检验科SOP04量值溯源SOP.docx

1、检验科SOP04量值溯源SOP月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 1 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101检验量值溯源 SOP手册目录编号名称页面SOP_04-1医学实验室的量值溯源性标准操作程序3-9SOP_04-2血细胞分析仪的溯源及国际参考方法10-12SOP_04-3建立血细胞分析溯源体系的进展情况介绍13-14文件审批者： 发布日期：编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编

2、号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 2 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101操作者从事本项工作前，必须认真学习并掌握本手册的内容，严格按照操作规程操作！学习者 :休订书册与增补程序内容与日期：学习者：休订书册与增补程序内容与日期：学习者：编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 3 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修

3、订生效日期： 20180101SOP_04-1 医学实验室的量值溯源性标准操作程序一、目的：确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：检验项目的量值溯源。三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：溯源性 (traceability) ：通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。 VIM： 1993，定义 6.10 溯源顺序往往采用溯源等级图 ( 也称溯源性体系表 ) 来描述，用以表明测量仪器的计量特性与给定量的测量基准之间的关系，是溯源性的证据。建立

4、溯源等级图的目的，是要对所进行的测量在其溯源到计量基准的途径中，尽可能减少环节和降低测量不确定度，并能给出适当的置信度。为实现溯源性，用等级图的方式应给出：对不同等级测量标准的选择；等级间的连接及其平行分支；有关测量标准特性的重要信息，如测量范围、准确度等级或最大允许误差等；溯源链中比较用的装置和方法。ISO 15189 ： 2003(E) 文件中的 5.6.3 指出：应设计并实施一套对测量系统的校准，真实性的检定程序，以保证测量结果可溯源到 SI 单位，或可参比到一个自然常数或其他规定的参考值。 如果以上都无法实现， 还可采用参加适当的实验室间的比对计划； 使用相应的参考物质 ( 有证书说明

5、其材料的特性 ) ；将供应商或制造商提供的关于试剂、程序或检验系统的溯源性的说明形成文件等。“不间断的比较链”在医学实验室的化学测量中，它是指通过不同级别的测量程序，参考物质和校正物而实现的连续测量，用一个测量程序为某种物质定值，该物质用做下一级测量程序的校准物，依此类推。比较链也称溯源链。“规定的参考标准”为参考测量程序和参考物质。与参考标准的联系可以是直接的，也可以通过中间测量程序和校准物间接进行，即溯源链可长可短，但理论上应使溯源链尽可能地短。“不确定度”是评价溯源性的指标。检测系统与参考系统的联系有好有坏，故在给出溯源性时也要溯源性过程每一步的不确定度，以说明最终结果与参考系统联系的质

6、量。溯源等级图应注意区别测量标准本身的复现量值的不确定度，以及经该测量标准校准所得结果的不确定度。对于普通等级的测量仪器，也可以指出其最大允许误差。等级图中所反映的信息，应与有关的法规、规程或规范的要求相一致。1可溯源至 SI 单位的分析物量值溯源：1.1可溯源到 SI 的分析物：物质结构清楚、均一 ( 纯 ) 、有明确分子量的，试验结果以 mol L表示的物质称分析物 (analyte) 。大约有 100个临床化学项目可以应用参考测量系统，追踪到 SI 的分析参考物参考测量系统参考测量系统参考物分析物数+ 60(+)(+) 40注： (+) 指潜在可利用性编写者：张三三审核者：李四四批准者：

7、李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 4 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101分析物溯源中，决定性方法 ( 一级参考测量程序 ) 和二级参考测量程序及其研究单位见表各分析物一级参考测量程序和二级参考测量程序及其研究单位项目一级参考测量程序二级参考测量程序原理研究机构原理研究机构CaID MSICBR， NBS原子吸收NBS， CDC(A)， BCRCl库仑滴定NBS库仑滴定NBS， AACC， CDC(A

8、)FeID MSNBS沉淀蛋白后亚铁嗪反应AACCMgID MSNBS原子吸收NBSK1D MSNBS火焰发射光谱NBS,AACCNa重量分析NBS火焰发射光谱NBS， AACC， CDC(A)Zn中子活化ICBR原子吸收光谱CDC(A)CreatinineID MSCRC， KI离子交换层析CDC(0)GlucoseID MSNBS， ICBR,KIHK/G-6-PDCDC(A)， AACC， NBSCholesterolID MSNBS KI UBAbell-Kendall 法CDC(A)， AACCTriglycerideID MSUreaID MSUrid AcidID MS尿酸酶 (

9、UV)CDC(A)， AACC， NBSEstradiol ID GC MSprogesterone D GC MSTestosteroneID GC MSFT3EquilibriumdialysisT4ID GC MSFT4Equilibriumdialysis一级和二级参考测量程序，参考物及研究机构组成了参考系统 (reference system) 。1.2可溯源至 SI 单位的分析物量值溯源方法：见图。SI 单位一级参考测量程序一级参考物质二级参考测量程序二级参考物质制造商的检测系统 (master 试剂 )制造商主 (master) 校正物制造商常规检测系统制造商常规 (routin

10、e) 校正物用户常规测量程序生物源性样品结果溯源性 不确定度溯源性链自上而下各环节的溯源性逐渐降低，而不确定性则逐渐增加。量值溯源中采用决定性方法 ( 相当于一级参考测量程序 ) 和参考方法 ( 相当于二级参考测量程序 ) ，在医学实验编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 5 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101现场应用LD测量程序做了修改和优化，制定出了一级参考测量程

11、序。对一级参考测量程序有明确的定 义、描述和给出标准不确定度，并对原参考物重新定值，取得令人满意的结果。编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101室质量保证工作中发挥重要作用。月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 6 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 201801011.5 酶催化浓度参考物：欧洲共同体参考物和测量研究所 (IRMM)提供酶催化浓度参考物。IRMM的酶参考物 (37 )酶参考物名称描述复溶后指定值U L3Ka

12、t mIRMM IFCC 452部分纯化 GGT，源自猪114.1 2.41.90 土 0.04IRMM IFCC 453人 LD 同工酶502 78.374土 0.12IRMM IFCC 454部分纯化 ALT，源自猪心186 43.094土 0.07IRMM IFCC 455人的心肌 CK-MB101土 41.684 土 0.07IRMM IFCC 456-Amy5464土 199.1 0.3注： 1. 冻干品分装密封于玻璃安瓿瓶中，并充入氮气。2.复溶在 1.0ml 酶稳定液中，该稳定液是人或牛血清白蛋白基质。2 不能溯源到 SI 单位的物质的溯源性：欲达 EN ISO溯源性的目的，第一

13、是在所选择的生物源性液体中定义被测量的量 ( 分析物物质 ) ，一旦成分被确定，就保证了它们的临床相关性。然而，对于数百种能够测量的量 ( 估计 500种 ) ，例如：所有的蛋白质和糖化蛋白，常用某种免疫化学技术测定，试验结果不以 SI 单位表示，而用其他单位的术语表示，例如世界卫生组织 (WHO)的国际单位或生产商指定的质量单位。(1)有参考测量程序和参考物的项目，如 HbAlc酶活性，由 IFCC工作组分委员会提供参考测量程序 (RMP)和参考物 (RM)。(2)只有参考测量程序而没有参考物的项目，该类项目以凝血因子的测定为多，凝血因子有一定的生物学活性，常采用带“正常血浆”作为参考物的凝

14、固试验进行测定 (生物学效应 ) ，也被 WH承认，这类项目大约有O 30项。(3)仅有参考物而无参考测量程序的项目大约有 300项。在过去的 30年中，基于实践需要，事实正如 EN ISO 17511 文件中所述： WH采用“国际惯例参考物”来作为国际参考标准。O这个方法是真实的， 全球协议一致的。 但诸如该参考物的性质是什么尚不能完全被确定。某物质是依据目前的技术方法状态在生物化学实验室实验台上制备的物质，自称是高纯的，但就糖化作用而论可能仍是不纯的，应被认为是纯化过程中的某一类型或者可能是已被选择的某一类型。 对生物源性液体中我们 “测量” 所选定的非溯源到 SI 的物质来讲，可以断定，

15、实际上可利用的参考物全部是代用品。这类物质多采用免疫学分析技术进行测定。(4)既无参考测量程序 (RMP)又无参考物 (RM)可以利用的项目。在这种情况下生产商选择了自己的或生产商之间的“候选参考方法 (candidate reference method) ”或自己的“参考物”，并基于所选定的制剂在量上指定数值，这种选定的制剂常常不能被他者利用。许多蛋白质和糖化蛋白是无活性的，例如： CEA(癌胚抗原 ) 和 PSA(前列腺特异抗原 ) ，人们虽可对其进行测定，但很难认识所测定的确切的结构，因为免疫化学技术是通过结合到不同种类的抗体来测量的，这些抗体表面上类似但在一定程度上难以鉴别。编写者：

16、张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 7 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101在生物源性的体液中，如血清或尿液中，欲知一种“物质”以何种状态存在，我们很难知道的，它可能是完整分子、异构体，也可能是糖化形式或碎片产物构成的一种高度不均一性的 ( 不纯的 ) 混合物。2.1目前可利用的参考测量程序 (RMP)和参考物质 (RM)如表。非追踪到 SI 物质”的参考测量系统参考测量程序

17、参考物“物质”的数目举例+* +* 1030300300HbAlc，酶凝血因子各种各样应用范围中的 ISs如：肿瘤标志物注： *IFCC工作组分委员会* 常带“正常血浆”作为参考物的凝固试验 ( 生物学效应 ) ，也是 WH的O ISs 。2.2生物体液中量的定义的全球协议：现在有 300项既无 RMP又无 RM。很显然任何人都不能立即地解决这个问题。没有一个人、一个公司或一个国家能具有权威和知识去解决这些问题。那么怎样能取得进展呢 ?那就是力所能及地达到国际或全球性一致和协议。首先是制造商、医学实验室和临床专家在常规与特定领域密切合作，对每一种分析物物质进行讨论，生物源性体液中的分析物物质的

18、定义是什么 ?医学实验室和临床专家的责任是确定、维护和改进疾病的定义诊断和或确定治疗监测指标。值得强调的是“物质”的定义对于诊断 ( 例如：病原学诊断 ) 与用于治疗监测可能是不同的。第二是执行过程。 2002年 6月成立了实验室医学溯源性委员联席会议 (JCTLM)。得到了国际临床化学和实验室医学联合会 (IFCC) 、重量和测量国际局重量和测量国际委员会 (BIPMCIPM)、世界卫生组织 (WHO)和国际实验室认可委员会 (ILAC) 的支持。进一步说，体外诊断 (invitro diagnostic ， IVD)工业行业协会 欧洲诊断产品制造商学会 (EDMA)、美国高级医学技术学会

19、(Adra Med) 、日本临床试剂学会 (JACR) 的代表们参加了欧洲实验室医学外部质量评价方案 (EQALM)、美国病理学院 (CAP)( 注：二者均为外部质量保证专业试验组织 ) 和美国食品和药品管理局 (FDA)、 EU委员会 ( 注：这二者均为管理体 ) 以及参考物质的提供者，欧洲参考物和参考测量研究院联合研究中心 (EU-JRCIRMM)、美国标准和技术研究院 (NIST) 、日本保健技术学组织 (HECTEF)的工作。建立了两个工作组，一组涉及参考测量程序和参考物，另一组涉及参考测量试验室网络，以解决上述问题。2.3医学实验室溯源：溯源性的执行过程由体外诊断产品生产商负责。某一

20、医学实验室单凭自身的能力难以完成众多项目的性能评估。然而，实验诊断试剂的编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 8 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101生产商对其检测系统性能已经做了完整的评价并已被管理部门 （ 如美国的 FDA）认可。得到 FDA认可的检测系统被用户完全照厂商要求执行检验，生产商承担责任。行政管理部门对这些项目在医学实验室中的使用属“免检”。欧洲诊断产品

21、认证机构对实验诊断试剂制造商明确要求，在推广和服务中，必须做到：告诉用户，只有使用公司提供的系列产品，才能得到审批认可的可靠结果。欲使医学实验室的测量结果具有溯源性， 最直接、 简便的途径是进入 “不间断的比较链” ，即溯源链。使用具有“物质互换链”的校正物，只有当用常规校正物校准仪器 （ 例如：测定值与给定值的偏差 2%）后，使用常规方法测定人的样品的结果 x与用参考方法测定结果 y之间不存在统计学上的显著差异才能表明结果具有溯源性。据此推荐使用检测系统，这是一个好的途径。完成一个项目检验所涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序、质量控制、保养计划 （ 若为手工操作必须包括具体操作人员 ） 等的

22、组合称为检测系统。世界上有许多检测系统，例如：Roche， Beckman， Abort ， Olympus， Sysmex等生产商，他们都有各自制造的仪器和与其配套使用的试剂、校准品、操作程序、质量控制和保养计划组成的检测系统。有的还参加了有证参考物的研制与制备。他们都有自己的主 （master） 校正物和常规校正物，并已得到管理部门的批准。医学实验室选用这样的检测系统并进行定期校准写成文件就可以认为进入了溯源链，这样的结果就具有溯源性了。事实证明这种途径在全世界“改进超时空试验结果的可比性”上取得了满意的结果。一个校准品只能用于与其配套的检测系统。专门供应试剂盒的厂商为使用其产品适用于各种

23、类型、型号的仪器也供应校准品。对于另一新的检测系统，如原仪器、方法、检测程序加上新试剂和新校准品，只要按规定方法校准原系统，就可保证病人样本的检测结果和原配套检测系统的病人样品结果具有可比性。这样就产生了具有多个校准值的校准品。但同一个校准品被用于不同的系统时必须有不同的校准值，因校准值是专用的。决不能一个校准品、一个校准值、一种试剂盒用于各种不同仪器；也不能把一个校准品、一个校准值与任意的试剂盒组合而被用于任何系列的仪器；失去校准值的专用特性，将使病人的检测结果不可靠，也不具有溯源性。对于医学实验室中的常规实验室，选择一个合格的测量系统从而达到溯源性是合理的、简捷而有效的。但由于经济上或其他

24、原因选择不配套的试剂或仪器就必须说明：仪器的牌号、型号、公司的试剂及产品号、校准品的来源及其产品号、操作程序和质控程序、保养和维修计划、必须经过实验表明该检测系统的不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、分析灵敏度、分析特异性、参考范围。否则不具备溯源性。如若要替代某一原检测系统中的试剂也必须出具上述分析性能的资料，只有符合要求后方能具有溯源性。国内体外诊断产品生产商生产配套的试剂盒和校准品并与市场上的仪器相匹配从而进入编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP

25、_04页码：第 - 9 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101溯源链。这是体外诊断产品制造商的责任。体外诊断产品生产商欲发展并获取效益就应提供溯源性，这也是检验医学的需要。医学实验室还可采用参加适当的实验室间比对计划，以其他程序进行检验或校准以及进行比率型或倒易型的测量来证实其溯源性。参考文献：1中国实验室国家认可委员会技术委员会医学分委员会 .医学实验室质量管理与认可指南， 2004： 92王毓三主编医院检验科建设管理规范 南京 . 东南大学出版社， 2003： 11683卫生部临床检验中心临床实验室质量管理 北京： 200

26、0： 1231编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时 间： 20180101时 间： 20180101时 间： 20180101月亮县 中医院项目文件编号： YCXZYYJYK_SOP_04页码：第 - 10 - 页，共 14 页检验科检验量值溯源 SOP版本：第 3 版，第 1 次修订生效日期： 20180101SOP_04-2 血细胞分析仪的溯源及国际参考方法一、目的：确保仪器正常运转与结果的准确性，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：检验项目的量值溯源。三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1.血细胞分析 ( 红细胞、白细胞、血小板 )国际参考方

27、法：红细胞和白细胞的国际参考方法制定于 1994年。检测系统中的所有血液流路部分都采用加工后多年不会变形的石英玻璃部件，定量部使用水银压力计。为了最大程度减少流体检测中的误差，设计尽可能简单，检测原理为电阻法。根据检验原理，需要对全血样品进行数万倍的稀释，为了最大程度减少稀释过程中的误差，要使用 A级的精密烧瓶和精密吸管。仪器对同时通过检测部位的细胞不具有修正功能，但可对一系列不同稀释比例的标本进行校准。利用不同浓度的标本同时通过检测部位的细胞数的比例不同的原理，以连续稀释的检测结果计算出无限稀释倍率浓度时的检测结果 ( 在该浓度下，可认为没有细胞同时通过检测部 ) ，并将该结果确定为所测标本

28、的“真值”。血小板的国际参考方法于 2001 年确定。在此之前曾对各种方法经过长期的讨论，由于各种方法各有优劣都没有得到通过， 新的参考方法是采用流式细胞术以单克隆抗体 (CD41和 CD6 1)对全血进行识别，得到红细胞总数和血小板总数的比率。再根据血小板和红细胞的比率，乘以红细胞参考方法所检测得到的红细胞真值来间接计算出血小板的真值。2.血红蛋白的定量和 PCV国际参考方法：血红蛋白的定量是血细胞分析项目之中最早确立国际参考方法的指标，随后又进行过多次改定。检测时使用商品化的分光光度计，采用氰化高铁血红蛋白法进行检测。检测结果的准确度除了取决于分光光度计的质量，还有赖于检测所用的石英比色杯的精度，标本的稀释精度，以及是否根据参考方法中的规定对试剂进行调整，是否按照规定使用清洁的过滤网对标本进行测试前的过滤等。在过去，实验室中一直以精密毛细管法作为 PCV的参考方法，但是由于精密毛细管的一端需要封入黏