培养基模拟生产验证方案.docx

1、培养基模拟生产验证方案 培养基模拟生产验证 1概述：对无菌灌装过程进行胰酪胨大豆肉汤培养基模拟灌装试验，通过对其污染率的测试，来确认预充式无菌灌装过程和各种规程防止微生物污染的水平能达到可接受的合格标准。2目的与范围：2.1无菌生产环境、人员消毒卫生状况与产品无菌保证的验证。2.2用棉球擦拭的方法验证设备设施清洁消毒效果。2.3验证的试验过程中监测底塞、卡式瓶的无菌性，使之始终符合卡式瓶生产工艺要求。2.4验证除菌过滤的可靠性，保证生产出合格的中间体半成品。2.5验证物料转移过程中物料的无菌性，使之满足卡式瓶生产工艺需要。2.6模拟无菌灌装试验来考察灌装操作过程微生物的污染率不大于0.1%，进

2、而证明灌装工艺条件符合无菌灌装的工艺要求。2.7通过轧盖密封后瓶内抽真空进行气密性测试，证明与轧盖相关的工艺条件符合卡式瓶生产工艺要求。3职责：3.1相关生产人员必须依照本规程进行生产操作。3.2生产部门负责人及QA负责指导与监查本文件的执行。3.3文件的修定和定期审核应由生产部门负责人员和QA负责。3.4所有参与本验证过程的生产人员都必须依照本方案进行生产操作。3.5验证过程应严格按照规定的内容进行，若因特殊原因确实需要变更时，应填写验证方案变更申请及批准书（附表1），报验证委员会批准。4参考文献：4.1 Validation of aseptic filling for solution

3、drug product 4.2药品生产验证指南（2003版）5设备及仪器：序号设备或仪器名称使用数量用途164kg磅秤1秤量体积26kg、3 kg天平1秤量培养基3卡式瓶分装机、西林瓶分装机1分装培养基4蒸汽灭菌柜1灭菌5卡式瓶洗瓶机、西林瓶洗瓶机1洗瓶6卡式瓶和西林瓶隧道灭菌机1消毒7胶塞清洗机1烘干、消毒850L搅拌桶2盛装培养基9搅拌棒1搅拌10配制罐11配制11配制罐21配制12套筒过滤器1过滤13蠕动泵1泵液体1420L不锈钢桶2容器1530L不锈钢桶3容器162L烧杯2容器1710L不锈钢桶2容器6物料序号物料名称1注射用水2蒸馏水3管制瓶、卡式瓶4胶塞5铝盖6胰酪胨大豆肉汤77

4、5%乙醇7验证内容7.1判断标准产品无菌性的可信限：95%产品允许污染的概率：警戒限为0.05%，可信限为0.1%7.2培养基配制、灭菌和过滤：7.2.1 按30g胰酪胨大豆培养基溶于1L蒸馏水的比例配制适量的培养基溶液，搅拌并加热溶解或直接量取70以上的蒸馏水，搅拌溶解后，将盛放培养基的桶在蒸汽灭菌柜内121灭菌15分钟，待灭菌后自然冷却7.2.2 配制用于验证分装生产线的无菌性的培养基溶液体积应满足灌装3000支以上的量（一般灌装5000支左右）。7.2.3冷却后用已灭菌的0.22um的套筒过滤器过滤于已灭菌的相应容量的不锈钢桶中。注：过滤过程应遵守无菌操作。7.3培养基无菌性试验：将用于

5、模拟灌装的胰酪大豆培养基另外用50ml试管配制4管（20ml/管），在121灭菌15分钟，盖塞、封口后将其中2管在2025培养7天，另外2管在3035培养7天。7天内若各试管中应无任何微生物生长，则判断合格。结果填于附表27.4培养基微生物生长性能试验：将配制好的灭菌培养基分装于10支50ml 试管中（20ml/管），在其中支管内接种的枯草杆菌，和1支不接种枯草杆菌的TSB试管（空白对照）同时在3035下培养7天，在另支试管内接种的白色念珠菌，和1支不接种白色念珠菌的试管（空白对照）同时在2025培养天，培养过程中每天观察微生物生长情况，七天内若50%以上接种的各试管的培养基应出现明显的所接种

6、的微生物的生长，空白试验无菌生长，则判断合格。结果填于附表3。7.5无菌灌装试验：7.5.1无菌灌装所用的瓶和塞塞经灭菌处理后，进行模拟灌装、轧盖。每瓶和托盘都需标号，每盘上记录起始时间和结束时间。整个过程应严格遵守相应的无菌灌装生产的标准操作规程。模拟灌装生产的全部样品先在2025培养天，再在3035下培养7天，一半倒置培养，一半正立培养。培养过程中应每天观察微生物生长情况，若发现污染应明确记录瓶号、瓶数。7.5.2阴性对照：灌装过程中随机抽取2瓶不进行设备灌装直接手动加底塞、灌装培养基、封口，与试验样品同条件培养作为阴性对照。7.5.3随意地取出8支灌有培养基的灌装瓶，向挑选出来的4支瓶内

7、逐个注入0.1ml的枯草杆菌混悬液（每0.1ml中CFU少于100个），在3035下培养7天，向挑选出来的另4支瓶内注入白色念珠菌混悬液（每0.1ml中CFU少于100个），在2025培养天。如果在7天内，50%以上接种卡式瓶的培养基里都出现繁殖现象，则判为合格。对瓶内的繁殖情况要进行目检，对污染的卡式瓶要点清数量（如有污染菌的话）。污染了的卡式瓶必须仔细检查是否有瓶、塞、盖的损坏情况。7.5.4试验结果评价 评价无菌模拟灌装试验结果的主要指标之一是微生物污染率，其计算方法如下：污染率水平=微生物生长的瓶数/（总分装瓶数-破损瓶数）100%如果在14天的培养期内，其污染率大于0.1%，则应立即

8、停止生产，调查污染产生的原因应检查铝盖、底塞的密封情况，若有破损应记录并检查其破损原因。原因找到后立即重复进行无菌灌装模拟试验。重复模拟灌装试验连续进行3次，2次均符合要求才可以认为此灌装工艺过程符合无菌灌装要求。7.5.5灌装原始纪录作为附件，试验结果如附表4填写7.6内包材的无菌试验a)卡式瓶无菌试验：试验前取灭菌后灌装前2支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时在振料器上取2支作无菌检查，试验结束后在振料器上取2支作无菌检查。b)底塞无菌试验：底塞灭菌卸料时取2支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时理塞盘上取2支作无菌检查，试验结束后在理塞盘上取2支作无菌检查。c) 复合铝盖无

9、菌试验：灭菌卸料时取2支作无菌检查，试验过程中每灌大约1000瓶时在理复合盖盘上取2支作无菌检查，试验结束后在理复合盖盘上取2支作无菌检查。d)判断标准：阴性e)按附表5填写结果。7.7人员：7.7.1参加人员：7.7.2人员培训：查阅操作人员个人培训档案，确认上岗操作人员已按培训计划进行基本生产技术培训,并进行人员净化消毒效果的检查。c)判断标准：上岗操作人员已经接受了生产技术培训，能按规程进行人员物料净化对设备设施正确清洗消毒能规范操作，减少人员对环境造成污染。d)人员培训确认结果按下表填写：操作人员培训情况能否按规程进行人员物料净化对设备设施正确清洗消毒能规范操作，减少人员对环境造成污染

10、结论确认人/日期7.7.3人员无菌监测：人员更衣完毕用棉球擦拭法在手、前胸处取样作无菌性试验。取样时间分别在试验前、试验过程中、试验结束用棉球擦拭法各取样1次检查操作人员上述部位细菌总数，按下表填写检验结果：试验时间段项目手部前胸判断标准结果判定备注检验人/日期复核人/日期试 验 前细菌细菌2个霉菌1个霉菌试 验 中细菌霉菌试 验 后细菌霉菌7.8生产环境监测7.8.1设备设施表面的微生物数量7.8.1.1判断标准：设备设施表面的微生物数量应符合相对应表面的微生物限度要求名称设备设施细菌/m3细菌/m3与产品接触的表面无无其它表面527.8.1.2试验方法：用棉球擦拭法在试验开始前、中、后，在

11、指定的取样点取样作无菌检查。用灭菌的生理盐水润湿棉球，充分擦拭生产区最难清洁的部位，棉球取样面积为25cm2/个。然后棉球放入带有灭菌的生理盐水的三角瓶中，充分振摇，然后进行微生物培养。7.8.1.3将结果填入附表67.8.2HVAC状况监测7.8.2.1试验方法：序号试验项目试验方法判断标准1温度与相对湿度灌装生产开始前，并在灌装试验过程中每隔20分钟检查并记录一次，卡式瓶灌装间、配制间、存料称量间的温度，相对湿度。温度：18-26相对湿度：45-65%2房间相对压差每隔20分钟在空气压差表上读取并记录一次各个房间的空气压差。无菌生产区自甲醛消毒后至灌装生产结束之前，应始终对周围的其它生产区

12、域保持相对正压。3层流罩下粒子计数试验前（静态）在卡式瓶灌装间、配制间的垂直单向流区用粒子计数器测定空气中悬浮粒子数并记录。层流罩下的空气质量应符合100级洁净空气要求。0.5um的粒子：3500/m35um的粒子：无4无菌生产区室内粒子计数试验前（静态）在卡式瓶灌装、存料间用粒子计数器测定空气中悬浮粒子数，并记录。无菌生产区室内空气质量应符合万级洁净空气要求0.5um的粒子：350000/m35um的粒子：2000/m35空气中微生物按洁净度标准操作规程中规定的取样方法及检验方法在存料称量间、配制间、卡式瓶灌装间、无菌走廊试验前和试验过程中用沉降法测定空气中的微生物数。空气中所含微生物的数量

13、应符合相对应的区域要求。沉降菌数（沉降法）/皿：100级洁净区为1个；10000级洁净区3个。 7.8.2.2将结果记录于附表77.9物料转移7.9.1检查方法：工器具、洁服处理后的转移：衣服、不锈钢桶、玻璃容器用棉球擦拭法在卸料、转移后取样作无菌检查。用灭菌的生理盐水润湿棉球，充分擦拭，棉球取样面积为25cm2/个。然后棉球放入带有灭菌的生理盐水的三角瓶中，充分振摇，然后进行微生物培养。灌装前药液的无菌转移：将注射用水从配料桶周转到配制罐，此时从配制罐内取水样，无菌培养。然后由无菌区周转到十万级再由十万级周转到卡式瓶的无菌区，此时从配制罐内取水样，无菌培养。具体详见培养基模拟生产验证报告。内

14、包材的无菌转移：将灭菌后的底塞、卡式瓶在卸料、转移后取样作无菌检验，底塞外包装作擦拭试验。灌装用物料的无菌转移：输送药液所用硅胶管和灌装针头在卸料转移后取样作无菌检查。用0.9%无菌氯化钠溶液100mL冲洗内壁，收集冲洗液，（注：用0.9%无菌氯化钠溶液100mL冲洗后的硅胶管和灌装针头，试验结束后再用注射用水冲洗。）按无菌检查法中的薄膜过滤法检查。7.9.2判断标准：各种物料在卸料后及转移后均应无菌。按附表8填写测试结果8玻瓶的处理：已灌装培养基的玻瓶在验证结束后全部销毁。9缺欠项及纠正措施9.1目的建立缺欠项及采取的纠正措施，使验证规范化、标准化和程序化。9.2内容9.2.1按附表9格式总

15、结缺欠项及纠正措施9.2.2按附表10格式填写缺欠项纠正报告10验证结果评定与结论验证小组根据验证情况对验证结果进行综合评审，做出验证结论，按附表11填写验证总结报告，由验证委员会做出是否批准的决定及负责发放验证证书（见附表12）。a) 验证试验是否有遗漏？b) 验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因，依据以及是否经过批准？c) 验证记录是否完整？d) 验证试验结果是否符合标准要求？偏差及对偏差的说明是否合理？是否需要进一步补充试验？验证方案变更申请及批准书附表1验证方案名称：方案编号：验证方案预变更的项目：变更的理由及依据：修改后方案：评估变更后对验证的影响：不会影响验证过程 影响验证过

16、程 影响验证进度起草人/日期：部门经理/日期：变更的审批： 同意变更 不同意变更批准人/日期：培养基无菌性试验结果附表2培养基瓶号培养日期培养温度（）观察结果观察日期观察人1234判断标准应无任何微生物生长结论结论人/日期培养基生物生长性能试验结果附表3类别试管号培养温度（）观察结果1234567枯草杆菌空白1234白色念珠菌空白1234观察日期观察人判断标准空白试管应无菌生长，其它全部样品试管中均应有明显的微生物生长 结论结论人/日期灌装培养结果附表4培养基名称灌装日期灌装瓶数观察日期/时间培养温度（）观察结果观察人阴性对照阳性对照灌装样品判断标准：可信限在95%的要求下，合格限：污染率应0

17、.1%；警戒限:0.05%计算公式：污染率=95%可信限的控制上限/模拟分装的瓶数100%结论：结论人/日期试验过程监测记录表附表5样品数取样位置第一支第二支空白结果判定备注出瓶端的卡式瓶无菌试验(试验前)直接培养法出瓶端的卡式瓶无菌试验(试验过程中)直接培养法出瓶端的卡式瓶无菌试验(试验后)直接培养法桶内底塞的无菌试验（卸料时）直接培养法理塞盘上底塞的无菌试验（试验过程中）直接培养法理塞盘上底塞的无菌试验（试验后）直接培养法桶内复合盖的无菌试验（卸料时）直接培养法理盖盘上复合盖的无菌试验（试验过程中）直接培养法理盖盘上复合盖的无菌试验（试验后）直接培养法检验员/日期复核员/日期：序号擦拭位置

18、测试时间判断标准擦拭结果备注1灌装机灌装工位台面试验前CFU5个薄膜过滤法试验过程中CFU5个试验后CFU5个2灌装机上的理塞盘试验后阴性直接培养法3灌装机底塞料斗试验后阴性直接培养法4灌装机复合盖料斗试验后阴性直接培养法5灌装机加塞定位圈试验后阴性直接培养法7出料托盘试验后CFU2个薄膜过滤法8灌装机传送转盘试验后CFU2个薄膜过滤法9灌装机加塞推杆试验后阴性直接培养法10灌装机复合盖轨道试验后阴性直接培养法11灌装机复合盖锁紧试验后阴性直接培养法12出瓶振荡盘试验后阴性直接培养法14电子天平内表面试验前CFU2个薄膜过滤法15转移桶试验前阴性直接培养法试验后阴性直接培养法16灌装间墙面试验

19、前CFU5个薄膜过滤法试验后CFU5个17灌装间地面试验前CFU7个薄膜过滤法试验后CFU7个检验员/日期复核员/日期：设备设施表面的微生物数量附表6HVAC监测记录附表7-1试验项目房间名称测试时间测试结果结果判定温度（）相对湿度温度与相对湿度灌装间配制间存料称量间空气中相对压力气闸与十万级走廊的相对压差灌装间与气闸之间的相对压差配制间与走廊之间的相对压差检验员/日期复核员/日期：尘埃粒子检测试验项目测试区域测试位置测试点数测试结果判定结果0.5m5m层流罩下粒子计数灌装间百级层流罩内配制间百级层流罩内无菌生产区室内粒子计数灌装间层流罩外万级区配制间层流罩外万级区测试人/日期 复核人/日期H

20、VAC监测记录（空气沉降菌） 附表7-2测试区域洁净级别点数结果判定测试人/日期复核人/日期灌装间（试验前）万级2局部百级12灌装间（试验过程中）万级2局部百级12配制间（试验前）万级2局部百级12配制间（试验过程中）万级2局部百级12存料间（试验前）万级2存料间（试验过程中）万级2更无菌外衣间（试验前）万级2更无菌外衣间（试验过程中）万级2物料转移无菌监测记录一附表8-1序号擦拭位置测试时间判断标准擦拭结果备注1装衣服外袋卸料后阴性转移后阴性装衣服外袋卸料后阴性转移后阴性2汤桶卸料后阴性转移后阴性汤桶卸料后阴性转移后阴性3玻璃容器卸料后阴性转移后阴性玻璃容器卸料后阴性转移后阴性4底塞外包装卸

21、料后阴性转移后阴性底塞外包装卸料后阴性转移后阴性6复合盖外包装卸料后阴性转移后阴性复合盖外包装卸料后阴性转移后阴性7将周转罐转到无菌配制间后取水样阴性由结晶罐周转到周转罐内无菌水水样阴性推到无菌区灌装后取样阴性取结晶罐内水样阴性测试人/日期复核人/日期物料转移无菌监测记录表二附表8-2序号样品名称取样时间细菌霉菌空白结果判定测试人/日期复核人/日期1硅胶管卸料后转移后2灌装针头卸料后转移后3底塞卸料后转移后4复合盖卸料后转移后缺欠项及纠正措施报告附表9工艺名称欠缺项目纠正措施总结人：日期：批准人：日期：欠缺项纠正报告附表10欠缺项目纠正结果总结:结论总结人:日期批准人：日期：验证总结附表11工

22、艺名称 评定项目评定结果验证试验是否有遗漏？是/否验证实施过程中对验证方案有无修改？是/否修改原因，依据以及是否经过批准？原因及依据：是否经批准：是/否验证记录是否完整？是/否验证试验结果是否符合标准要求？是/否偏差及对偏差的说明是否合理？是/否是否需要进一步补充试验？是/否确定验证周期: 验证周期为：验证小组成员：验证总结：总结人：日期：验证证书附表12工艺名称验证报告审核结果按照方案要求,该验证已经完成,经审核:结果符合方案的要求, 合格 结果不符合方案的要求, 不合格 执行负责人:日期:审核人:日期:批准人:日期:分装系统培养基分装验证记录：1.0物料单:序号物料名称规格厂家领料量领料人/时间2.0设备：序号品名状态检查人/时间磅秤天平洗瓶机分装机灭菌隧道蒸汽灭菌柜配制罐平板过滤器套筒过滤器3.0器具：序号品名状态检查人/时间1不锈钢桶2搅拌棒3烧杯4.0配料、灌装间的熏蒸消毒与监测： 熏蒸用的溶液： 体积： 熏蒸前的室内温度： 相对湿度： 开始时间： 结束时间： 开万级空调时间： 开百级时间： 操作人：