培养基的质量控制.docx

1、培养基的质量控制惠山疾控作 业 指 导书编号:HSCDC/GC76009 培养基质量控制规程版本 / 修改次:/0第1 页 共6 页 目的规范本中心微生物实验室培养基的内部质量控制工作。2适用范围适用于实验室微生物培养基使用前的质量验收、使用过程中的质量控制。3 职责31 检验人员:按照本规程规对培养基使用前及使用过程中进行质量控制，确保培养基符合相关标准的要求。3.2 科室负责人：负责指导、监督检验人员对培养基进行质量控制。4使用前的质量控制41生产企业提供的材料培养基生产厂家随产品应提供下列文件：培养基、独立成分、添加成分名称;批号；使用前的p;储藏信息和有效期;性能评价和所用测试菌株;技

2、术数据清单；质控证书/必要的安全、危害数据。4.验收实验室收到培养基后，应填写“培养基验收检查记录单”，检查包装及完整性，标识是否清晰等,验收合格后按照“培养基编码系统使用规程”对培养基进行编号。4。3 贮存及使用前质量确认4.。1商品化培养基应严格按供应商提供的贮存条件、有效期进行贮存。32 验收合格的培养基应建立“商品化干粉培养基目录清单，使用前对容器密闭性进行复查。4。3。3开封的脱水培养基，每次使用前应对其质量进行检查，通过粉末的流动性、均匀性、结块情况和色泽变化等判断培养基的质量变化若发现培养基受潮或物理性状发生明显改变则不应再使用.4。3。4制备好的成品培养基应建立“ 成品培养基目

3、录清单”，每次使用前应检查：颜色是否发生变化?/是否蒸发脱水?/是否有微生物生长 ?等。如果发生上述异常情况，则不应再使用.5制备好的成品培养基的质量控制新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试,符合要求后使用。成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室制备培养基测试结果记录单”。5。1物理指标控制。1.测试2025的值5。1.2琼脂层厚度;色泽;透明度和(或）是否存在肉眼可见杂质;凝胶稳定性、粘稠度和湿度。微生物学指标控制可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1表)对培养基性能进行测试，具体操作方法详见作业指导书“培养

4、基性能测试指南”。5.。微生物污染的控制从每批制备好的培养基中选取至少一个（或%）平板或试管，置于3或按特定标准中规定的温度培养1。5。2生长特性。2.2。1生长率惠山疾控作业 指 导 书编号：HSCC/GC-76009 培养基质量控制规程版本 / 修改次:1第2 页 共 6 页 将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。5。2。21。1定量方法生长率PR的计算： NONS:从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。0:从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应00c )。要求：非选择性培养基上目标菌的生长率最

5、低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长;选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0。1；每平板（或每试管）的接种水平为101FU。5.2。.1.2 半定量方法半定量方法采用生态测量技术在平板上划线,平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数，G值不应超过标准规定的允许范围。5。22。1。3 定性方法定性方法采用划线法观察。5。2。2选择性将浓度为104FU/mL106CFU/L的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。5。2.2。定量方法选择因子F: SF = DO -DSDO:能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度DS：能在测试培养基上显示生长的

6、最高稀释度要求：非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2 ；半定量和定量法中,非目标菌应部分或全部被抑制.52.3生理生化特性（选择性和特异性)规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等)和非目标菌的被抑制程度进行测试。5.3性能评价和结果解释按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良;若只有物理指标和微生物指标符合规定,则该批培养基可被接收。表1 计数用选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应id-PrkeS生长率374金黄色葡萄球菌ATCC8/592TSA定量R0.5黑色/灰色菌落,周围

7、为一混浊带,其外有透明带选择性3748h大肠杆菌AC292879-定性全部抑制特异性372448h表皮葡萄球菌ATC1222定性黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外无透明带MPS生长率3028h腊样芽胞杆菌ATC18TSA定量PR07具沉淀带的粉色菌落选择性748大肠杆菌ATC25922-定性全部抑制-特异性348h枯草芽胞杆菌C6633定性不具沉淀带的粉色菌落惠山疾控作 业 指 导 书编号:HSCDCG76-200 培养基质量控制规程版本 / 修改次:1/0第 页 共 6页 表1计数用选择性培养基(续)培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应RBG(结晶紫中性红胆盐葡萄糖

8、琼脂)生长率374h大肠杆菌ATC2522/839TS定量PR0.5带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落鼠伤寒沙门菌ATC408选择性370粪链球菌C29212/1933定性全部抑制-VRBL(紫红胆汁乳糖）S生长率302h大肠杆菌ATCC2592/739TSA定量R.5带有或不带沉淀带的淡紫色菌落选择性30h粪链球菌ATCC922/933定性全部抑制-特异性0h铜绿假单胞菌ATCC53-定性无色至浅棕色菌落CTSMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂）生长率724大肠杆菌O17：7ATCC4894/3895SA定量PR0.5透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1m选择性724金黄色葡萄球菌ATC65/25

9、9定性全部抑制特异性74h大肠杆菌ATC177525922-定性粉色菌落BGBB(煌绿乳糖胆盐肉汤)L生长率30244h大肠杆菌ATCC592/79TA半定量浊度2,导管1/3产气产气并浑浊弗氏柠檬酸杆菌ATCC59/839选择性粪链球菌ATC29129定性不生长L生长率4448大肠杆菌ATCC25922-半定量浊度2+,导气管1/产气产气并浑浊选择性42448h铜绿假单胞菌TC273b定性不生长EC-MUG/LS-MU生长率448h大肠杆菌ATCC292半定量浊度2，导气管1/3产气产气并浑浊，产生荧光选择性4448h铜绿假单胞菌ATCC275b定性不生长-乳糖胆盐发酵培养L生长率34h大肠

10、杆菌ATCC5922半定量导气管13产气产气并变黄色选择性724h鼠伤寒沙门菌AC14028定性-不产气、仍为紫色LST（月桂酸肉汤）生长率372h大肠杆菌AC292半定量导气管/产气选择性724福氏志贺氏菌CC515定性-表2 计数用非选择性培养基培养基用途培养条件测试菌株参考培养基控制方法判定标准特征反应P(平板计数琼脂）生长率307h大肠杆菌ATC592/73TSA定量PR0。7金黄色葡萄球菌CC658枯草芽孢杆菌AC6633惠山疾控作 业 指导书编号：SDC/G-7609 培养基质量控制规程版本 / 修改次:/0第 4 页 共 6 页 表 选择性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制

11、方法判定标准特征反应EE生长率3724h大肠杆菌ATC2592/73半定量RB上10CF粉红至红色菌落,有或没有沉淀带鼠伤寒沙门菌ATC14028选择性粪肠球菌ATC2912全部抑制RVSL生长率41。5h鼠伤寒沙门菌ATC14028半定量XL或其他选择性培养基上CU-肠炎沙门氏菌TCC176铜绿假单胞菌ATCC7853选择性1.54大肠杆菌ATCC2592半定量TSA上全抑制粪链球菌TC921TSA上10CFU不同培养基上菌落特征不同(见标准）副溶血性弧菌CMCC2000选择性324h大肠杆菌ACC292/739SA上10CFU福氏志贺氏菌CMC5172。5氯化钠肉汤生长率3h金黄色葡萄球菌

12、ATCC658半定量B-P平板或其他培养基上0CFU不同培养基上菌落特征不同(见标准）表4 非选择性增菌培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应HI生长率3724h金黄色葡萄球菌TCC653定性浊度12蛋白胨盐L稀释20245mn大肠杆菌TC92定量+/50菌落数/至(/50%原始菌落数-金黄色葡萄球菌TCC5923惠山疾控作 业 指 导书编号：HSCDC/GC7-2009 培养基质量控制规程版本 修改次:1/第 5 页 共 页表4 非选择性增菌培养基（续）培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应乳糖蛋白胨肉汤L生长率324h大肠杆菌ATC5定性导气管1/3产气选择性

13、324鼠伤寒沙门菌ACC10定性SDLP液体培养基L生长率3724h铜绿假单胞菌ATC278定性浊度12-大肠杆菌ATC22金黄色葡萄球菌ATC68液体沙氏培养基L生长率265天白色念珠菌CMCC98001定性浊度12真菌培养基L生长率26天白色念珠菌CMCC80定性浊度12-表5 选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应亚硫酸酸铋琼脂(BS）生长率748h鼠伤寒沙门菌TCC1408定性良好生长（2）菌落呈黑色,有金属光泽福氏志贺氏菌CMC51572菌落呈棕色选择性大肠杆菌ATCC222873全部或部分抑制（01）无典型菌落粪链球菌ATC221933全部抑制（)XLD

14、S生长率3724h鼠伤寒沙门菌C108定性良好生长(2）菌落呈黑色福氏志贺氏菌CCC5173菌落呈无色选择性大肠杆菌TCC25922/8739全部或部分抑制（01）无典型菌落粪链球菌ATCC29212/19433全部抑制(）血琼脂平板S生长率372448金黄色葡萄球菌ATC653/25923定性良好生长溶血,透明溶血环粪链球菌ATCC22定性良好生长溶血,草绿色溶血环TCSS生长率3744h霍乱弧菌CMCC16109定性良好生长菌落较大,呈黄色副溶血性弧菌CMCC20001定性良好生长菌落较大,呈绿色4号琼脂S生长率37248h霍乱弧菌CMC6109定性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带

15、有黑色非O1群霍乱弧菌CMC1745定性良好生长菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色选择性724h大肠杆菌ATCC292/3定性全部或部分抑制(01）惠山疾控作 业指 导 书编号：SCDCGC-7620 培养基质量控制规程版本 修改次:10第6页 共 页表5 选择性分离培养基(续)培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应伊红美兰琼脂S生长率74h大肠杆菌ATC2922/89定性良好生长菌落紫黑色带金属光泽鼠伤寒沙门菌ATCC14028定性良好生长菌落灰白色半透明福氏志贺氏菌CC15定性良好生长菌落灰白色半透明TI(三糖铁琼脂)S生长率37448h大肠杆菌AT592/8739定性良好

16、生长斜面及底层均变黄,产气,硫化氢阳性普通变形杆菌CMC001定性良好生长斜面及底层均变黄,产气,硫化氢阳性福氏志贺氏菌MC51573定性良好生长底层变黄,斜面变红，不产气，硫化氢阴性鼠伤寒沙门菌ATCC18定性良好生长底层变黄，斜面变红,产气，硫化氢阳性表6 非选择性分离培养基培养基用途培养条件测试菌株控制方法判定标准特征反应营养琼脂S生长率3724h大肠杆菌T592定性良好生长（)-鼠伤寒沙门菌TCC4028c小肠耶尔森氏菌ATC23715记录培养基验收检查记录单 HSCDCZJ9-29A 商品化培养基目录清单 HCDC/9A 成品培养基目录清单 HSCDC/ZJ-131A 实验室制备培养

17、基测试结果记录单 HSCDC/J-1-A6参考文献6。1 B/2745-208实验室质量控制规范 食品微生物检测S.2S/T158。12005.培养基制备指南第1部分:实验室培养基制备质量保证通则S.6.3/T1538.2207.培养基制备指南第2部分:培养基性能测实用指南S.6。纪绍梅.微生物培养基质控与图解M。北京:北京科学技术出版社,06。更改编制审核批准日期日期日期日期培养基验收检查记录单HSCDC/-1-29 共 页 第 页序号名称编号生产厂家批号数量接收日期有效期限验收记录储存条件备注MR08020瓶009101包装完好,标识清晰验收者: 复核者：商品化培养基目录清单SCDC/ZJ3A 共 页 第 页序号名称编号批号有效期限首次开封日期容器密封性复查内容物感官检查储存条件备注密封不密封正常受潮变色制单者： 复核者:成品培养基目录清单HSCZ1931A 共 页 第 页序号名称编号配制日期有效期限首次使用日期末次使用日期培养基质量检查储存条件备注正常脱水变色长菌制单者： 复核者：