04PCT测定试剂盒荧光免疫层析法工艺规程.docx

1、04PCT测定试剂盒荧光免疫层析法工艺规程编 制 人： 日期： 年 月 日审 核 人： 日期： 年 月 日批 准 人： 日期： 年 月 日生效日期： 年 月 日颁发部门： 质量部颁发份数： 2 份分发部门： 生产部、质量部受控编号：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）1.产品名称、剂型、注册分类、规格、定义、组成及用途中文名称：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）规 格：25人份/盒、40人份/盒剂 型：诊断试剂注册分类：二类6840体外诊断试剂定义、组成及预期用途：本产品采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析分析技术，通过夹心法检测原理来体外定量测定人血清、血浆样本中降钙

2、素原（PCT）的含量。依据：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）产品技术要求1.生产工艺流程图2.试剂卡制备生产工艺3.质量控制点4.主要原辅料、包装材料消耗定额、能源消耗定额、物料平衡的计算方法 5.包装要求、标签、说明书(附样本)与产品贮存方法及有效期6.设备一览表7.技术安全及劳动保护 1. PCT生产工艺流程图2. 试剂卡制备生产工艺2.1工序一：样品垫制作2.2工序二：膜制备2.3工序三：样本稀释液制备2.4工序四： 贴膜组装2.5工序五： 切条2.6工序六：压卡装袋2.7工序七：烧数据卡2.8工序八：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）试剂盒组装2.1 工序一：

3、样品垫制作2.1.1 探针稀释液2.1.1.1 标准配方名称物料名称配制1000ml使用量75人份使用量探针稀释液三羟甲基氨基甲烷2.4228g0.12ml调节PH=8.40.2蔗糖150g牛血清白蛋白5g吐温-205mlProclin3000.3ml纯化水定容至1000ml2.1.1.2 配制方法按照标准配方准确称取三羟甲基氨基甲烷2.4228g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在8.40.2范围内，再依次加入蔗糖150g、牛血清白蛋白5g、吐温-20 5ml、Proclin300 0.3ml，置磁力搅

4、拌器上搅拌至充分溶解后，将溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml。混合均匀430保存备用，有效期7天。2.1.2 样品垫处理液2.1.2.1 标准配方名称物料名称配制1000ml使用量75人份使用量样品垫处理液十二水合磷酸氢二钠5.73g40ml二水合磷酸二氢钠0.62g调节PH=7.40.2纯化水定容至1000ml2.1.2.2 配制方法按照标准配方分别准确称取十二水合磷酸氢二钠5.73g、二水合磷酸二氢钠0.62g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，

5、使用多参数测试仪测量PH值应在7.40.2范围内，将充分溶解并调好pH的溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml，混合均匀430保存备用，有效期7天。2.1.3 样品垫制作2.1.3.1样品垫处理 (1) 将玻璃纤维平铺到水平槽内，倒入足量样品垫处理液，应让玻璃纤维完全浸泡入样品垫处理液中；（2）浸泡至少15分钟，保证玻璃纤维完全浸透，玻璃纤维表面无气泡；（3）玻璃纤维浸透后，将玻璃纤维取出，45度恒温干燥4-6小时；（4）干燥完成后430封存备用，有效期7天。2.1.3.2样品垫制作（1）处理后的样品垫裁切成29

6、mm宽度；（2）兔IgG抗体微球偶联物：鼠抗人NT抗体微球偶联物：探针稀释液=1:3:20的比例配制探针溶液；（3）按4l/cm喷量，将配制好的探针溶液均匀喷点到已裁切的样品垫上。（4）在45度恒温干燥、湿度小于30%的环境下干燥4-6小时。 注：干燥湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在30%以下。（5）干燥完成后430封存备用，有效期14个月。 注：干燥后应避免长时间放置于430环境。2.2工序二：膜制备2.2.1 包被液2.2.1.1标准配方名称物料名称配制1000ml使用量75人份使用量包被液磷酸氢二钾1.82g0.06ml二水合磷酸二氢钠0.22g氯化钠8.76g调节PH=7

7、.20.2蔗糖30g纯化水定容至1000ml2.2.1.2配制方法按照标准配方分别准确称取磷酸氢二钾1.82g、二水合磷酸二氢钠0.22g、氯化钠8.76g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7.20.2范围内，再加入蔗糖30g，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将充分溶解并调好pH的溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml，混合均匀430保存备用，有效期7天。2.2.2 C线包被液使用包被液将羊抗兔IgG抗体稀释成终浓度为1m

8、g/ml。充分混合后保存备用。注：现用现配2.2.3 T线包被液使用包被液将鼠抗人PCT抗体稀释成终浓度为1mg/ml。充分混合后保存备用。注：现用现配2.2.4 NC膜划线（1）按左图所示，将PVC底板摆好；除去PVC底板中间25mm处的保护纸，沿上面保护纸的下边缘，将硝酸纤维素膜（NC膜）贴在该区； 注：1.粘贴上下边缘与相邻区上下边缘齐平； 2.粘贴时注意动作轻柔，避免用手直接按压硝酸纤维素膜（NC膜）表面。（2）贴吸水滤纸：按27mm的宽度将吸水滤纸切割成条，除去PVC底板上端25mm处的保护纸，将切好的吸水滤纸贴在该区；注：吸水滤纸下边缘超出该区2mm覆盖硝酸纤维素膜（NC膜）；上边

9、缘与底板边缘齐平。（3）使用划线包被机按照1l/cm包被量将C线包被液及T线包被液包被至NC膜适当位置；（4）C、T线区域间距应调节足够宽度以保证检测仪可以显著区分，习惯上C线距NC膜上边缘距离为10mm，CT线之间间距为6mm，T线与NC膜下边缘间距为9mm。注：1、贴膜和包被过程应注意避免膜的污染。2、划线时的湿度条件是NC膜制备的要点之一，湿度应控制在4565%。3、制备前需将C线包被液、T线包被液与硝酸纤维素膜（NC膜）平衡至相同温度。2.2.5 NC膜干燥 将包被的NC膜放置在相对湿度30%(环境温度1826)条件下干燥。NC膜干燥时间至少6小时。干燥完成后封存备用，有效期14个月。

10、 注：1、干燥时，湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在30%。干燥后应避免长时间放置于430环境。2.3工序三：样本稀释液制备2.3.1 标准配方名称物料名称配制1000ml使用量75人份使用量样本稀释液磷酸氢二钾1.82g22.5ml二水合磷酸二氢钠0.22g氯化钠8.76g调PH至7.40.2S910gProclin3000.3ml牛血清白蛋白5g2.3.2配制方法按照标准配方分别准确称取磷酸氢二钾1.82g、二水合磷酸二氢钠0.22g、氯化钠8.76g，放入洁净烧杯中，加纯化水800ml，放入1个洁净的磁力搅拌子，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，使用多参数测试仪测量PH值应在7

11、.40.2范围内，再依次加入S9 10g、Proclin300 0.3ml、牛血清白蛋白5g，置磁力搅拌器上搅拌至充分溶解后，将溶液缓缓倒入容积为1000ml的容量瓶中，用纯化水反复冲洗3次烧杯，所有溶液倒入上述容量瓶中，用纯化水定容至1000ml，混合均匀后4-30保存备用，有效期7天。2.3.3分装将上面配制好的样本稀释液按照300l/支的装量进行分装，4-30条件下保存，有效期12个月。2.3.4标签打印、贴签2.3.5质控项目和标准项目标准外观样本稀释液为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物。净含量样本稀释液净含量应在标示值的90%110%之间。pH在7.40.2范围内。2.4工序四： 贴膜

12、组装（湿度30%） （1）贴样品垫：将样品垫贴在已包被好的NC膜底板28mm处； 注：样品垫上边缘1mm覆盖NC膜；下边缘与底板边缘齐平。（2）贴好后，应如下图所示； 注：1、避免混淆是本工序的要点，确保指令、样品垫标示和包被好的NC膜三者之间的完全一致。未经清场，不得贴膜组装不同批号、规格、品种的产品。 2、清场在本岗位必须得到强调。3、湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在湿度30%。2.5工序五： 切条（1）接通切条机电源，设定切条程序，设定切割宽度为4mm；（2）将大卡平放入切条机平台轨道中，正面朝上，调节切条机上的螺丝，调节卡槽宽度与大卡宽度相同按操作面板上 “连动” 键，开

13、始切条；（4）将所有大卡头尾相接，慢慢放于切条机上，收集切好的条子，除去有标记（不合格）的条子。 注： 湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在30%。2.6工序六：压卡装袋（1）装条：将切好的条子放置在底卡的卡槽内，面板加样孔位置对应样本垫； 注：不得直接按压中间部位，如条子上出现划痕，按不合格品处理。（2）盖面板：将面板与底板对合，用力按压，使面板与底板吻合。（3）压卡：按平板压壳机操作规程压卡 注：压卡时应使卡竖向排列在传送带上，并严禁将卡重叠放置。（4）装袋：将1份试剂卡、1袋干燥剂装入铝箔袋中，按封口机操作规程封好铝箔袋。（5）标签打印、贴签。4-30条件下保存，有效期12个月

14、。（6）质控项目和标准。项目标准线性范围试剂的线性范围为（0.1-60）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0.990。准确度回收率在85%115%之间。注： 1、避免混淆是本工序的要点。确保指令、包装物标示和待包装产品三者之间的完全一致。未经清场，不得包装不同批号、规格、品种的产品。2、清场在本岗位必须得到强调。3、湿度的控制是本岗位的工艺要点之一，湿度应控制在30%。2.7工序七：烧数据卡2.7.1产品校准品赋值 用PCT工作校准品检测我公司的PCT试剂，使用10个浓度点工作校准品，每个浓度点重复检测3次，分别求出测定结果的均值，以浓度点为自变量，以测定结果均值为因变量求出线

15、性回归方程，做曲线。随机抽取的同一批号的不同浓度的PCT产品校准品各重复测定10次，分别计算每个浓度的平均值，即为该批PCT产品校准品的值。测量不确定度：U=Uc（y）*K，包含因子K=2，置信水平约95%。2.7.2 产品校准品确认 用PCT工作校准品和PCT产品校准品同时定标我公司相同批号的PCT试剂后，分别测定30例血清样本，并计算两组测定数值间的相关系数r及系统偏差，要求相关系数r应不低于0.975，且系统偏差应不超过15% 若满足以上要求，则该批PCT产品校准品的值确定；若无法满足，则需重复赋值过程，以确定该批PCT产品校准品的值。2.7.3产品校准品做曲线 用产品校准品检测待检半成

16、品试剂盒，每个浓度点分别在四台荧光仪上【信号测试】模块平行检测三次并点击【EXCEL】即保存成EXCEL格式，将所得每个浓度12个检测卡的T/C数值汇总到一个EXCEL中并计算每个浓度点的T/C平均值；然后将每个浓度点的浓度值和T/C平均值复制到四台荧光仪中的任一个荧光仪软件【测试实验】模块中，根据需要在【拟合算法】中选择拟合方式并点击【拟合】即生成曲线。2.7.4数据卡的生成 在【生成ID文件】模块中点击左下方【生成ID文件】；然后在【HEX查看】中点击【写ID】，此曲线即烧制到数据卡（ID卡）中。2.7.5烧制工序用SnartPRO智能通用编辑器烧数据卡，具体见相关SOP。2.7.6质控项

17、目和标准项目标准线性范围试剂的线性范围为（0.1-60）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0.990。准确度回收率在85%115%之间。2.8工序八：降钙素原（PCT）测定试剂盒（荧光免疫层析法）试剂盒组装2.8.1本试剂盒内容物由以下组分构成： 组 分25人份/盒40人份/盒试剂卡1人份/袋 25袋/盒1人份/袋 40袋/盒样本稀释液300l/瓶 25瓶/盒25瓶/盒300l/瓶 40瓶/盒25瓶/盒数据卡1张1张说明书1份1份注： 1、避免混淆是本工序的要点。确保指令、包装物标示和待包装产品三者之间的完全一致。未经清场，不得包装不同批号、规格、品种的产品。2、清场在本岗位必

18、须得到强调。2.8.2质控项目和标准项目标准物理性状外观试剂卡外观平整，材料附着牢固；样本稀释液为无色透明液体，无悬浮物及沉淀物。净含量样本稀释液净含量应在标示值的90%110%之间。膜条宽度膜条宽度应不小于3.9mm。液体移行速度液体移行速度应不低于25mm/min。空白限0.1ng/mL。线性范围试剂的线性范围为（0.1-60）ng/mL，在此线性范围内，线性相关系数r应不小于0.990。准确度回收率在85%115%之间。测量精密度重复性用质控品重复测试，所得结果的变异系数（CV）15%。批间差用质控品重复测试3个批号的试剂盒，所得结果的变异系数（CV）15%。稳定性试剂在430密封避光保

19、存，原包装存放的试剂有效期为12个月；取效期末的样品检测外观、膜条宽度、液体移行速度、空白限、线性范围、重复性、准确度，应分别符合其要求。3.质量控制点工序质量控制点质量控制项频次生产过程中间产品1、样品垫制作称量重量性状每批加样体积外观混合装量、时间、转速均匀度喷探针速度、喷量均匀度2、膜制备称量重量性状每批加样体积外观混合装量、时间、转速均匀度划线速度均匀度3、样本稀释液制备称量重量性状每批加样体积外观贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶摆管数量与装配数目核对外观分装体积外观、体积准确度封盖紧密度、外漏紧密、无外漏物标签打印速度、位置位正、字迹清晰，无错印、漏印贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶

20、4、贴膜组装贴膜位置端正、牢固每批5、切条切条速度、位置宽度每批6、压卡装袋压卡速度、位置过紧、过松每批封口速度、位置漏气标签打印速度、位置位正、字迹清晰，无错印、漏印贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶7、烧数据卡 标准曲线制作精确、按照操作规程操作、需要复核准确写入数据、复核无误每批8、试剂盒组装装盒速度、组分组分齐全、无缺漏每批标签打印速度、位置位正、字迹清晰，无错印、漏印贴签品名、位置端正、牢固、无皱褶4.生产过程物料平衡的计算方法、数据处理 4.1 各工序分步收率 本产品每个批次，每个关键工序生产结束都必须物料平衡，进行物料平衡是避免或及时发现差错与混淆的有效措施。4.1.1 NC膜物料

21、平衡NC膜物料平衡=实际反应膜制备量/理论反应膜制备量100% 物料平衡限定范围95-100%。注：理论反应膜制备量=液体配制量/30l（板）4.1.2样品垫物料平衡样品垫物料平衡率=实际样品垫量/理论样品垫量100% 物料平衡限定范围95-100%。注：理论样品垫量=液体配制量/120l（板）4.1.3 稀释液物料平衡稀释液物料平衡=实际分装瓶量/理论分装瓶量100% 物料平衡限定范围95-100%。注：理论分装瓶量= 稀释液总量/300l4.1.4数据卡物料平衡数据卡物料平衡=实际烧数据卡量/理论烧数据卡量100%物料平衡限定范围95-100%4.1.5包材物料平衡包材物料平衡=实际包材用

22、量/理论包材用量100%物料平衡限定范围95-100%4.1.6成品物料平衡 成品物料平衡=实际产量/理论产量100% 物料平衡限定范围95-105%。4.2 数据处理4.2.1凡收率在合格范围内的，方可“流转”投入下一工序。4.2.2凡收率高于或低于合格范围内，应立即贴“待验”标志，不能递交下工序，并由发现人填写偏差处理单，经质量管理部门按“生产过程偏差处理管理规程”进行调查，采取处理措施，直至调查确认不影响产品最终质量的情况下，方可放行。5.包装要求、标签、说明书(附样本)与产品贮存方法及有效期5.1 包装规格：25人份/盒、40人份/盒。5.1.1 铝箔袋规格：1人份/袋。5.1.2试剂

23、盒装量 25T:检测卡25袋，说明书1张、样本稀释液25人份、数据卡1张。 40T:检测卡40袋，说明书1张、样本稀释液40人份、数据卡1张。5.2包装材料、试剂盒及说明书要求(附样本) 5.3产品贮存方法及有效期 产品的储存条件：4-30，干燥，有效期：12个月。6.设备一览表序号设备名称生产区域/岗位规格型号用途备注1纯水机制水间CSR-2-500纯化水2切条机切条间CM1010切条3封口机半成品包装间900半成品生产4三维平面点膜喷金仪膜包被间HM3030包被NC膜5裁切机贴膜间CT300生产辅助6多参数测试仪配液间S220调节pH7电子分析天平称量间MS204S-01称量8平板压壳机半

24、成品组装间AR100生产9除湿机组空调机房FLC-3000-6000P除湿10磁力搅拌器配液间MS-S配液辅助11恒温干燥箱？样品垫处理12恒温干燥箱？样品垫制作13SnartPRO智能通用编辑器成品组装间5000U-Plus烧卡14广州蓝勃生物科技有限公司 手动干式荧光免疫分析仪？AFS-1000型实验15广州蓝勃生物科技有限公司 半自动干式荧光免疫分析仪？AFS2000A型实验16普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 手动干式荧光免疫分析仪？YSF1000型实验17普菲特益斯生物科技（北京）有限公司 半自动干式荧光免疫分析仪？YSF2000型实验7.技术安全及劳动保护 7.1 技术安全7.1.1 设备动力部分，如电机皮带轮应有保护罩。7.1.2 各工序在操作前应检查电源、机器部件，加油润滑，试运转，正常后方能使用。如发现异常情况，应停止操作。7.1.3 操作设备必须严格遵守该设备的操作规程。7.1.4 机械电器设备均应根据不同性能定期检查和测试。7.2 劳动保护7.2.1 各工序操作人员均应按规定穿戴好洁净工作服、鞋、帽及劳动保护用品。7.2.2 原料称量、包装过程中应轻，避免起尘。