀释液面） ，振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合 均匀，制成 1:100 的样品匀液。. 按上述操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释 一次，换用 1 次 1 ml 无菌吸管或吸头。. 根据对样品污染状况的估计，选择 2 个 3 个适宜稀释度的 样品匀液（液体样品可包括原液） ，在进行 1

6、0 倍递增稀释时，吸取 1 ml 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸 取1 ml 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。3 、倒平板：在酒精灯开着的条件下进行到培养皿的 3分之一即可，而其中琼脂的温度需要在 46即可倒入琼脂，不然会影响其细 菌的生长繁殖。平板计数琼脂培养基，混匀 .4、培养：待琼脂凝固后，将平板翻转， 36 1 培养 48 h2 h 。水产品 30 1 培养 72 h 3 h 。如果样品中可能含有在琼 脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄 层琼脂培养基（约 4 ml ），凝固后翻转平板，5 、报 告6. 菌落计数可用肉眼观察，必要

7、时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和 相应的菌落数量。 菌落计数以菌落形成单位 （ colony-forming units ， CFU）表示。6. 1 选取菌落数在 30 CFU 300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的 平板计数菌落总数。低于 30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的 平均数。6. 2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到 平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板 后乘以 2，代表一个平板菌落数。6. 3 当平板

8、上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条 单链作为一个菌落计数。7 结果与报告菌落总数的计算方法 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两 个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g （ ml）样品中菌落总数结果。若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公 式（ 1）计算：N= C/（N 1+d （ 1）式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d稀释因子（第一稀释度） 。上述数据按数字修约后，表示为 25000或 104。若所有稀释度的平板上

9、菌落数均大于 300 CFU，则对稀释度最 高的平板进行计数，其他平板可 记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均小于 30 CFU，则应按稀释度最低 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则 以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。若所有稀释度的平板菌落数均不在 30 CFU300 CFU 之间， 其中一部分小于 30 CFU 或大于 300CFU 时，则以最接近 30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。菌落总数的报告菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数 报告。菌落数大

10、于或等于 100 CFU 时，第 3 位数字采用“四舍五入” 原则修约后，取前 2 位数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数 形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报四、数据处理及结果计算一、乐棒棒菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白1细菌菌落数2细菌菌落数3细菌菌落数100373938100058010000000若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两 个平板菌落数的平均值，再将平均值

11、乘以相应稀释倍数，作为每 g （ ml）样品中菌落总数结果。所以： N=37+38+39/3 10N=380 个 /g二、奇爽菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白123100267281295100044342910000406若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（ 1）计算：式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d稀释因子（第一稀释度） 。N=267+281+295+44+34+29/（3+ 3） 10N=2879 个 /g三、香猪脆菌落总数的数据分析结果1稀释

12、倍数平板个数空白123100576034100012感杂410000001若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两 个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g （ ml）样品中菌落总数结果。所以： N=57+60+34/3 10个/gN= 503结果2稀释倍数平板个数空白123100576034100012感杂410000001若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两 个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g （ ml）样品中菌落总数结果。所以： N=36+35+12/3 10N=243 个 /g四、夸夸唔菌落总数的数据分析稀释

13、倍数平板个数空白12310045233665010005311884100001587若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每 g （ ml）样品中菌落总数结果。所以： N=53+118+84/3 100N= 8500五、有友菌落总数的数据分析稀释倍数平板个数空白1231001721000感杂感杂010000000只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个 平板菌落数的平均值， 再将平均值乘以相应稀释倍数， 作为每 g（ml） 样品中菌落总数结果。所以： N=1+7+3/3 10N=33 个 /g六、香脆肚菌落总

14、数的数据分析稀释倍数 平板个数 1 2 3空白10 0 131 444 376若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公 式（ 1）计算：N= C/（N 1+d （ 1）式中：N样品中菌落数；C平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d稀释因子（第一稀释度） 。N=158+121+136+43+47+55/ 【3+3】 10-1N=16969五、数据分析。通过一系列的实验论证表明：自己的贴牌产品的菌落总数含量 较高，而其中香脆肚的菌落总数的含量更高，而泡椒风爪的菌落总 数都控制的都较好。因此，在以后的生产过程中药控制好贴牌产品 的环境和杀菌效果。菌落总数对环境的要求较高需要在无菌的条件 下进行，以免被污染。在倒平板时要注意琼脂的温度，温度控制在 46左右。还有在放入培养箱之前要将凝固好的琼脂倒置，以免水 蒸气影响其结果。