胶体金法生产工艺处理制度标准规定模板.docx

1、胶体金法生产工艺处理制度标准规定模板乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）生产工艺规程1.适用范围适用于乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒（胶体金法）的生产和质量控制。2.职责研发部：制定本规程。生产管理部：执行本规程质量管理部：按本规程执行，监督本规程的执行情况。3.内容3.1.依据乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法） 产品标准3.2.产品名称、剂型、规格3.2.1.名称：（1）商品名：乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）（ 2）英文名： Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen（ColloidalGold I

2、mmunochromatagraphic Assay）（ 3）汉语拼音名： Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance Shiji（ jiaotijin Fa）3.2.2.类型：三类 6840 体外诊断试剂。3.2.3.规格： 100T/ 盒 （25T/ 筒 *4 筒 ）（无卡） ； 25 袋 /盒（ 1 支 /袋） 、 50 袋 /盒（ 1 支 /袋）3.3.产品概述乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒表面抗原，在硝酸纤维素膜上检测线（ T）和质控线（ C）分别

3、包被重组的乙型肝炎病毒表面抗原和羊抗兔 IgG。当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒表面抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒表面抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线（ T）时与预包被的重组乙肝表面抗原反应，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔 IgG则在质控线（ C）与羊抗兔 IgG结合显现红色条带。阴性样本则仅在质控线（ C）显色。3.4.试剂盒组成、储存、有效期3.4.1. 试剂盒组成：组件100T/ 盒25 袋 /盒（ 1 支 /袋）50 袋 / 盒（ 1 支 /袋）装量数量装量数量装量数量试纸条25 条 /筒4筒无无无无试纸卡无无1 支 /袋25 袋1 支

4、 /袋50 袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份3.4.1.储存条件： 2-30 保存。3.4.2. 有效期： 24 个月。3.5.生产工艺流程图文件末（ 23 页） 。3.6.生产工艺过程及工艺条件3.6.1.配液根据以下各配方，按各相关试剂配制作业指导书进行配制。（ 1）2）原料名称用量配制环境：原料名称用量配制环境：原料名称用量配制环境：3)3.6.2.样品稀释液分装按照 液体分装作业指导书 ， 根据相应规格的装量要求进行分装， 分装量 规格 +附加量。如下表所示(单位： ml/ 瓶) ：标示量附加量装量15ml0ml15ml3.6.3 胶体金制备原料

5、名称用量烧金溶液 A烧金溶液 B超纯水制备环境：金标车间配料间(十万级洁净区)1 ) 量取 ml 超纯水到适当大小的烧瓶中；2 ) 量取 ml 烧金溶液 A 并加入烧瓶中；（ 4） 水继续沸腾 5 分钟关闭加热搅拌器，并将烧瓶移至桌面，用铝箔纸盖住瓶口，让胶体金自然冷却。（ 5 ） 胶体金的储存： 2 8 ；有效期 6 个月。3.6.4 胶体金标记3.6.4.1根据试样验证结果，量取胶体金，快速搅拌中加入 0.2MK 2CO3液，混匀后，快速搅拌中加入相应量的乙肝抗原或兔 IgG（乙肝抗原和兔 IgG 分开标记 ），混合均匀后，反应30 分钟。3.6.4.2终止：充分反应后在搅拌中加入金标记过

6、程终止液（ 20ul/1ml 金溶液） ；继续搅拌30 分钟直至混匀。1.1.1.3将胶联溶液离心， 9000 转离心 6 分钟，收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10 ；1.1.1.4储存： 2 8 ，有效期 6 个月。3.6.5铺金液配制3.6.5.1用工作液将 1/10 体积的乙肝病毒表面抗原金标记物沉淀放大 10 倍；兔 IgG 金标记物沉淀按 1/3 乙肝病毒表面抗原沉淀的量，加至上述乙肝金标工作液中（即兔 IgG 金标记物沉淀为乙肝的 1/3 ）3.6.5.2按 0.2mg/ml 的量加入抗 RBC到铺金液中；3.6.6小样试验：在铺金和划膜之前，应首先将待铺的基因重组抗原 -

7、胶体金复合物溶液，先铺一条玻纤（ 6mm 310mm ）上，用配好的质控线液、检测线液划膜一张，与其他组分组合在一起，进行检测，要求：阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率（ -/- ）应为 20/20 。灵敏度：灵敏度参考血清，呈阳性反应。精密性：连续重复测定精密性参考品 10次，反应结果应均为阳性，且显色度均一。3.6.7铺金3.6.7.1按每张玻纤可以铺金 36ml 计算金标液的体积3.6.7.2按计算好的体积在每张玻纤上铺金，并用圆形试管刮均匀。3.6.7.330% 湿度以下， 37 40干燥 18 24 小时， 如不立即使用， 加干燥剂铝箔袋封存。3.6.7.4储存：保存过程中严

8、格防潮，以后打开和使用一定要在 30% 湿度以下。3.6.7 膜包被按照划膜机标准操作规程 ，以 “ 252 ” 泵速（对应速度 2.7ul/cm ） ，将质控线液和检测线液均匀地划在膜上，质控线划在距膜顶端 12.1 0.1cm 处，检测线划在距膜顶端12.5cm 0.1cm 处，质控线与检测线相距 5mm 1mm 。3.6.7.2 30%湿度以下， 37 40干燥 18 24 小时，如不立即使用，加干燥剂铝箔袋封存。3.6.7.3 储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在 30% 湿度以下。3.6.8样品垫的准备3.6.8.1按每张玻纤可以铺液 36ml 计算全血样品垫处理液的体积

9、3.6.8.2按计算好的体积在每张玻纤上铺液，并用圆形试管刮均匀。3.6.8.330% 湿度以下， 37 40干燥 18 24 小时， 如不立即使用， 加干燥剂铝箔袋封存。3.6.8.4储存：保存过程中严格防潮，以后打开和使用一定要在 30% 湿度以下。3.6.9半成品检测：以上生产出来的胶体金、胶金垫、包被膜、分装好的样品稀释液均应作为半成品请检，质量管理部 QC 按照半成品检验作业指导书检验合格方可进入下一道工序。3.6.10组装3.6.10.1按照贴膜组装工序作业指导书的规定，将包被好的 NC 膜贴在塑料大卡上。3.6.10.2各组成部分的切割：各组分用切割机切割成以下大小：金标垫： 6

10、mm 310mm 样品垫： 15mm 310mm 吸水垫： 20mm 310mm不干胶纸： 13mm 310mm3.6.10.3层压将上述切割好的材料进行贴膜制成乙型肝炎表面抗体胶体金试纸条，各膜层叠关系如下：1） 不干胶纸2） 样品垫3）金结合物垫4）包被有检测线（ T 线）和质控线（ C 线）的硝酸纤维素膜5）吸水垫6）塑料衬片3.6.10.4层压参数金标垫 2 片，第一片搭上 NC 膜 2mm ， 第二片搭第一片 3mm ；样品垫 15mm ，搭上金标垫 2mm ；吸水垫 20mm ，搭上 NC 膜 2mm ，不干胶 13mm ，搭上露出的 NC 膜2mm 。3.6.11切条（ 1 ）组

11、装环境条件的控制在相对湿度 30% 以下，并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过 2 小时。（ 2）按照切条工序作业指导书使用切条机，将组装好的乙肝病毒表面抗体检测试剂切割成宽度为 2.5mm 0.1mm 试条， 切条过程中应于前、 后及过程中每 30 分钟对切条的宽度检查一次。3.6.12检测卡的装配按照不同规格的要求，需要进行检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC 卡中， 再用压卡机进行压卡， 装条时应注意检查条有无划痕污渍， 宽度是否符合要求；PVC 卡外观应清洁，平整，无变形，底面配套性好，压卡应注意调节松紧度，避免将卡压破或变形。3.6.13内包装3.6.13.1成品规格

12、为 25 支 /盒、 50 支 /盒的，所对应半成品的内包装：（ 1 ）装卡： 单个卡和无水硅胶干燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装。（ 2 ）密封。密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，使用封口机进行 封口。3.6.13.2成品规格为 100 支 /盒的，所对应半成品的内包装装筒，将无卡试纸以 25 支 /筒的规格装入筒中，放入干燥剂，然后封筒。3.6.14外包装（ 1 ）不干胶标签批号、生产日期、有效期打印：以试纸条组装日期为“生产日期” ，并由此推算出 “有效期至” ， 批号按照 批号管理规程 的规定设置。 按照 批号打印机使用、清洁、维护、保

13、养标准操作规程进行操作打印标签、包装盒上的“三期” 。（ 2）贴签：在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签。（ 3）成品组装：纸盒内组份：组件100T/ 盒25 袋 /盒（ 1 支 /袋）50 袋 / 盒（ 1 支 /袋）装量数量装量数量装量数量试纸条25 条 /筒4筒无无无无试纸卡无无1 支 /袋25 袋1 支 /袋50 袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份按包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书。包装组组长每盒清点查看，合格后用封口签（合格证）封口。（ 4）储存： 2 30

14、，有效期 24 个月。3.6.15. 成品检定：抽检量为 3%，最小抽检量为 500 人份。经质量管理部 QC 检测合格，QA 做生产记录审核后开具成品放行审核单方可入库。3.7 质量标准3.7.1.主要原辅料质量标准及依据：（ 1 ）重组乙肝抗原质量 标准性状肉眼观察不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒蛋白浓度用福林 -酚法，以 Sigma 公司生产的牛血清白蛋白作对照 ， 蛋白含量以毫克 /毫升表示 ， 浓度为 0.5-10.0mg/ml ；纯度和分子量用 SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量 10g，电泳带显示无杂蛋白。 分子量：效价ELISA检测，效价应大于 1 10000功能

15、性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测： 阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率 （ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml ；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本， 分别重复检测精密度参考品 5次， 结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置 37放置 10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合上述要求。贮藏条件-20 冻存依据抗原质量标准及检验操作规程2）兔 IgG

16、 抗体蛋白浓度经 OD 280方法检测浓度 5mg/mL 。纯度用 SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量 10g，电泳带显示无杂蛋白功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测： 阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率 （ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml 。；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本， 分别重复检测精密度参考品 5次， 结果应全部为阳性， 且呈色度均一。 稳定性试验： 置 37 放置

17、 10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。且背景干净，质控线 2分钟内显出， 在 10-30ug/ml 包被时具有活性标记时具有活性。贮藏条件-20 冻存依据抗体质量标准及检验操作规程3）羊抗兔 IgG蛋白浓度经 OD 280方法检测浓度 5mg/mL 。纯度用 SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量 10g，电泳带显示无杂蛋白功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测： 阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率 （ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml ；批内精密度

18、用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本， 分别重复检测精密度参考品 5次， 结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置 37 放置 10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。且背景干净，质控线 2分钟内显出， 在 0.5-2.0mg/ml 包被时具有活性标记时具有活性。贮藏条件-20 冻存依据抗体质量标准及检验操作规程4） 兔抗 RBC纯度用 SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量 10g，电泳带显示无杂蛋白活性琼脂免疫双扩试验，测定效价应

19、不低于 1 ： 8。功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测： 阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率 （ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml ；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本， 分别重复检测精密度参考品 5次， 结果应全部为阳性，且呈色度均一。稳定性试验：置 37放置 10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。血球被结合，背景干净贮藏条件-20 冻存依据

20、抗体质量标准及检验操作规程6） 硝酸纤维素膜： Millipore Hiflow Plus 18002 硝酸纤维素膜质量 标准外观膜条平整，无弯曲褶皱，表面无污迹 ,液体表面流速稳定、迁移均匀。厚度 215 20m 。毛细迁移速率每 4cm ，水的层析时间是 135 30s。功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测： 阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率 （ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml 。；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一

21、。批间精密度：连续三批的小试样本， 分别重复检测精密度参考品 5次， 结果应全部为阳性， 且呈色度均一。 稳定性试验： 置 37放置 10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。贮藏条件常温密封干燥储存依据包装材料质量标准及检验操作规程7 ） 玻璃纤维纸质量 标准外观表面平整、无污迹，纤维结构均匀、致密。厚度 0.5 0.05mm 。吸水性 30mg/cm 2功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测： 阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率 （ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU

22、/ml 。；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一。批间精密度：连续三批的小试样本， 分别重复检测精密度参考品 5次， 结果应全部为阳性， 且呈色度均一。 稳定性试验： 置 37 放置 10天，进行阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密度的检测，应符合要求。贮藏条件常温密封干燥储存依据包装材料质量标准及检验操作规程3.7.2 半成品质量标准：1 ）胶体金质量 标准外观目视胶体金外观，呈紫红色，液面无油状漂浮物，容器底部无黑色颗粒物凝集。最大吸收峰值用紫外分光光度计对胶体金溶液进行全波长扫描，应525 5

23、35nm 处有单一吸收峰。贮藏条件2 8 冷藏储存依据半成品质量标准及检验操作规程2）胶金垫质量 标准外观胶金垫颜色应为均一的暗红 -暗紫色，无蓝变等异常。胶金垫未涂有胶体金复合物的位置应为玻纤的白色，无异色；宽度均一，无破损。功能性试验与其他组分组装后检测：阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率（ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml 。；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡， 结果应全部呈阳性， 且显色度均一。贮藏条件常温干燥密封保存依据半成品质量标准及检验操作规程3）包被膜质量 标准

24、外观膜表面应洁净，无污染、破损等，如有，需用笔标出。膜的开始端与末端喷线不好的部位需用铅笔标出。包被膜干燥后，在 C、 T 线处均没有明显的痕迹。功能性试验与其他组分组装后检测：阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率（ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml 。；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡， 结果应全部呈阳性， 且显色度均一。贮藏条件常温干燥密封保存依据半成品质量标准及检验操作规程4）样品稀释液质量 标准外观所装容器与规定一致，液体澄清透明，无絮状物或沉淀。功能性试验与其他组分组装

25、后检测：阴性参考品符合率： 20份阴性参考品符合率（ -/- ）应为 20/20 ；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml 。；批内精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡， 结果应全部呈阳性， 且显色度均一。贮藏条件常温密封保存依据半成品质量标准及检验操作规程3.7.3 成品质量标准：标准批号、生产日期、有效期打印清晰正确。 金标条材料附着牢固，内容齐全；试纸条不露边、不露 金条、不露吸水纸；卡上的产品名称等内容印刷正确， 字迹清晰。样品稀释液装量2ml 0.2ml试纸条宽度试纸条宽度不低于 2.5mm 。液体移行速率液体移行速率

26、不低于 10mm/min 。阴性参考品符合率用 20份乙型肝炎病毒表面抗体阴性参考品进行检测，结果应全部呈阴性。最低检出量抗 -HBs的最低检出量应不高于 10mIU/ml 。精密度用 1 份乙型肝炎病毒表面抗体精密性参考品平行检测同批内的 10 个测试卡， 结果应全部呈阳性， 且显色度均一。稳定性将成品于 37 放置 10天后，按以上方法检测上述各项，应符合上述规定贮藏条件2 30 常温密封保存依据成品质量标准及检验操作规程3.8. 质量控制3.8.1. 主要质量控制点：按生产工序和工艺特点规定生产过程中的主要质量控制点，如下表所示：工序生产内容质量控制点配液按照配方称量配制一人称量一人复核

27、金标垫制备胶体金制备烧金容器洁净、加液量准确、迅速，应在沸腾时加液重组乙肝表面抗原 - 胶体金复合物制备加液量、标记时间 30 分钟、终止时间 30 分钟、离心时应保持平衡、离心转速 9000 转 /分钟、时间 10 分钟。复溶液体应澄清，不得有不溶沉淀。铺金、干燥铺金应均匀，干燥时间 18 24 小时、温度 37 40 、湿度 30% 以下，储存环境：常温，湿度 30% 以下。膜条 制备划膜、干燥质控线划在距膜顶端 12.1 0.1cm 处，检测线划在距膜顶端 12.5cm 0.1cm 处，质控线与检测线相距 5mm 1mm 。，划膜机泵速为“ 252 ”，干燥时间 18 24 小时、温度3

28、7 40 、 湿度 30% 以下， 储存环境： 常温， 湿度 30%以下。样品垫制备铺垫、干燥铺垫应均匀，干燥时间 18 24 小时、温度 37 40 、湿度 30% 以下，储存环境：常温，湿度 30% 以下。样品稀释液 分装分装样品稀释液每瓶装量 2 0.2ml ，瓶盖紧密不漏液组装组装成试纸条1 、金标垫 6mm ， 2 片，第一片搭上 NC 膜 2mm ， 第二片搭第一片 3mm ； 样品垫 15mm ， 搭上金标垫 2mm ；吸水垫 20mm ，搭上 NC 膜 2mm ，不干胶 13mm ，搭上露出的 NC 膜 2mm 。 2、环境湿度控制在 30% 以下。切条切条1 、 切割成宽度为 2.5mm 试条，切条过程中应于前、后及过程中每 30 分钟对切条的宽度检查一次。2 、 环境湿度控制在 30% 以下。内包装试纸卡内包装1 、 试纸条应安放在卡的相应位置，应确保无漏放。2 、 铝箔袋封口严密，干燥剂无漏放。3 、 内包装环境：湿度控制在 30% 以下。试纸条内包装1 、 试纸条 25 条 /筒，数量应正确。干燥剂无漏放2 、 包装筒封口严密，干燥剂无漏放。3 、 内包装环境：湿度控制在