ABO血型鉴定标准操作程序.docx

1、ABO血型鉴定标准操作程序SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：血型鉴定。三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型 红细胞上抗原 血清中抗体 抗A 抗BO 无 抗A、抗B A A 抗B + B B 抗A +AB A、B 无 + +

2、2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTAK2干粉）中，混匀后备用。3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者 35%的红细胞盐水悬液。3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B标准血清(l) 100 100 100受检者RBC悬液(l) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc定型红细胞(l) 50 50 50受检者血清(l) 100 100 1003.2.4混匀。3.2.5 以1000r/min离心1min。3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶

3、血和/或凝集。3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞 受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型 Ac Bc Oc+ + A + + + B + O + + + + + AB 3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误 血样试管及玻片混淆 书写错误 红细胞过浓或过淡 未注意样品溶血现象 漏加试剂 未按试剂说明操作 试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效 离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因 抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。 红细胞抗原：亚型、血型物质过剩

4、、类B等特殊物。 蛋白质或血浆：巨球蛋白、多发性骨髓瘤、恶质病、血浆扩容剂的应用等。 其它：缗钱状排列、多凝集现象、冷凝集、额外凝集素、细菌污染等。（3）正反定型结果不一致的解决办法如发现AB0正反定型结果不一致，首先要重复作试验1次。严格执行操作规程使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题必须进一步研究。初步的检查步骤包括：1.另从受检者采取1份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。2.将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗-A、抗-B、抗-A1,抗-A+B及抗-H 做试验可以得到其它有用的信息。3.对受检红细胞作直接抗球蛋白试

5、验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。4.用A1、A2B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗-1，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。5.如试验未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4放置30min，用镜检核实。6.如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗-A或抗-B血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A、B、H血型物质测定。后者只对80%HAB分泌型的人有用。7.如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水1滴，混和，往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水1滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免血清中抗体被稀释。8.如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法

6、进行鉴别：(1) 观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。9.如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。多凝集红细胞具有以下特点：(1) 能被人和许多家兔的血清凝集，(2) 能与大多数成年人的血清凝集,不管有无相应的同种抗体。(

7、3) 不被脐带血清凝集。(4) 通常不与自身的血清凝集。(5) 如有条件可用外源凝集素加以鉴别。3.5 A1和A2亚型鉴定（1）原理：根据ABO血型的血清学特点，A型和AB型可分为A1、A2、A1B和A2B 4种亚型。抗-A(B型)血清中含有抗-A和抗A，两种抗体，抗A可以凝集所有A型和AB型红细胞，而抗A1只能与一部分A型和AB型红细胞反应。据此凡与抗-A1反应者被指定为A1或A1B型；不与抗A1反应、而与抗-A反应者被指定为A2或A2B型。（2）试剂与材料1.抗A1分型血清；2.受检者5%红细胞盐水悬液；3.已知A1和A2型5%红细胞盐水悬液。（3）方法1.取洁净玻片两张，一张供测定受检者

8、红细胞用另一张供对照用。后者标明A1和A2 。2.将抗A1分型血清分别滴在受检者玻片上和对照的A1和A2部分各1滴。3.分别将受检者红细胞悬液以及对照用A1和A2红细胞悬液1滴滴在上述抗A1血清上用玻棒将血清和红细胞悬液混匀。4.徐徐转动玻片，在室温下反应10min后观察结果。5 如A1对照红细胞凝集而A2对照红细胞不凝，则受检者红细胞凝集者为A1,不凝者为A2。6. 试管法：受检者RBC A1RBC A2RBCRBC(l) 50 50 50抗-A1(l) 100 100 100*A抗原或B抗原减弱，则受检RBC做吸收放散试验吸收试验：受检者压积RBC与抗-A或抗-B等量混合，41小时，测抗血

9、清吸收前后效价变化：A亚型红细胞吸收强度A1A2A3AxAm放散试验（热放散法）：取吸收后的压积RBC与1/2容积的生理盐水混合，置56水浴10分钟，离心得到的上清液即为放散液，将放散液用2%A型和B型RBC鉴定抗体。3.6 其他A亚型鉴定（1）原理：A型红细胞除A1和A2外，有时可见一些与抗A呈弱反应、甚至不反应的“弱A”变异体，一般也称为A亚型。国内报告的有A3、Ax及Am。受控于一些罕见的等位基因，其频率在几千分之一到几万分之一。A3、Ax和Am的鉴定，主要根据各自的特点，相互比较，尚无特定的抗血清加以区别。（2）方法红细胞与血清的反应 血清中 分泌型唾液 吸收能力 放散能力亚型 抗A

10、抗Al 抗A+B 含抗A1 含血型物质A1 4+ 3+ 4+ - A、H 强 弱A2 2+ - 3+ 一、+ A、H A1A3 MF - MF -、+ A、H A1Ax 一 一 十 常为+ A*、H A1Am 一 一 一 一 A、H 弱 强注：MF=混合凝集外观；*极少量A物质。3.7 B亚型鉴定：目前已检出的B亚型较A亚型少，B亚型的命名一般和A亚型命名相互平行，比如血清学特点类似于A3的B亚型称为B3，类似Am的称为Bm，类似Ax的称为Bx等。关于是否存在B2亚型,尚无定论。3.8 红细胞血型抗体筛选及鉴定：红细胞血型抗体鉴定是血型抗体筛检后的进一步检查，目的是了解血型抗体的类别。（1）配

11、组红细胞的制备：配组红细胞(panel cells)又称谱细胞，一般由较大血液中心或输血研究所提供。其来源都是经详细挑选和广泛检测血型抗原的0型供血者，为了供血的方便，血液中心的工作人员都应参加，以提供所需红细胞的血型抗原。供血者定期放血，或一次放血后冰冻甘油保存。（2）配组红细胞的型别：配组红细胞所备有的红细胞表型，应包括：Rh，Kidd，MNSs，Duffy，Diego，Xg，Kell，Lewis，P及Lutheran等血型系统，为了提供Rh系统中复合抗体(如抗-Ce)与混合抗体(如抗-C+抗-e)的鉴定依据，谱细胞中Rh基因型也应加以标明(如R1R1、R1R2)。对低频率及高频率抗原是阴

12、性还是阳性应加以注明，如有条件对其它特殊抗原可以另列一栏说明。一般来说，一套配组细胞应尽可能包括最多的抗原决定簇，以及一些缺乏某种抗原决定簇的红细胞。配组红细胞的组合原则是，对大多数单一抗体(single antibody)和多种混合抗体(multipleantibody)鉴定方便。市上供应的配组细胞用特殊保养液保存，注明有效日期，浓度一般为36，不用时应保存在26冰箱内，避免污染细菌、血清或血液。（3）抗体鉴定方法：抗体鉴定的方法无统一的规定，有盐水介质、白蛋白介质、低离子强度介质、酶介质、抗球蛋白介质（必须做）筛选用红细胞应包括常见抗原，由3人份O型红细胞混合制成，同时做自身抗体筛选，鉴定

13、用O型谱细胞。一般应包括盐水介质法(4、室温及37)、酶法及抗球蛋白试验，必要时再作吸收、放散试验及2-me或DTT处理的血清作IgM和IgG抗体类型的鉴定，如遇低频率抗原的抗体鉴定，还需加用补充的配组细胞进行鉴定，以增加其阳性概率。（4）抗体鉴定应有的参考资料；被检者的血型，包括ABO、Rh以及其它必需的血型，例如，被检者血型为Rh阳性，MF则不可能存在抗一D及抗-M；以往输血史及妊娠史；临床诊断，尤其是自身免疫性溶血性贫血(AIHA)；药物治疗(包括RhIg)，如果以往曾作过血型鉴定，应进一步了解试验方法及试验温度；红细胞受酶处理的影响；与随机供血者红细胞阳性反应的频率和强度；试验时有无溶

14、血现象及剂量效应等。（5）抗体检出率的计算方法：从统计学角度来看，血型抗体鉴定的概率应达95，即碰巧由其它抗原抗体反应的概率应不超过5，如果为罕见的血型抗体，或认为是一种新的血型抗体，则其概率应小于1，计算方法以Fishers 22精确计算表计算。3.8.1 盐水介质凝集试验：同ABO血型鉴定。3.8.2 胶体介质凝集试验：（1）原理：红细胞表面有唾液酸，在中性环境中带负电荷，互相排斥，电荷的多少用Zeta电势表示，胶体介质就是提高介电常数，降低Zeta电势，使IgG致敏红细胞呈凝集现象。（2）常用胶体介质：人AB型血清、牛血清蛋白、人白蛋白3.8.3酶介质凝集试验：（1）原理：蛋白水解酶能消

15、化破坏红细胞表面的唾 液酸减少负电荷，降低Zeta电势，缩短红细胞间的距离。（2）常用的酶：0.5%菠萝酶、0.2%木瓜酶（3）方法：直接法：菠萝酶、木瓜酶间接法：木瓜酶、无花果酶（4）酶处理红细胞凝集素（酶型抗体）（5）酶法可促进Rh和Kidd系统检出，但不能检出MNSs、Fya、Fyb抗原3.8.4抗球蛋白试验（1）原理：抗球蛋白试验(antiglobulin test，AGT)又称Coombs试验，是检查不完全抗体的一种很好的方法。将抗球蛋白血清(antiglobu-lin serum，AGS)加入已经致敏的红细胞盐水悬液中，红细胞表面的抗体球蛋白(即使其致敏的不完全抗体)与抗球蛋白血清

16、中的抗体发生特异性反应，使红细胞发生凝集。抗球蛋白血清除了可以测定红细胞上IgG抗体外，还可以测定IgM和IgA，也可以测补体组分(c3、c4)，所谓广谱AGS，即包括抗IgG和抗C3。 直接抗球蛋白试验：直接抗球蛋白试验是检查体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体(由甲基多巴类药物、青霉素等所致)。试剂和材料：1.抗球蛋白血清(广谱及单价)；2.用不完全抗D致敏的5%Rho(D)阳性红

17、细胞盐水悬液供阳性对照用：取3人O型红细胞，混和，经盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗D血清，置37水浴致敏1h，取出后离心去除上清液再用盐水配成5%红细胞悬液；3.正常人5%D阳性红细胞悬液(未致敏)，供阴性对照用，除不用抗D血清致敏外，按上法配制。操作方法：1.取受检者红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，配成5%红细胞盐水悬液。2.取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，滴入1小试管(10mm60mm)内，加抗球蛋白血清1滴，混匀。3.阳性对照：不完全抗D血清致敏的5%D阳性红细胞悬液1滴，加抗球蛋白血清1滴，混匀。4.阴性对照：正常人5%D阳性

18、红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。5.受检管以及阳性、阴性对照管同时以1000rmin离心lmin，轻轻混和，观察结果。6.结果判定：如阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检红细胞凝集者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。附注：1.标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失。2.抗球蛋白血清应按说明书使用最适稀释度，否则，可产生前带或后带反应而误为阴性结果。3.也有将浓的抗球蛋白血清在白瓷板上作倍量系列稀释，再各加受检者10%洗涤红细胞悬液1滴，不断转动瓷板，肉眼观察凝集反应。凡出现凝集的最高稀释倍数的倒数即为直接抗球蛋白试验效价。此效价并不表示受检者红细胞被不

19、完全抗体致敏的强度。4.受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液中混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。5.最好对阴性结果进行核实，即在该试管中再加1滴IgG致敏红细胞，如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白血清确未被消耗。6.如需了解在体内致敏红细胞的Ig类型，则可分别以抗IgG、抗IgM或抗C3单价抗球蛋白血清进行试验。7.红细胞上吸附抗体太少或Coombs阴性自身免疫性溶血性贫血，直接抗球蛋白试验可呈假阴性反应。8.全凝集或冷凝集血液标本及脐血标本中含有Wharton胶且洗涤不充分，血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集。 间接抗球蛋白试验：本试

20、验是一种检测血清中不完全血型抗体的方法。即用已知抗原的红细胞测定受检血清中相应的不完全抗体；或用已知抗体的抗血清测定受检红细胞上相应的抗原。常用于血型鉴定、抗体的检出和鉴定、输血前交叉配血试验以及其它特殊研究。试剂和材料：1.抗球蛋白血清(广谱及单价)；2.受检血清(或已知抗体的血清)；3. 5% 已知抗原的红细胞悬液(或5%受检红细胞悬液)；4.不完全抗D血清；5. AB型血清；6. 5%D阳性红细胞悬液。操作方法：1.取试管3支，标明受检管、阳性对照及阴性对照。2.按表167将各反应物加入相应试管内。反应物 受检管 阳性对照 阴性对照血清(已知或受检) 2滴 一 一5%红细胞悬液(受检或已

21、知) 1滴 一 一不完全抗D血清 一 2滴 一AB型血清 一 一 2滴5%D阳性红细胞悬液 一 1滴 l滴3.混匀，置37水浴1h，用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去。每管各留红细胞悬液1滴。4.每管各加适当浓度抗球蛋白血清1滴，混匀，1 000rmin离心lmin，观察结果。5.结果判定：阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体(或受检红细胞上有相应抗原)。如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。6.效价滴定：如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。附注：1.血清与相

22、应红细胞在37水浴中致敏的时间经研究发现，如致敏1h，75%的抗体吸附于红细胞上，如致敏时间延长达2h，则抗体吸附达95%；如以低离子强度盐水溶液(LISS)代替生理盐水配制5%红细胞悬液，则致敏时间可减少，大多数抗体经致敏1530min已可，但抗Fy和抗Jk抗体需较长的孵育时间。2.红细胞洗涤应迅速，一经开始洗涤，就不应当中断停止。洗涤用盐水要足量，并用力冲入管底，使压积于管底的红细胞松离。切勿用手指堵住管口，颠倒混匀，以防污染来自皮肤的蛋白。据研究，其量即使只有1：4000稀释，即可中和抗球蛋白血清1滴。3.离心速度和时间十分重要，应按规定进行。原则上应以最小的离心力和最短的离心时间能使阳

23、性对照管出现阳性反应为宜。4.如果检查的抗体为补体依赖抗体，则必须加入新鲜AB型血清，抗球蛋白血清中也应含有抗C3。3.8.5 唾液中HAB血型物质测定（1）原理：HAB血型物质除存在于人红细胞上外，也存在于某些人的分泌液中，分泌液中含有血型物质者称为分泌型，约占80%；反之，称为非分泌型，约占20%。A型分泌型人唾液中含有A型物质，B型分泌型人唾液中含B型物质，O型分泌型人唾液中含H型物质，AB型分泌型人唾液中含A及B型物质。H型物质在A、B、0及AB 4型分泌型人唾液中均存在，但以O型人含量最多。唾液中HAB血型物质为半抗原，是糖蛋白，能特异性地与相应抗体结合，从而抑制抗体与相应红细胞发生

24、凝集。所以，利用抑制凝集试验，可以测定唾液中HAB血型物质，它有助于ABO亚型的分类及某些特殊情况下血型的鉴定。（2）试剂和材料1.唾液的留取：嘱被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml。患者或婴儿可用棉签放在舌下数分钟，取得唾液，然后将棉签放入含有数滴清洁生理盐水的试管中，用钳子挤压。将留取的唾液离心，上清液放入沸水浴中煮沸10min，以破坏能灭活型特异性物质的酶以及常常存在于分泌物中的抗A和抗B，然后再离心10rain，留取上清液备用。2. 2%A、B和O型红细胞盐水悬液。3.最适稀释度抗血清的制备：试验前需选择最适稀释度的抗血清，用以中和唾液血型物质如抗体过剩，不被血型物质中和，易发生假阴性

25、结果。反之，抗体过少，则凝集块太小，不易判定结果。取小试管15支，分为3排，每排5支。每管各加生理盐水O1ml。第13排的第1管分别加抗A、抗B及抗H血清O1ml，然后分别作倍量稀释，使成2、4、32倍稀释液。各管再加盐水o1ml。然后，于第1排各管加2%A型红细胞盐水悬液O2ml；第2排各管加2%B型红细胞盐水悬液O2ml；第3排各管加2%O型红细胞盐水悬液O2ml，振摇混匀，置室温中1h(或立即离心1000rmin 1min)，观察结果，每排以出现4+凝集块的最高稀释度为最适稀释度。4.抗H(欧洲荆豆提取液)。5.已知分泌型和非分泌型唾液作为对照。（3）操作方法：1.排列试管3支，分别标明

26、抗A、抗B及抗H。2.按表加反应物进行试验。反应物 抗A管 抗B管 抗H管受检者唾液(滴) 1 1 1最适稀释度抗A血清(滴) 1最适稀释度抗B血清(滴) 1最适稀释度抗H液(滴) 1混匀，置室温中和5min2%A型红细胞(滴) 22%B型红细胞(滴) 22%0型红细胞(滴) 2混匀，置室温1h或1 000rmin 离心1min，观察结果非分泌型 4+ 4+ 4+A型分泌型 - 4+ l4+B型分泌型 4+ 一 13+0型分泌型 4+ 4+ 一AB型分泌型 一 一 13+3.阳性及阴性对照管分别取试管2支，各加分泌型和非分泌型唾液1滴，再加抗H最适稀释度液1滴，以2%O型红细胞作指示，同时进行

27、试验，阳性对照应不凝集，阴性对照应凝集。最好再以盐水代替唾液作试剂对照。（4）效价测定；经上述试验已知为分泌型唾液后，如需进一步测定其效价者，可按下法进行滴定：1.取试管10支，每管各加生理盐水O.1ml，第一管加受检唾液0.1ml，并作倍量稀释，使成2、4、1024倍稀释。2.每管加相应最适稀释度抗血清O.1ml，混匀，中和5min。3.每管各加2%相应红细胞盐水悬液O.2ml，混匀，在室温中放置1h(或1000rmin离心1min)，观察结果。受检唾液能抑制抗体凝集相应红细胞的最高稀释倍数的倒数，即为该唾液所含血型物质的效价。（5）附注：1.如果唾液在加热前不先离心并除去沉淀，则可以从任何

28、可能存在的细胞释放H物质，使非分泌型导致假阳性。2.欲从唾液中得到清晰的不含粘液的液体，最好的方法是将唾液冰冻保存数天，融化后离心，除去细胞碎屑，冰冻唾液的活性可保留几年。3.为了防止弱分泌型的漏检，可同时作水对照试验，比较二者的凝集强度。3.8.6 吸收试验（1）原理：本试验用以间接证明红细胞上的血型抗原及其强度。常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集红细胞的定型以及某种原因引起红细胞血型抗原减弱时的定型等。当受检细胞加入已知效价的抗A及抗B血清后，若红细胞上有相应的抗原，便吸收血清中的抗体。再以已知抗原的红细胞来滴定，比较吸收前后抗血清中抗体的效价，便可证明受检红细胞上有无相应抗原以及强度

29、，间接判定受检红细胞的血型及其亚型的种类。（2）试剂和材料：1.抗A及抗B分型血清；2. 2%A型及B型试剂红细胞；3.受检红细胞。（3）操作方法：1.将受检红细胞用盐水洗涤3次，末次洗涤后，将盐水倒尽。取压积红细胞1份，与等量抗A血清混和；另取1份与等量抗B血清混和。放置4冰箱中至少1h，每10min将试管摇动1次，使红细胞充分吸收抗体，然后离心，上层血清即为吸收液。2.排列10mm60mm小试管4排，每排5支，每管各加生理盐水O.2ml。第1、3两排第1管分别各加已吸收抗A及抗B血清0.2ml；第2、4两排第1管分别各加未吸收抗A及抗B血清O.2ml。然后，分别作232的倍量稀释。3.第1

30、、2两排每管各加2%A型红细胞盐水悬液O.2ml，第3、4两排每管各加2%B型红细胞盐水悬液O.2ml。4.将试管振摇使红细胞充分混匀，放置室温1h(或1000rmin离心1min)，观察凝集反应。5.结果判定：吸收后，抗A效价较未吸收抗A效价显著降低或消失者为A型。同理，吸收后抗B效价较未吸收抗B效价显著降低或消失者为B型。如吸收后抗A及抗B效价都显著下降者为AB型。吸收后抗A及抗B效价都无明显差异者为O型。如试验的目的是鉴定A亚型，则按受检红细胞的吸收强度，A1A2A3AxAm规律来判定。B亚型的鉴定与此相似。（4）附注；1.本试验中所用的抗A及抗B血清效价不宜过高，应先将抗血清效价稀释到

31、32为宜。因如果抗血清效价太高，抗血清被A亚型红细胞吸收后，效价下降不明显，难以判断结果。2.红细胞经洗涤压积，盐水应尽量去尽，以免抗血清被稀释。3.吸收试验的温度，根据抗原、抗体反应的最适温度来决定。ABO系统以4为宜，Rh系统以37为宜。3.8.7 放散试验（1）原理：红细胞上的抗原与血清中抗体在适合条件下发生凝集或致敏。这种结合是可逆的，如改变某些物理条件，抗体又可从结合的细胞上放散，再以相应的红细胞鉴定放散液内抗体的种类并测定其强度，用以判定原来红细胞上抗原的型别。这种方法常用于ABO亚型的鉴定、全凝集或多凝集红细胞的定型、类B的鉴定以及新生儿溶血病的诊断等。放散试验的方法很多，ABO血型IgM抗体以热放散法为常用。Rh血型IgG抗体以乙醚放散法为常用。（2）方法： 加热放散法试剂和材料：1.抗A和抗B分型血清；2. 2%