显微制片的一般原理与方法.docx

1、显微制片的一般原理与方法第四章 显微制片的一般原理与方法第一节 石蜡切片显微制片是生命科学实验技术中的重要组成部分，石蜡切片是动物植物和病理组织切片工作中最重要最常用的一种方法，一般包括材料的固定洗涤脱水透明包埋以及切片和染色等过程，其中的每个步骤都能影响制片的效果和质量。1. 材料的选择与分割(1) 应选取新鲜的材料，然后立即固定处理。(2) 材料大小要适当（直径5 mm左右）2. 固定及保存 (Fixation and Store)固定：将器官、组织、细胞按原来的形态保存下来，并为后续制片保持固有形态，这样才达到固定的要求。保存：组织块经杀生固定后，能较长时间保存下来。经久保存下来的组织块

2、，仍能制片，但不同试剂的保存效果差异较大，如酒精、醋酸、福尔马林液保存时间较长，而铬酸类固定液，常须转换至70酒精液后，才可较长时间保存。需注意以下有关问题：(1) 要注意固定目的物本身的结构性质，以便选用适合的固定液，如一般根、茎、叶的组织切片用FAA，根尖、花药压片材料用卡诺固定液，另外，固定时间的长短，要根据材料的特点而增减。(2) 固定微小材料可直接投入固定液中，而对于较大的材料，则须先将其解剖成较小的材料，并迅速投入固定液，以完成固定作用。(3) 当体积较大的材料，出现外部已超过固定作用，而内部仍未达到固定目的时，必须考虑用透入快的固定液，如醋酸酒精或苦味酸混合液。3. 脱水 (De

3、hydration)常用的脱水剂有乙醇（酒精）、正丁醇、叔丁醇、丙酮等药剂，其目的：(1) 除去组织内的水分，并使其组织细胞变硬；(2) 脱净水的组织，才能使溶解的石蜡顺利进入细胞内，以便进行石蜡切片；(3) 脱水后的组织再经透明剂（二甲苯、氯仿等）透明，最后才能经加拿大树胶封藏，否则组织材料不透明，无法在显微镜下观察。4. 透明 ()透明是制片过程中的基础工作，材料经各级酒精脱水以后，要经过常用的有机榕剂（氯仿、二甲苯等）进行透明，这样便于包埋浸渍石蜡及封片过程中加拿大树胶进入和溶合。只有当组织材料全为透明剂所占，并在显微镜下观察呈透明状态时，这种材料才符合制片要求，故透明是制片的重要环节，

4、万不可忽视，凡未经透明的材料（不论在哪一步骤透明）都必须重新退回处理，直到材料透明再继续向下处理。常用透明剂种类：二甲苯、氯仿、苯、甲苯、丁香油、冬青油、香柏油等。透明方法：以氯仿及二甲苯为常用透明剂。氯仿透明的优点是：(1) 组织材料在氯仿中浸存，收缩不显著：(2) 易挥发，如浸蜡时，使用的氯仿经包埋前的处理便于除去。其缺点有：(1) 渗入组织内力量较二甲苯弱、时间长，(2) 氯仿能使染料褪色，故染色后的切片处理不宜用氯仿透明而用二甲苯。5. 浸蜡 (Infiltration)在装有材料的纯氯仿瓶中，加入纯石蜡粉末。其方法是：用单面刀片刮取石蜡屑，加入量宜先少后多，一般分23次加入，每加完一

5、次碎蜡后，即放回至恒温箱中部，温度控制在3840之间。浸蜡完全的材料，组织块显得十分透明。这种以石蜡透入细胞组织内的全过程，称为浸蜡。完成浸蜡的组织块，才便于包埋、切片等工作。在浸蜡瓶放入温箱中过夜时，要注意材料不能太多，瓶塞不要盖得过紧。6. 包埋 (Embedding)包埋是将浸蜡完全的组织和熔解的石蜡，倒入蜡块盒，随之快速冷却定形成蜡块的过程。包埋前需做以下的准备工作：6.1 石蜡的选取按不同的要求选用不同规格的石蜡软材料用5456C熔点的石蜡，若切5 m以下的厚度或炎热夏季切片时，宜用5860的石蜡。选用时还须检查石蜡细致度、无气泡、无灰尘、无透明点痕、切片时不断碎等优点。新石蜡和用后

6、已切碎的石蜡，都必须先熔化，然后用折叠成漏斗形的34层滤纸过滤除去渣棒。6.2 各级石蜡配制与使用将石蜡配成50%、75%、100%三级。50%石蜡由一半石蜡和一半二甲苯配制而成，75%石蜡系由75%石蜡与25%二甲苯配成。每级石蜡用大口器皿装且有盖覆盖，这样，便于多处理材料和包埋时操作，6.3 常见问题(1) 经各级石蜡处理恰当的材料，一般都沉入杯底部，如见有材料在蜡内漂浮、色白，这类材料可能由于在抽气时空气未排出，脱水不完全，透明不彻底等环节造成，需单独包埋存放，另作处理。若材料处理数量较多，应予丢弃。(2) 各级蜡杯温度，最好不超过蜡的熔点，温度过高材料会发生收缩变脆，温度过低，透蜡及氯

7、仿排除不彻底，也会影响制片，因此温箱外需有温度计指示温度，蜡杯放置温箱的下层位置，可达到浸蜡包埋要求。7. 石蜡块的分割、整修与固着先在桌上垫一层纸，然后放置一块小木板。分割下的每个小样品四周留35mm的蜡边进行整修，每个蜡边与材料尽量呈平行线，上窄下宽，削好的样品，以纸袋包装好。将坚实平整的台木块，放于垫纸上，再将台木上用烫蜡铲烫放一层稍厚的石蜡，以左手执石蜡小样品块，右手执烫蜡铲于酒精灯上烧热，再放置台木与小蜡块之间，当上下蜡面被烫蜡铲熔化时，很快抽出烫蜡铲，左手迅速将蜡块紧压台木的蜡面固着，然后再用烫蜡铲烧热，使台木与蜡块间稍有一点熔蜡，以便焊紧小蜡块，当台木上的蜡块冷却后，再进一步修整

8、呈上窄下宽的倾斜面，以便最后安放于切片机上切削。在夏季切削时，常用小冰块在蜡块面上冰冻几秒钟后，再进行切片，效果较好。8. 切片刀的选择8.1 切片方法与步骤(1) 装紧蜡块固定锁紧扳手，并调节好角度与距离。(2) 安装好切片刀，当倾角为15左右时，用固定螺旋扭紧。(3) 先松开刀架固定钮移动刀架，同时从侧面观看，当切片刀刀刃与台木上的蜡面较平行且接近时进行固定，最后重新检查其他固定螺旋是否紧固。(4) 调整切片厚度控制盘的刻度，一般切片厚度约在812m间。开启切片机总开关，试摇切片机手轮（顺时针方向摇动），左手持毛笔每摇动一圈，就切下一个蜡片；第一片常贴在刀刃上，当第二片切下时，第一片与第二

9、片的边缘即连在一起，连续摇动手轮，连续蜡带就形成。(5) 锁紧切片机总开关，进一步检查切下蜡带是否适用。台木上材料不符合要求时，剩下的蜡块不必再切下去，另换材料继续切片，这样可保护切片刀刃锋利。注意：在进行切片操作时，要耐心细致，不要对着蜡带讲话，以免气体吹走蜡带，切片过程要随时注意关锁总开关钮，以防止手轮下降伤害人的手指和损坏材料或刀刃。8.2 切片过程易出现的问题及解决办法(1) 切片纵裂或具纵条纹刀有缺口、磨刀时间太短、组织软化不够等原因，都会发生此类现象，可移动刀刃位置。(2) 蜡带弯曲是蜡块的上下边缘不平行引起，如将蜡块长边修整为平行的，即可纠正弯曲现象。(3) 切片有横纹及厚薄大小

10、不匀刀夹或物夹松紧不均匀、刀倾角过大，刀口用二甲苯拭去石蜡屑，大小不匀与调节系统出故障有关，应考虑维修切片机等问题。(4) 材料破碎，甚至整个材料由蜡中脱离形成空洞蜡带此种现象是脱水不彻底、浸蜡不完全，因而使材料和蜡之间不融合，形成空洞蜡片，这种材料无法补救，必须重新处理制作。(5) 切片卷起形成圆筒是刀刃太钝并附着不洁杂物、刀的倾角太太、切片厚度太厚等原因所引起的，须调整刀的倾角，或用少量二甲苯拭净刀刃等措施。石蜡切片全过程中，每一环节都会影响切片质量，初学者必须细致操作，及时发现问题予以解决，决不能因其中某个步骤出现问题而失去信心。9. 粘片及展片粘片与展片是将切下的蜡带分割成适宜的片段，

11、用粘贴剂（甘油蛋清或明胶甘油）贴于载玻片上的过程。粘片时必须注意蜡带伸展完全，故粘片与展片都是在载玻片上同时完成的统一步骤。10. 脱蜡将待脱蜡的载玻片一张张小心地插入到脱蜡缸的齿槽中（有蜡带的一面朝向同一方向），待30分钟（在夏季3840温箱内可减少到1520分钟即可），当蜡片中材料的周围蜡溶去后，再转移至透明缸中510分钟，然后再转入染色、脱水、透明、封藏等步骤。11. 染料与染色 (Dye and Staining)植物制片中使用的染料种类较多，染料的分类法较复杂，主要有以下几类：(1) 核染料能与细胞核中的染色质发生作用的染料，包括天然染料如苏木精、洋红及人工染料如番红、甲苯胶蓝、甲基

12、绿、碱性品红等。(2) 细胞质染料能与细胞质发生作用的染料，如伊红Y、固绿、桔红G、苯胶蓝、酸性品红等。(3) 细胞壁染料能与细胞壁发生作用的染料，如番红、苯胶蓝等。(4) 组织化学染料如苏丹E、碱性品红、苯胶蓝黑等。(5) 荧光染料应用含荧光基团的物质作为染料，使之与细胞中和该物质有特殊亲和力的物质相结合，即可在紫外线或短光波的照射下被激发出荧光，这类染料称为荧光染料(fluorescent dye)，专用的荧光染料有H33258、DAPI、FITC、水溶性苯胶蓝。12. 石蜡制片的总操作流程(1) 取材选取经过自己设计实验的对照和处理的材料的根、茎、叶的相同部位。(2) 固定和抽气(3)

13、脱水、透明及渗蜡将材料从固定液中取出后，其具体流程如下（A：酒精；X：二甲苯）75% A (2h) 85% A (2h) 95% A (2h) 100% A (2h) 100% A (2h) 3/4 A+1/4 X (2h) 1/2 A + 1/2 X (2-3h、过夜） 1/4 A + 3/4 X (2h) X (2h) 1/2 X + 1/2蜡（过夜） 渗蜡1 (2h) 渗蜡2 (2h) 渗蜡3 (2h)(4) 包埋将渗蜡后的材料和石蜡一起倒入小纸盒，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐并使其竖直，倒入纯蜡进行包埋。稍微凝固后倒置于清水盆中彻底冷却凝固。(5) 修块将包埋

14、好的材料切割成小块，每个小块包含一个材料，并修成梯形，切面在梯形的上部。注意上部矩形对边平行，梯形底部用烧热的蜡将其固定在木块上。(6) 切片将粘有蜡块的小木块至于切片机上，调整切距到适当大小，转动调节器条切片厚度12m进行切片。注意切片时要一手转动切片机，另一手执毛笔将切下来的片子摊开以形成一长条蜡带。切片过程中，如果蜡带偏向一边，也要及时修正。(7) 烫片(8) 烘片将烫好的片子自然烘干，或45烤片箱干燥。(9) 脱蜡、染色、脱水、透明100% X (15-30min) 100% X (1-2min) 50% X + 50% A (1-2min) 100% A (1-2min) 95% A

15、 (1-2min) 85% A (1-2min) 番红（85%A配制）(2-4h) 85% A (3-5s） 95% A (3-5s） 固绿（100% A配制）(30s) 95% A (1-2min) 100% A (1-2min) 100% A (1-2min) 50% X + 50% A (1-2min) 100% X (1-2min) 100% X (1-2min)注意番红染色时间要长些（至少3h以上），随后的两次经过酒精的时间都应很短，以免洗掉染上的番红，固绿的染色时间大约在20-30s，其他各步的时间大约1至2分钟，均要视具体情况而定。(10) 封片从二甲苯中取出然好色的片子，用中性

16、树胶进行封片。注意封片用的该玻片要清洁，封片时要注意不要产生气泡。旋转式石蜡切片机第二节 半薄切片半薄切片(Semithin section)法是一种可供光学显微镜观察研究用的塑料半薄切片技术，制片与电镜研究的样品相同，但切片厚度为0.52.0m（常采用0.60.8m)，介于石蜡切片和超薄切片之间，效果比石蜡切片好，不仅较薄，而且又能较好地保存组织细胞的结构，减少人为假象，切片也比石蜡切片清晰，因此可以获得良好的观察效果。由于半薄切片图像的清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，所以有利于获得高质量的光镜图像。同时，半薄切片也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法，被广泛应用于各个方

17、面，如胚胎学、病理学等。因而，半薄切片技术已成为目前较为普遍的一种切片方式。1. 固定液用于半薄切片的固定液都是非凝固性的固定剂。下面介绍几种非凝固性固定液的配方及使用方法，这些固定剂配方同样也可以用来固定供电镜观察的材料。1.1戊二醛(Glutaraldehyde, C5H8O2)固定液醛类是常用固定剂，有戊二醛、多聚甲醛和丙烯醛，以戊二醛应用的最广泛。戊二醛作为一种固定剂已被广泛使用。它能和蛋白质分子中的氨基和肽键很快交联而起到稳定蛋白质的作用，对组织的渗透力强。戊二醛对OsO4不能固定的糖原和某些蛋白质结构如微管等有很好的保存作用，对核蛋白的固定也比OsO4好。但戊二醛对脂类的保存效果很

18、差，也不能使细胞产生足够的反差，所以一般采用两次固定法，先用戊二醛固定（前固定），样品经彻底冲洗后，再用OsO4固定（后固定）。这种先后固定方法，可以相互补充，从而使细胞的细微结构能得到很好的保存。商品戊二醛都为水溶液，出售的浓度有8、25%、50和70，高浓度溶液较易自行聚合，所以通常最好买25的溶液，贮存在24、黑暗及中等pH值下，若贮存时间太长，溶液变黄，酸度增高，当pH由原来的4.0-5.0降到3.5以下时，固定效力大为降低。用于材料固定的戊二醛浓度一般为2.55，除巴比妥醋酸之外（因为戊二醛和醋酸-巴比妥缓冲液能相互反应），可以和其它任何缓冲液配合使用，pH最好保持在6.8左右。在室

19、温条件下固定材料，固定时间可以由15分钟至12小时，因材料与目的要求而异。在低温下戊二醛会使微管消失，所以观察微管时切忌在低温下固定。戊二醛固定液的配制0.2M磷酸缓冲液 (m1)505050505025戊二醛 (ml)810121620蒸馏水 (m1)4240383430戊二醛最终浓度 ()2.02.53.04.05.0配好的固定液pH可能会比原缓冲液略有下降，可用酸度计或试纸测试，如果下降过多应加入少量缓冲液，使其恢复pH7.07.4，但如果加入的缓冲液过多，戊二醛的终浓度会受到影响，必要时亦可加入适量的戊二醛。1.2 四氧化锇(Osmium Tetroxide, OsO4)固定液OsO4

20、是一种淡黄色结晶，具有特殊的臭味，习惯上误称为锇酸，它的水溶液(H2OsO5)呈中性，所以正确的称谓应为四氧化锇(OsO4)。OsO4也是一种很好的非凝固性固定剂，它不但能够固定蛋白质，同时对一些脂类也有很好的固定作用，因此OsO4能将戊二醛未能固定的组织加以固定。另外，锇是重金属，用OsO4固定的细胞可以增加电子反差；OsO4还有不使细胞收缩、膨胀、变脆、变硬等优点，用它固定的材料切割性能好。但OsO4因分子量大，造成渗透缓馒，对核酸和糖原的保存作用很差。这些不足（除对核酸保存能力差之外）大多数可以通过用戊二醛先固定来弥补。 OsO4大多封装在安培瓶中，为淡黄色晶体，是一种强氧化剂，不能与酒

21、精、甲醛液混合。新鲜溶液呈中性反应，颜色为浅黄。如果贮存时间太长或容器不干净，溶液很快便会还原成黑色而失效。因此，为防止OsO4变黑，有时可以在溶液内加几滴MgCl2。如果溶液已经开始变黑，可以加几滴H202，使它恢复原色。 OsO4配制方法：OsO4一般包装在0.1g、0.25g、0.5g、1g安培瓶中，常配成2的OsO4溶液。配制时，首先将安培瓶洗净，最好在洗液中浸泡数小时到两天，然后用清水冲洗数次，再用重蒸馏水洗涤，干燥后在安培瓶上用砂轮或钻石刀刻一圈痕迹放入经洗液洗净的棕色磨口玻璃瓶中，加盖后用力摇动，使安培瓶破碎，然后按比例加入重蒸馏水或缓冲液。配好的锇酸溶液密封后存放在24的冰箱中

22、，至少要经过24小时的熟化后才能使用。容器密封不严时，会使冰箱内壁变黑和影响其他冷藏物品。 OsO4为剧毒药品，配制溶液和使用时应避免使其与皮肤接触，也不要吸入其蒸气，一切操作最好在通风橱中进行。2. 材料固定常采用戊二醛和OsO4双重固定法。2.1 材料切割将材料切成0.51.0mm3的小块（切割刀片要锋利，速度宜快，避免挤压搓揉材料）；2.2 前固定把切割好的材料浸入戊二醛固定液中固定24小时或在冰箱中过夜，有的材料如叶片、子房、花药等组织内部含有空气，固定液不易浸入，需用抽气机抽气。2.3 洗涤将材料从固定液中取出，用0.1M磷酸缓冲液 (pH7.3) 洗涤34次，每次1520分钟，可不

23、断地摇动容器，使缓冲液迅速渗入组织，取代残存的戊二醛溶液。2.4 后固定将洗涤后的材料浸入2OsO4固定液中，在室温下固定至12小时。2.5 洗涤将后固定的材料取出，用0.1M磷酸缓冲液洗涤4次，每次1520分钟，洗去细胞中残余OsO4，以防止OsO4与脱水剂发生化学反应而形成沉淀。3. 脱水采用各级酒精脱水法，在室温条件下，按30% 50% 70% 85% 95% 100% 酒精（三次）逐级脱水，每级需30分钟，但在纯酒精中每次则需停留12小时。4. 浸透与包埋常用包埋剂有乙二醇甲基丙烯酸酯 (glycol methacrylate, GMA) 和环氧树酯 (Epon 812, 618) 两

24、类，它们对样品的渗透和包埋方法各不相同，但都可同时作光镜和电镜检测，能相互对照，定位准确。此处介绍GMA包埋法，环氧树脂包埋法在超薄切片部分介绍。4.1 GMA的性质GMA是一种水溶性塑料包埋剂，这种塑料经凝固后，可以很容易被切成12m的薄片，供光学显微镜下观察，效果比传统的石蜡切片要好。由GMA包埋的材料可以保存组织、细胞中很多化合物（例如蛋白质、核酸），而很少变性，与一些非凝固性固定液配合使用，可以保持细胞的酶活性，所以由GMA制成的切片也适合做多种成分的组织化学、酶活性和荧光显微观察等内容的试验，并且在染色时无需把塑料去掉，便可以直接染色，比石蜡染色要简便得多，而且清晰度也高。 GMA在

25、出厂时，溶液内都加入了氢醌类防聚合剂，在使用前应将其除去。办法很简单，只要将GMA和少量活性碳混合在一起摇动一段时间，可除去大部分的氢醌，然后过滤备用。GMA溶液内除含有氢醌之外，还含有约3的自由态甲基丙烯酸，使GMA溶液的pH偏低，如果用这种GMA来做切片，切片会被碱性染料染上颜色，妨碍材料的清晰度。因此，在使用前应先测量GMA的pH值（测定方法：取0.5m1 GMA，加入50m1蒸馏水，混合均匀，而后用pH计检查），如果偏低，可以将GMA进行纯化。GMA纯化方法如下：(1) 把GMA溶液加热至65，按1m1 GMA加0.072g N,N-dicylohexylcarbodumide（简称D

26、CDI) 的比例，搅拌1小时。(2) 在室温冷却，然后加入10(W/V) 乙二醇丁醚(2-butoxyethano)，搅匀，放在-10过夜。在这段时间内，许多白色沉淀便会形成，在第二天可以用真空抽气和硅华滤片 (sintered glass filter) 把沉淀物过滤掉。(3) 在过滤后的溶液内再加入0.5 a,a-azoisobutyronitrile加速剂（也可用1benzoyl peroxide)，搅匀，放在5备用。4.2 GMA包埋剂的配方使用GMA作包埋剂时还得加一定量的增塑剂和加速剂，制成混合液，才能得到具有良好凝固和切割性能的包埋块。常用配方有以下三种：(1) 配方1GMA 9

27、3gPEG400（增塑剂） 7g过氧化苯酰 (benzoyl peroxide)（加速剂） 0.6g(2) 配方2GMA 90%乙二醇丁醚 (2-butoxyethano I)（增塑剂） 10%a,a-azoisobutyronitrile（加速剂） 0.5%(3) 配方3GMA 95gPEG400（增塑剂） 5g偶氮二异丁睛2,2-azobis (2-methylpropionitrile)（加速剂）0.4g4.3 渗透与包埋将材料换入GMA混合液 + 无水酒精 (1:1) 中，静置或缓慢摇动1012小时，然后用新鲜GMA包埋剂替换，放置24小时后包埋。以上步骤均在04下进行，如在室温下，可

28、适当缩短渗透时间。材料大小超过2 mm3或实心的材料如种子，则渗透时间要适当延长。加入的GMA以刚盖过材料即可。 材料的包埋最好用1号（直径5.3mm) 或2号（直径5.6mm) 药用胶囊，包埋步骤如下。取载玻片硬纸盒作为支架，用打孔器在纸盒的盖上钻若干排孔，孔的直径比胶囊略小。然后将胶囊插入孔内，胶襄的底部悬空。打开胶囊的盖子，用滴管将GMA包埋剂加入到胶囊内至3/4的位置，然后小心地将材料连同少许包埋混合液移入胶囊内，待材料下沉到胶囊底部后，用一只新的清洁铜丝调整材料的方位，盖上胶囊盖。但在加盖之前，必须把盖的圆顶端压凹，这样可以避免空气停留在盖的顶端，因为氧气会阻碍GMA凝固。最后将载有

29、胶囊的纸盒放进温箱中，按40 1天、50 1天、60 1天地顺序升温聚合。 如果要在半薄切片上进行酶活性的测定，则需要在04下进行紫外光照射聚合。5. 切片5.1 玻璃刀的制备超薄切片和半薄切片都需用玻璃刀切片，玻璃刀可用制刀机制作（目前国内广泛使用的是瑞士产的LKB7800型制刀机），只要严格按照制刀机使用说明书上规定的操作程序去做，就可以制出满意的玻璃刀。在无制刀机的情况下需要手工制作，即选用57mm厚的平板玻璃（含硅量7275%），将玻璃板洗涤干净之后，裁成25.4mm宽的玻璃条，再裁成6.452cm2 (2.54cm 2.54cm) 的玻璃块，然后进一步制刀。如图1所示，先划线，线划好

30、后，断裂玻璃有以下三种方法。(1) 用一副钳子，每把钳子的钳口必须接近而且平行于划线，水平地把玻璃拉开，如图2 (1)所示；(2) 用平口老虎钳的两侧钳头装上小细木条，一侧装在中间，另一侧放在两边，裁玻璃时用中间的突点对着玻璃划线的下一面，有两突点的一侧钳臂在划线的另一面，用力一挟，即断裂成两块三角形的玻璃刀【图2 (2)】。(3) 把6mm的玻璃棒顶部在本生灯上烧到亮红色并把它压在划线中央，玻璃条将沿划线完全开裂【图2 (3)】。图1. 制备玻璃刀的划线法 图2. 制备玻璃刀方法示意图断裂后的裂口即是刀刃，要求刀刃平直锋利，才能用来切片。 切半薄切片时，把玻璃刀固定在特制的刀架上，可安装在旋

31、转切片机上进行切片，厚度为12m。5.2 组织块的修整及切片聚合好的包埋块必须经过修整才能用于切片。用GMA包埋的不必去掉包埋块外面的胶囊，特别是不能用水浸泡包埋块，因GMA聚合后遇水仍会膨胀。市场上已经有专门的修块机出售，例如LKB Pyrainitome, Reichert TM6和Cambridge修块机等。可以修切很工整的组织块。目前一般实验室都是手工修块，其方法是先将包埋块夹在样品夹上，有材料的一端向上，在解剖镜下看准材料所在部位和需要切割的方位，先用单面刀片在组织的四周以和水平面成45的角度切四刀【图3 (2、3)】，然后再在包埋块的顶端平切一刀，展出组织【图3 (4、5)】，组织块的形状可以修成长方形、正方形或梯形【图3 (5、6)】。修块时，有组织的地方要一刀切下，不要来回锯割。包埋块很硬，刀片易缺损，应经常换用新刀片。 图3 组织块的修整法把初步修整好的组织块装在切片机夹物部上，再进一步修整使材料略露出，进行半薄切片，用干玻璃刀切，切片厚度12m，每切一片后直接用细毛笔尖从刀口上取下