TLC跑经验总结.docx

1、TLC跑经验总结看了MERK兄的帖子，很受启发，想起发这个帖子，希望大家把在过柱子过程中的获得的成功的或不成功的，成熟的或不成熟的经验或想法，留在这块，我们大家可以互相学习，互相交流，期待着共同的进步，共同的提高，希望大家跟帖。谢谢！先把板子爬好其实也不是这么简单。有时候板上很好，柱子差远了。有同感！我感觉过柱子跟爬板，不太一样，板爬的好，过柱子时，可就没有那么幸运了。板子爬不好，柱子一定爬不好还是先把板子爬好，板子比柱子好把握，有个参考好多了。还是先把板子爬好，掌握好各个Rf值对，过柱是一个很好的参考，我一般在开始时选用2、3个展开剂过柱，开始用极性小的展开剂，将极性小的杂质先除名，再用极性

2、大的。如果我想要的那个东东的Rf值约左右（展开剂是氯仿甲醇：101），那么我能否单用氯仿过柱柱子和板有差异的话，想看的清楚一点，最好把板90度爬两次，如果不是会洗脱液中分解的话，应该会比较容易重复的！柱子情况与TLC基本上一样的，但是装柱和上样一定要搞好不然很容易跑得一塌糊涂无论干柱还是湿柱，把柱子压实分离效果才会好过柱的关键有几点:1是选择好硅胶,装柱的时候要压紧,压平,使柱子中间没有气泡;2是要选择好展开剂;最好先查查文献，看看有没有类似的色谱条件，这样做起来就事半功倍了回9楼：可以单一用氯仿做洗脱剂！效果还不错！感觉冬天过柱效果较差9楼兄弟这个不好说,因为我们大家过柱的方法不一定相同,学

3、校一般使用常压或加压,而我们这里使用的确实减压间歇法.好的板子很重要只要你的化合物有极性区别，理论上没有分不开的柱子。所以一定要耐心，有几分象钓鱼。过柱子是一个经验活，主要凭感觉，因为它和您的待分离物的个数、各点间的间距、Rf值.均有关系，柱子过多了，就会感觉出一个合适的洗脱液以及极性。但也并非无规律可循， 过柱前爬板是必不可少的，试不同极性，找一个各点分离较开的极性，内径一厘米的柱子一般极性放大10倍左右，柱子越粗，极性放达越大。爬板时，如果待分点离开基线，而其下一点未动时的极性一般适于过柱。板子的分离效果一般好于柱子，因为板子的粒度较细高效板有差异的，用高效板跑的，在实际过柱时要再降低溶剂

4、极性，一般板Rf在适宜过柱各位大侠: 请问氯仿:甲醇=10:1做洗脱剂时可以用二氯甲烷:甲醇=10:1或:来代替吗因为考虑到氯仿太毒了,请帮忙分析一下. 另外:有没有大侠知道过柱用的硅胶怎么选择比较合理硅胶柱层析下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。1。称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤

5、其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。3。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。4。压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些

6、洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。7。检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。8。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱左右所谓的“硅胶”峰。呵呵，写得手好累呀，欢迎大家指正或提出更

7、好的建议！对了，欢迎制备薄层层析法（ptlc）的高手发言！关键是装柱和展开剂的选择各位能否介绍一些工业上用的填料比如要分离磷酸酯类的化合物。谢谢！爬板子是为了过柱子作准备，要过好柱子还得对样品的特性有了解，才能遭到找到合适的柱子，也才有可能过好柱子。复28楼，工业用填料也不过是琼脂糖类、硅胶类和聚苯乙烯类，但粒径要比分析用的填料大，而且粒径越均匀分离效果月越好。如果流动相偏酸或偏碱，建议用聚苯乙烯类填料，这类填料进口的很贵。国内的南京麦科菲高效分离载体有限公司也有同样产品，我用来分离核苷酸，白介-2，EPO,效果与Source相当，比活略好，但价格只有Source的70%。这是一家留德博士办的

8、公司，采用的是在德研究的技术。还可以根据客户的要求专门制备所需的填料。联系方法：Tel: FAX: E-mail请问各位大侠:1.对于在柱子上不显色的样品如何分离,如何确定 各个色带已经分开2.柱子的粗细，长短对分离有什么影响呢3.柱子后面跑不动的部分 吸附在硅胶上，如何取下来欢迎大家讨论！回：31楼1. 用TLC板跟踪分析2. 柱子粗的话，分离速度相对会快；长短取决于待分离物的多少（一定长的柱子能否把待分离物分开）和其它因素3.把硅胶取下来，用溶剂溶解，再过滤除去硅胶，滤液蒸干不知说得对不对，请各位大侠多指教！谢谢32楼!可是一根柱子至少要过一天,不可能不停的 点板把, 费时费力费钱阿!有没

9、有捷径可走呢可以用真空液相层析，分离几十克东西用不了半天，且用硅胶很少。真空液相层析即vacuum liquid chromatography(VLC),即用真空代替压力进行层析，具体方法可见Synthesis,2001,No,16,2431-,and J chem edu,1997,10,1222-,哈哈，一定要仔细阅读。但是怎样选择相应的显色剂呢一般还都是适用紫外灯吧这个话题很好，我也老是走不好。请教：一开始是否能用跑板用的比例去洗脱还是极性从小到大怎样去检测各位同仁，有问题要请教了。如果层析硅胶在打开包装后，吸收了空气中的水分，这会不会影响硅胶的分离效果。请各位高手赐教。先谢了。当然会影

10、响分离效果了 因为硅胶的活性级别改变了 影响硅胶的吸附性能 和爬板是一个道理最近合成了一系列化合物,过柱子时总是分解(不管是硅胶还是中性氧化铝),重结晶又不行.请教各位高手应该怎么分离才好回复24楼，我也喜欢用毒性小的溶剂代替毒性大的溶剂，但有时替换以后并不好，你可以先跑板看看再代替，有高效液相走液相也可以。如果杂点不多的话，完全可以用氯仿，用二氯甲烷代替也许更好，二氯甲烷毒性小得多干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入1-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶

11、剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下。- 作者：leleba- 发布时间：2004-3-16 21:07:44- 请26楼的lanthanum 讲讲如何干法上样吧偶不太会，要注意什么吗这个地方真是太好了,我也经常遇到以上的问题,这下可真是收获不小.有时爬板效果不错,但一上柱子效果就不明显了.或者看起来色带还不错,但走的太慢,硬是不下来.一调节极性杂质就夹带下来了.是不是我的洗脱液选的还不合适望给位高手给予指点!谢了!在装柱子的时候，不管是湿法还是干法装，用节橡皮管边装边敲打，这样可以把柱子装的比较匀，只有柱子装得匀，分离效果才能好。一般的柱子底下的死体积太大，很多分开的物质又重新被合在一起 造成分离失败

12、爬板子时，Rf值在什么范围对柱子分离效果最好回二楼的可以单用氯仿过，最后在用甲醇冲残余物质觉得柱子爬得好坏与很多因素有关,但是主要的是洗脱液的选择和洗脱的快慢.一般板的Rf 在左右比较好。柱子和板子的硅胶性能差别一般挺大，主要是粒度不同，空隙率不同，我的经验是3-8倍。还有如Merck公司的大孔硅胶孔径180埃，一般国产60埃，差别太大。230-400目的Merck硅胶可以装flash柱，国产的我没试成功过我现在做个产品但是提不纯,3种物质在TLC分离效果很好(展开剂CH2Cl2:CH30H=9:1)请问用硅胶柱分离可行吗如可行用多少目的硅胶和多长的柱子1 R-CH(CH2OOCCH3)22

13、R-CH(CH2OH)23 R-CH CH上接CH2OH 和 CH2OOCCH3两个基团 2和3只溶于水和醇，1溶于水，醇，二氯甲烷。试试分级萃取。我现在做个产品但是提不纯,3种物质在TLC分离效果很好(展开剂CH2Cl2:CH30H=9:1)请问用硅胶柱分离可行吗如可行用多少目的硅胶和多长的柱子1 R-CH(CH2OOCCH3)22 R-CH(CH2OH)23 R-CH CH上接CH2OH 和 CH2OOCCH3两个基团 2和3只溶于水和醇，1溶于水，醇，二氯甲烷。 分级萃取我我今天试过,还是搞不定,楼上的朋友还有更好的方发吗我需要的是产物3,2和3 不好分离,试试用甲醇/石油醚（正己烷），

14、萃取。再不行就过柱吧：）我认为主要在怎么装柱子！这个应该是关键！请问 lanthanum， 什么是分级萃取，是不是用极性不同的溶剂分次提取。这两者用色谱法应不难分离，柱的尺寸应该根据你的量，两者容易分离的话，可用粗点的硅胶100-200mesh，柱子可以采用短粗型，这样速度快Rf值在多少过柱比较好，还要看分离的化合物的情况。如果产物相对干净，杂质点隔得较远，Rf值可以大一点也能分离开，如果杂质点较多，tlc上距离有比较近的话，Rf值应该小一些，最好在。首先是爬板，找到合适的洗脱剂。其次是装柱，没有气泡压实，柱平整。再次是洗脱剂，如果Rf值相差很大，可以用爬板的极性，否则梯度洗脱更把握一些，这个

15、和经验很有关系。柱的高度和粗度对洗脱的效果很有影响。转载1发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（一) zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:51:02 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（一）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:03:06 2003)转信站: SMTH!从96年开始过柱子，差点就八年抗战了。常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得

16、，希望能有所帮助。柱子可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗

17、剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。转载2 发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（二）zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:51:40 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（二）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:04:17 2003)转信站: SMTH!关于柱子的尺寸，应该是

18、粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。现在见到的柱子径高比一般在1：510，书中写硅胶量是样品量的3040倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在，杂质相差以上），就可以少

19、用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm20cm的柱子）；如果相差不到，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。转载3发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（三）zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:52:22 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（三）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:05:02 2003)转信站: SMTH!关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。可以湿柱，也可以干柱。不

20、过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。也是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加压、常压、减压，随需而定。因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基裸

21、露在外，很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详参详。转载4发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（四）zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:52:46 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（四）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:0

22、6:32 2003)转信站: SMTH!关于湿法、干法上样。湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说

23、法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。转载5发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（五）zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:53:18 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（五）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:07:00 2003)转信站: SMTH!溶剂的选择。当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银

24、子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，

25、所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨转载6发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我

26、见（六）zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:54:01 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（六）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:08:19 2003)转信站: SMTH!关于操作问题。1 装柱。柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了

27、。当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！2 加样。用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（24cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。3 淋洗剂的选择。感觉上要使所需点在左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf在，即使相差也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过

28、公式的比较：一次的分离度，肯定不如（）的三次方或四次方大转载7发信人: zagzig (拼完了爱咋咋地了), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（七）zz发信站: 日月光华 (2004年01月14日21:54:29 星期三), 站内信件发信人 (恐“龙”), 信区: Chemistry标 题: 柱子之我见（七）发信站: 我爱南开站 (Sun Dec 21 18:08:50 2003)转信站: SMTH! 样品的收集。用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可以采用氧化铝作固定

29、相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，wuwu。如果都用小试管那工作量又太大。5 最后的处理。柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。罗罗嗦嗦写了这么多，有不对的地方也希望大家提出，共同讨论。请教：如何防止柱子开裂需要注意些什么1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化2.将柱子必须装平整、均匀3.考虑有限柱填料的吸附量4.可考虑用剃度法分开并洗脱the best solvent fo

30、r column chromatography is the one that makes the retention factor (Rf) to be around to .一般装柱用干法快而且好对付一般的过柱足够了过柱时的洗脱液最好比跑扳的稍大，样品带一定要窄过柱子确实有难度，我做了个东西跑了几次都没有拿到纯的东西！得努力把柱子跑好啊！我做新化合物用薄层层析硅胶跑，效果不错干法较快,所以我经常用干法,不过就是比湿法多用些淋洗剂!1先把板爬好，一般柱子极性要比板小我觉得展开剂一般Rf在到较适宜，有亲身体验对于对无色物质进行分离，除用点板监测还可用什么方便的方法进行监测实验室常用的正向柱分离

31、有加压、常压和减压等，我原是做天然产物全合成的，也做过少量天然产物分离工作。还常用到反向柱。正向柱分离1)加压、常压柱主点Rf 左右，相近的组份要能分开。2)减压柱主点Rf 左右，相近的组份要能分开，或次组份在原点。2.硅胶或氧化铝等1)加压、常压柱60到200目2)减压柱300目以上大空树脂挺好，但自己用得少。硅藻土很多时侯也很好。3.柱径好分、量大，柱径可大些；难分、量小，柱径可小些。4.柱长与柱径相似，好分、量大，柱长可短些。5.制样减压一般是干法拌样；加压、常压可干法拌样，也可湿法备样。6.洗脱液老板科研经费多，用加压、常压耗溶剂太多；要想给老板省钱，给自己省时间，就用减压。7.接液主点未出，多接；主点快出来及快出完，少接。8.收率对同一样品且同量减压一般收率低；加压、常压一般收率高。9.备柱无论减压、加压、常压；无论干法、湿法备柱。填料要想法压实