板蓝根颗粒微生物限度检查方法验证方案.docx

1、板蓝根颗粒微生物限度检查方法验证方案. 板蓝根颗粒微生物限度计数方法 适用性验证方案 VOL-QWX-012 方案编号： 月 年 . . 验证方案审批表 验证方案名称板蓝根颗粒微生物限度计数方法适用性验证方案 验证方案编号VOL-QWX-012 方案起草人 起草日期 方案审核部门审核人 审核日期 审核意见 室 化 验 质量部 批准意见 人 准 批 批准日期 执行日期 . . 板蓝根颗粒微生物限度计数方法 适用性验证方案目录 1. 概述 2. 目的 3. 依据 4. 范围 5. 验证小组人员及职责 6. 验证实施条件 7. 合格标准 8. 验证方法 9. 验证结果 10. 验证报告 . . 1.

2、概述 1.1样品资料 品名： 板蓝根颗粒 标准依据：中国药典2015版四部通则 批号： 试验日期： 1.2处方 ：板蓝根颗粒为中国药典2015版一部中药成方制剂法定标准。由板蓝根制成，辅料为：蔗糖、糊精。 1.3 功能主治：清热解毒，凉血利咽。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥；急性扁桃体炎见上述证候者。 1.4 有效期：18个月。 1.5依据中国药典2015版四部通则“非无菌不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准”，根据剂型与产品处方判断，板蓝根颗粒微生物限度检查内容包括需氧菌总数计数、霉菌和酵母菌总数计数，控制菌检查大肠埃希菌；拟采用“平皿法”进行微生物计数方法检查，采用“常规法”进行控

3、制菌检查。 2.目的：确认所采用的方法适用于该产品的微生物计数和控制菌检查，以确保测定方法的可靠性，确保检验结果的准确性。若检验程序或产品发生变化，可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。 3.依据 中国药典2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查微生物计数法” 中国药典2015年版四部“非无菌产品微生物限度检查控制菌检查法” 中国药典2015年版四部“非无菌产品微生物限度标准” 4.范围：本验证方案适用于？制药有限公司板蓝根颗粒微生物限度计数方法的适用性试验。 5. 验证小组人员及职责 姓 名 所在部门 职 责 6. 验证实施条件 6.1 检验用水：公司制备的经检验合格的纯化水。

4、. . 6.2检验仪器设备：验证涉及的检验仪器（设备）与检验方法，经过确认或再确认后合格。所用检验设备如下： SPX-250型生化培养箱 PYX-DHS-400型隔水式电热恒温培养箱 101-2型电热鼓风干燥箱 DHP-9272型恒温培养箱 DHP-9032型恒温培养箱 YX-400型医用双层普型不锈钢双层立式电热蒸汽压力消毒器 DSX-280KB24 立升手提式压力蒸汽灭菌器 GSP-9080型隔水式电热恒温培养箱 6.3 验证培养基：验证所使用的培养基经过培养基的适用性检查，结果符合药典要求。所用培养基如下： 名 称 来 源 批 号 胰酪大豆胨琼脂培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 麦康凯液体培

5、养基 麦康凯琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培养基 6.4 验证菌株：称名 源 来 号 批金黄色葡萄球菌菌株 枯草芽孢杆菌菌株 铜绿假单胞菌菌株 白色念珠菌菌株 黑曲霉菌菌株 大肠埃希菌菌株 7. 合格标准在需氧菌、霉菌及酵母菌计数的三次独立平行试验中，试验组菌落数减去供试品对照7.1 20.5组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在范围内。在控制菌检查的试验中试验组应检出试验菌，阳性对照组应检出试验菌，阴性对照组7.2 不得检出试验菌。. . 8. 验证方法 8.1 菌液制备 所有使用的菌株均为西林瓶包装的定量菌株。定量菌株适用于培养基适用性检查、控制菌检查、促生长试验、灵敏度检查等。使用前将金黄

6、色葡萄球菌株西林瓶、枯草芽孢杆菌株西林瓶、白色念珠菌株西林瓶、铜绿假单胞菌菌株、黑曲霉菌株西林瓶从冰箱中拿出平衡至室温，加入含有11ml无菌生理盐水的试管中，盖上瓶盖，静置约30s，震荡10s，吸取1ml加至适宜培养基中培养，即得含量为10100cfu的菌落。菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在28，可在24小时内使用。 8.2 菌液的检验 8.2.1取上述金黄色葡萄球菌株、枯草芽孢杆菌株、大肠埃希菌菌株、铜绿假单胞菌菌株的稀释液各1ml，分别用45的胰酪大豆胨琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，3035培养5天，计数，应为10100cfu/ml，结果见表1。 8.2.2取

7、上述白色念珠菌菌株、黑曲霉菌株的稀释液各1ml，分别用45的沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml注皿，各平行测定两皿，2025培养7天，计数，应为10100cfu/ml，结果见表1。 8.3需氧菌、霉菌及酵母菌计数方法适用性试验 8.3.1供试液制备：取供试品10ml，加ph7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，制成供试液，作为1：10的供试液。 8.3.2试验组：取供试液分别按1ml/皿加入平皿后，加入上述10100cfu的试验菌，立即倾注至中国药典2015版规定的琼脂培养基中，置规定的温度培养35天，观察结果。 8.3.3菌液组：除不加供试液外，同试验组测定方法。 8.3.4供试品对照组：除

8、不加菌液外，同试验组测定方法。 8.3.5将以上平皿需氧菌置3035培养不超过5天，霉菌、酵母菌置2025培养不超过7天，并在5天和7天分别进行计数。 8.3.6回收比值的计算： 试验组的菌落数供试品对照组菌落数 菌液对照组菌落数 8.3.7实验结果：见表28。 8.4 控制菌计数方法适用性试验 8.4.1供试液制备：同“需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验”供试液制备。 . . 8.4.2试验组：取供试液10ml加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，加入上述大肠埃希菌菌液，置3035培养24小时后，取培养物1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，4244培养2448小时后，取麦康凯液体培

9、养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，3035培养1872小时。 8.4.3阴性对照组：以等体积的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液，除不加菌液外，其他操作同试验组。 8.4.4阳性对照组: 以等体积的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液，其他操作同试验组。 8.4.5供试品对照组：取供试液10ml加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，置3035培养24小时，除不加菌液外，其他操作同试验组。 8.4.6实验结果：见表9。 9.验证结果 表1、试验用菌液检查（菌落计数单位：cfu） 试验 次数 计 数 方 法 大肠埃 希菌 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢 杆菌 铜绿假 单胞菌白色念珠

10、菌 黑曲霉菌 1 平皿法 平均 2 平皿法 平均 3 平皿法 平均 表2、白色念珠菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu，沙氏葡萄糖琼脂培养基） 方法试 验 数次 菌液组 试验组 供试品对照组 比值 菌落数 平均 菌落数 平均 菌落数 平均 平皿法1 2 3 . . 表3、黑曲霉计数方法的验证（菌落计数单位：cfu，沙氏葡萄糖琼脂培养基） 方法 试验 数次 菌液组试验组 供试品对照组 比值菌落数 平均 菌落数 平均菌落数 平均 平皿法1 2 3 ，胰酪大豆胨琼脂培养基）、金黄色葡萄球菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu表4方法 验 试 数次 菌液组 试验组 供试品对照组 比值菌落数 平均 菌

11、落数 平均 菌落数 平均平皿法 1 2 3 cfu，胰酪大豆胨琼脂培养基）表5、枯草芽孢杆菌计数方法的验证（菌落计数单位： 方法试 验 次 数菌液组 试验组 供试品对照组 比值菌落数 平均 菌落数平均 菌落数 平均平皿法 1 2 3 ，胰酪大豆胨琼脂培养基）、铜绿假单胞菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu表6方法 验 试 数次 菌液组 试验组 供试品对照组 比值菌落数 平均 菌落数 平均 菌落数 平均平皿法 1 2 3 ，胰酪大豆胨琼脂培养基）、白色念珠菌计数方法的验证（菌落计数单位：cfu表7方法 试验 数 次菌液组 试验组 供试品对照组 比值 菌落数 平均 菌落数 平均 菌落数 平均 平皿法1 2 3 . . 表8、黑曲霉计数方法的验证（菌落计数单位：cfu，胰酪大豆胨琼脂培养基） 方法 验试 数次 菌液组 试验组 供试品对照组 比值菌落数 平均 菌落数 平均 菌落数 平均平皿法 1 2 3 、控制菌检查方法的验证结果表9 控 制菌 次数 方 法 试验组 阴性对照组阳性对照组 供试品组大肠埃希菌 1 2 3 -”表示试验结果未检出控制菌。注：表中“+”表示试验结果检出控制菌；“ 验证总结报告10. . . 验证总结报告 品名： 批号： 总体评价及验证结论： 日期：评价人：门 部 批准人： 日期： 质 量 部 验证总负责人 .