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1、分子生物学期末考试复习提纲刘进元分子生物学复习提纲H克隆载体H1质粒载体的设计1、 线性载体片段自身环化所形成空质粒载体。自环化载体可以通过转化克隆中销量提取质粒，然后进行酶解以及随后的琼脂糖凝胶电泳分析，但是不方便进行大规模筛选。2、 pBR322是最早开发出来的质粒载体，其包含两个抗生素基因，如果目的DNA片段插入到这两个基因的任意一个编码区内，就会发生插入失活，继而可以通过由转化子所显示的抗生素抗性来鉴定重组体。3、 通过在转化和铺板的操纵中对于不同抗生素敏感性的菌株来进行重组型检测，过程较常规。4、 蓝白斑筛选（重点）：利用一种蓝色化合物的形成作为指示剂，在此情况下失活的基因是lacZ

2、，which编码-半乳糖苷酶，受乳糖启动子的调控。当大肠杆菌表达lac阻抑物的时候，载体上的lacZ基因由IPTG（异丙基-D-硫代半乳糖苷）诱导表达，形成的酶可以利用底物（X-gal）形成一种蓝色化合物。但如果重组质粒中的lacZ位点发生了插入失活，那么就不能形成蓝色菌落。具体操作见书上92页。5、 多克隆位点，第一个部分有多个限制酶酶切位点，这一个区域称作MCS（蓝色斑就是没有插入片段，白色斑就是插入片段。）目的DNA的插入在这些多克隆位点中的任意一个位点或者两个位点之间，都会使lacZ基因失活，并且在适宜的平板上产生白色菌落。所以MCS让选择位点用于克隆的限制酶有一定的灵活性。6、 pU

3、C载体附近有启动子，所以可以用来转录插入的DNA，从而可以表达插入基因的表达效果。7、 为了表达插入的目标基因，需要有相同定位（和lacZ基因）的可读框，并且是连续不间断的，这样在表达之后就会产生融合蛋白。H2 噬菌体载体1、 侵染大肠杆菌的噬菌体可以用作科伦载体，噬菌体颗粒将他的线性DNA注入细胞，DNA从而连成环状，然后DNA复制组装成噬菌体颗粒并且随细胞裂解释放到细胞外面，造成细胞死亡（裂解期），但如果是通过特异性位点进行整合进宿主基因组，就可以进行长期的插入表达（溶原性）。2、 为了防止片段之间相互连接可以用碱性磷酸酶进行处理，目标是为了臂和目的片段在较高的浓度下进行相互连接，形成较长

4、的线性产物。3、 相对于利用质粒的方法转化感受态细胞，利用噬菌体颗粒的侵染性：在DNA文库的构建方面有更有效的利用，基因在体内复制产生多拷贝的基因线性分子并且这些多联体在cos位点处切开，产生单个的基因组，再包装进噬菌体颗粒。其中：噬菌体外壳蛋白以及噬菌体DNA加工酶的混合液被称作包装提取液，而包装提取液可以感染不同的包装缺陷型（突变）。4、 利用琼脂平板上进行连续菌苔的细胞涂布，由于反复感染和细胞的裂解循环，会形成空白区域也就是噬菌斑。which类似于细菌的单菌落，可以从噬菌斑中分理出噬菌体颗粒，再纯化出重组的DNA，或者从用特异重组噬菌体感染的培养物的上清液中进行纯化。5、 M13噬菌体是

5、需要单链片段的时候，用标准质粒操作法将片段亚克隆进M13RF，用重组DNA转染大肠杆菌细胞然后涂布平板会形成像噬菌体感染相同的噬菌斑，但噬菌斑是由于侵染细胞生长缓慢形成的而不是裂解所形成的。同样可以进行蓝白斑筛选。因为复制起始点决定了包装进噬菌体的链，所以可以根据目的片段的哪条链需要被装入噬菌体来决定使用哪种载体。6、 M13噬菌体是通过感染感受性的大肠杆菌后合成互补链，形成双链环状DNA，也就是复制型。H3 黏粒、YAC与BAC1、 为了解决庞大基因组的生物构建DNA文库的问题，开发出了具有大DNA容量的载体。PFGE（脉冲场凝胶电泳）能够分离大片段的DNA，并且能够作图和分析。传统的琼脂糖

6、凝胶电泳是不能够分离DNA大片段的。2、 黏粒载体因为其质粒分子的形式，利用了噬菌体cos位点的特性，吧体外的DNA包装进入颗粒，并且要求在线性DNA上游正确的距离（距离cos位点）。3、 最简单的黏粒载体是一个正常的小质粒，需要复制起点（ori）、选择性标记、cos位点、用于克隆的限制性位点。用限制酶降解并与目的DNA片段连接，DNA被包装进噬菌体颗粒，然后通过cos点的退火配对就可以使DNA重新环化并且使其正常扩增。4、 实际克隆采用更精细的方法以防止载体的多个开呗或者DNA的多个拷贝进入某个重组体。5、 YAC是酵母人工染色体，学习图H3.3 YAC载体的结构。其构建方法类似于黏粒，开发

7、成了能够携带巨大克隆片段的载体，并能够组合到大肠杆菌的质粒上。YAC载体的容纳量很大，可以用来克隆完整的人类基因。6、 为了确保YAC的正确重组，在酵母细胞中正确生存，SUP4，在重组体中插入失活功能，然后进行一个关于红白颜色测试的实验，其实验原理和蓝白斑筛选差不多。7、 酿酒酵母选择性标记不能够赋予大肠杆菌物质抗性，但能够使其在某种选择培养基中生长，因为可以使营养缺陷型酵母发生基因重组从而有生活能力（例如生产色氨酸）。8、 BAC是细菌人工染色体，which客服了在用YAC克隆非常大的基因组片段的时候所遇到的问题。BAC能够容纳约325kb左右的插入序列，虽然没有YAC长，但是BAC更加稳定

8、并且容易转化，在大肠杆菌宿主中生长迅速。H4 真核生物载体1、 遗传工程的许多应用需要能在各种真核物种中表达外源基因的载体。2、 对于动物细胞转染DNA（植物细胞需要破解细胞壁，太难了），可以较低效率吸收与磷酸钙一起沉积在细胞表面的DNA。用高电压处理细胞可以提高转染的效率，因为高电压可以在细胞膜上打开临时的孔道，这个过程我们称之为电穿孔。3、 用物理方法如微注射或者基因枪进行显微注射也可以把DNA注入培养中的单个动物或者植物细胞中（甚至可以注入到细胞核内）。用基因枪把包被着DNA的金属微粒打入靶细胞。4、 2载体是在酿酒酵母中用于基因克隆与表达的载体设计的，which有一个复制起点和两个涉及

9、复制的基因，并编码一个位点特异性的重组蛋白FLP，基于2的质粒载体都被称作酵母附加型质粒（YEp），这些通常像质粒一样被复制（从2复制起点复制），但是Yep也可以通过与选择基因的缺陷性基因组拷贝进行重组从而整合进酵母染色体。5、 我们侵染植物细胞的时候一般用Ti质粒，侵染的时候Ti质粒的部分T-DNA会一起整合进植物染色体DNA，所以这个T-DNA基因可能会造成细胞的时空生长，甚至形成冠瘿瘤或者根瘤。6、 Ti质粒很大，很难操作，所以为了不使T-DNA转录进植物细胞，我们会先在标准的大肠杆菌质粒上构建重组的T-DNA，然后再删除形成根瘤的基因，从而形成卸甲T-DNA穿梭质粒。7、 杆状病毒有一

10、个极强的启动子，which同样可以驱动重组进杆状病毒基因组的外源基因的过量表达，通过这个方法可以培养感染的昆虫细胞来大量量产目的蛋白。因为昆虫细胞可以产生许多翻译后修饰的动物蛋白，但是细菌表达系统做不到这一点。8、 病毒同样可以作为载体转入哺乳动物细胞，如SV40，which可以感染多种哺乳动物。但是不能够转移大片段的DNA。9、 反转录病毒是一条单链RNA基因组，改DNA可以经过转位机制稳定整合进入宿主基因组，因为有强启动子，所以被当做基因治疗中的良好载体，因为外源DNA也可以以稳定的方式整合进入宿主的基因组。K 原核生物的转录K1 转录的基本原则1、 转录由RNA聚合酶催化，which需要

11、双链DNA模板与前体核糖核苷酸ATP、GTP、CTP、和UTP；2、 一条DNA链称为有义链，RNA的序列就是有义链上脱氧核苷酸序列的直接拷贝（U代替T）；另一条链称为反义链也就是模板链，它用作RNA合成过程中核糖核苷酸碱基配对的模板；3、 转录时RNA聚合酶（多亚基酶）结合到双链DNA上，并在启动子部位起始转录。启动子在编码区5端的上游。4、 不同基因间启动子的差别会导致转录起始效率的差异并且和调控有关，启动子内短的保守序列是聚合酶或者其他DNA结合蛋白的结合位点以起始或者调控转录；5、 结合到DNA模板上的RNA聚合酶以及辅助因子通常被称作转录复合物；6、 聚合酶沿5至3端方向延伸正在增长

12、的RNA链，同时酶自身沿着模板链反向移动，并在移动时局部解旋；7、 发生转录复合物的解体和RNA合成终止发生在特定的DNA序列也就是终止子处，这些序列有一些自身互补区，能够在RNA产物上形成茎环或发夹二级结构，which使聚合酶停顿并终止转录；8、 有一些终止子可以不需要辅助因子而独立终止转录，有一些需要蛋白作辅助因子。在终止反应中，RNA-DNA杂交体分开然后重新形成双链DNA，同时RNA聚合酶和所合成的RNA从DN链被解放；K2 大肠杆菌RNA聚合酶1、 全酶的完整酶分子有2个亚基，一个亚基，一个亚基，一个亚基以及一个亚基；其中亚基对于转录延伸不是必须的，在转录起始后就会从转录复合物上释放

13、下来。接下来剩下的酶沿着DNA酶进行移动，which被称作核心酶；2、 结合孔道的大小表明它可以直接结合16bp的DNA，while整个聚合酶所结合的DNA区域覆盖了大概60bp；3、 两个相同的亚基由rpoA基因编码，这种亚基对于核心酶的组装是必须的，同时有可能在启动子识别中也发挥一定的作用；4、 亚基被认为是RNA聚合酶的催化中心，利福平是RNA聚合酶的强抑制剂，能组织起始但是不影响延伸。可以表明亚基被这种抑制剂抑制，亚基由两个结构域，分别负责转录的起始和延伸；5、 亚基由rpoC基因编码，这个亚基结合了两个锌离子，which被认为参与了酶的催化功能。亚基可能负责酶与模板DNA的结合；6、

14、 大肠杆菌中最常见的是70因子（因为分子量是70kDa），与因子结合可以使DNA聚合酶从核心酶变成全酶。所以因子在启动子识别中起到最为重要的作用。7、 RNA链延伸到89nt的时候，因子就会从RNA聚合酶中释放出来了；K3 大肠杆菌70启动子1、 启动子通常位于被称为+1位点的转录起始位点的上游，所以启动子的编号是负数，反应的是在转录起始位点上游的距离；2、 70启动子由4060bp的序列组成。-55到+20的区域都被聚合酶结合，其中-20到+20的区域被强有力地保护起来。这样的紧密结合可以阻止核酸酶接近DNA。其中-40区域对于启动子功能仍然是需要的；3、 70启动子中最保守的序列是一个普遍

15、存在的6bp的序列。这段序列在-10位置，我们称它为Pribnow框，这段共有序列是：TATAAT，这段序列在各个位置上最常出现；其中TA和最后的T是最保守的，这段序列是聚合酶启动DNA解旋的序列；4、 在-35区域也有一段重要的共有6bp序列TTGACA5、 90%基因的转录起始位点是嘌呤，其中G比A更常见。在起始点核苷酸两侧分别是C和T碱基（such as CGT或者CAT）6、 不同启动子序列有很大差异，which导致转录效率高达1000倍，作用如下1）-35序列组成增强与聚合酶因子相互识别和相互作用的识别区2）-10序列对于DNA解旋很重要7、最初转录的30个碱基序列也会影响转录，有时

16、候会有特殊的启动子序列来影响转录效率比如什么什么操控子之类的，请自行学习；K4 转录的起始、延伸终止1、 RNA聚合酶的核心酶对DNA的非特异性的亲和力被称作松散结合；2、 因子使全酶结合到正确启动子位点的能力增强100倍，聚合酶与处于碱基配对状态的启动子DNA所形成的的最初的复合物被称为闭合复合物；3、 聚合酶作用可以促进解旋（负超螺旋能够增强许多基因的转录），DNA的初始解旋导致DNA与聚合酶形成开放复合物，这一过程被称为紧密结合；4、 聚合酶在合成开始首先掺入最初的两个核苷酸，并形成一个磷酸二酯键。最初的9个碱基一次加上，酶并不沿DNA链移动；在起始转录后，释放出因子，形成聚合酶-DNA

17、-新生 RNA的三元复合物，这个时候已经允许另一RNA聚合酶全酶从启动子再度起始转录。DNA的解旋区（成为转录泡），随聚合酶一起沿DNA链移动。解旋DNA区域稳定保持在17bp大小。学习P142的示意图加深理解5、 最常见的一个终止信号是RNA发夹结构，其中的RNA转录物因为自身互补所以可以形成一个稳定的、带一个茎和一个环的发夹结构。茎部富含G-C有利于碱基配对的稳定性。其后的一串U残基和反义DNA链的相应的A残基配对作用弱，which有利于RNA与模板DNA链的解离，所以RNA就能够从转录复合物中解放出来了！6、 有的终止位点不能形成强的发夹结构，需要辅助因子蛋白来帮助终止。是六聚体蛋白质w

18、hich在有单链RNA存在时可以水解ATP。这个蛋白质似乎能结合RNA上的遗传核苷酸，即通过识别一种特定的结构来进行终止。7、 蛋白沿新生RNA链向复合物移动，能够让RNA聚合酶在依赖的终止子处停止转录。这些信号是在新合成的RNA链上（识别的终止子），而不在DNA链上。有时依赖性的终止子有发夹结构，但缺少之后的一串不依靠终止所必要的遗传U残基；L 原核生物的转录调控：L1 色氨酸操纵子：1. 其包括了色氨酸合成途径中相关的五个结构基因trp E D C B A；当然也有Ptrp和Otrp；2. 其意义是当细胞内缺乏生物合成途径的产物色氨酸的时候使这些基因协同表达的进化系统；3. 色氨酸阻抑物与

19、色氨酸操纵子的操纵基因相互作用，且只有色氨酸阻抑物与色氨酸形成复合物之后才能结合到操纵基因上；4. 阻抑物是含有两个亚基的二聚体，和CRP蛋白结构相似。5. 色氨酸作为共阻抑物起作用，通过终产物抑制的合成，从而影响转录。（色氨酸多，便抑制色氨酸的合成）；6. 在Otrp（操纵基因）和trp E之间有一段序列的缺失会影响转录水平（导致转录水平上升），成为弱化子。7. 是一个不依靠因子的终止子区域。通过在RNA转录物中形成发卡结构从而作为一个高效的转录终止子，影响转录物的合成。8. 在Otrp和Trp E之间有前导RNA结构 4个序列互补区，形成不同的碱基配对的RNA结构。弱化子就是序列3和序列4

20、配对的结果。序列1、2；3、4也是互补的，同时2、3也可以互补，如果2和3形成发卡结构那么3、4就不会形成，转录就不会终止；9. 前导肽的作用就是决定色氨酸的含量并且控制转录的终止。10. 色氨酸（色氨酸操纵子编码的酶的最终合成产物）是翻译过程中所必须的，细胞对于它的含量非常敏感，决定了3、4序列间的发卡结构是否形成。11. 弱化作用：在色氨酸含量很高的情况下，核糖体迅速在两个色氨酸密码子中插入色氨酸，这样翻译直达前导肽末端，当RNA聚合酶到达终止序列的时候，因为核糖体封闭了序列2，所以能够形成发卡结构，导致转录的终止。12. 当色氨酸缺乏的时候，翻译过程将缺少氨酰tRNA，核糖体将在两个色氨

21、酸密码子上滞留，封闭1。所以在2和3上形成发卡结构，这样就不会形成终止子，就可以继续转录。13. 色氨酸含量的高低决定了转录是提早终止（弱化作用）还是继续转录。14. 色氨酸弱化作用可以弱化10倍，阻抑物是70倍。两者结合最多就可以抑制七百倍。有一些操纵子只有弱化作用没有阻抑物的作用，比如his操纵子。L2不同因子对于转录的调节1 因子亚基是识别启动子序列的关键元素2 转录起始后因子就会从核心酶上释放，既能够结合到核心RNA酶上，同时也能够识别DNA上特殊的启动子序列。3 因子识别不同的大约在-35和-10位点为中心的序列组成的启动子，其中-10区域更加重要。4 70是大肠杆菌中最为普遍的因子

22、，负责识别共有元件-35和-10的一般启动子。5 大肠杆菌中对于不同的因子的使用而发生改变的实例就是热休克反应：在一般温度是一般是70结合启动子区域较多，当升温到42度时，就会变成32的全酶负责识别热休克蛋白的启动子，结合不同的序列。（大部分主要序列在此温度下已经不能够进行合成），当温度升到50度的时候，大肠杆菌便已经不能生长。6 菌种中有很多中不同的因子，这是细胞分化最基本的例子。通过因子的活性特殊性，可以使细胞产生共同协调的分化过程。7 噬菌体中的因子也是一样的，有28因子的全酶结合。通过这种方法，噬菌体能够运用宿主的RNA聚合酶按一定的顺序表达他们自己的基因。M 真核生物的转录M1：三种

23、RNA聚合酶的性质和功能1、 真核生物转录机制因为有大量多肽的参与使真核生物RNA聚合酶更加复杂。2、 RNA聚合酶I转录大部分rRNA的基因，存在于核仁；RNA聚合酶II转录所有的编码蛋白的基因和一些snRNA基因，存在于核质；RNA聚合酶III转录tRNA、5S rRNA和U6 snRNA的基因以及其他一些小分子RNA，也存在于核质中。3、 编码同一RNA聚合酶两个两个大亚基具有同源性M2：RNA聚合酶I基因：核糖体重复1、 其负责rRNA在分裂间期的连续合成，rRNA的重复基因在不同的染色体上游5簇，其中有40个拷贝，RNA的多基因拷贝的连续转录是产生足够量的已加工rRNA所必需的的基础

24、物质（包裹进入rRNA）2、 UCE是rRNA启动子上游大学100bp处的上游控制元件，使转录效率提高了10-100倍3、 UBF是一种特意的DNA结合蛋白，可以和UCE结合。（通过结合还可以使UBF缺乏的时候刺激UBF的生成）4、 选择因子1是RNA聚合酶I转录所必须的，SL1结合并稳定UBF-DNA复合物。结合使得RNA聚合酶I能与上述复合物结合并起始转录，非常重要。5、 SL1中的TBP的蛋白质亚基是三种真核生物RNA聚合酶起始所必须的，是真核生物转录中的一个非常关键的因子。M3：RNA聚合酶III基因：5S基因与tRNA基因的转录1、 III位于核质里面，负责5S rRNA的前体、tR

25、NA以及其他snRNA和胞质RNA的合成。2、 在编码tRNA的DNA中有两个高度保守的序列，A框和B框。改序列也是编码tRNA自身的重要序列。所以tRNA内高度保守序列的同时也是高度保守的启动子DNA序列。3、 TFIIIC可以与tRNA启动子的A框和B框结合，TFIIIB可以与A框上游50bp序列结合。4、 TFIIIB由三个亚基组成，其中一个就是TBP，是三种RNA聚合酶的通用转录因子。而第二个亚基是BRF，和TFIIB同源。第三个亚基称作B。5、 TFIII C是一个为起始因子TFIIIB定位的装配因子。6、 特意DNA结合蛋白TFIIIA结合在5SrRNA启动子的C框，并作为装配因子

26、使得TFIIIC和5S rRNA相互作用。一旦TFIIIC发生结合，TFIIB就能够和复合体起作用并且开始转录（募集RNA聚合酶III）。（看书上159和160页的图，好理解多了）7、 RNA聚合酶III的终止仅需要聚合酶识别一个简单的核苷酸序列，which由成簇的dA残疾构成，并且其终止效率受到周围序列的影响。M4：RNA聚合酶II基因：启动子和增强子1、 RNA聚合酶II转录所有的编码蛋白的基因和一些snRNA基因，存在于核质；2、 在启动起始位点上游25-35bp的时候有一个称为TATA框的序列，与TBP进行结合，包括一堆额外的下游碱基。其决定了RNA聚合酶II的位置并正确起始转录。大约

27、50%的转录起始位点是嘌呤碱基；3、 SP1框在很多基因的上游单独存在或者和TATA框一同存在，还有CCAAT。称为上游调控元件（URE），能够确保启动子有效转录方面起到了非常重要的作用。4、 增强子是远离转录起始位点数千个碱基的调控元件。大概100-200bp长，含有多个对增强子总体活性起作用的序列元件，有广谱的或者细胞类型特异性的。增强子特性:赋予相连基因从正确的起始位点的强转录活性；不管位于连接基因的上游或者是下游任意方向上均可以激活转录；上游或是下游都可以在远离起始位点1kb以上发挥作用；优先激活两个串联启动子中距离较近的一个；M5：通用转录因子与RNA聚合酶II1、 TF是转录因子

28、transcribe factor2、 TFIID负责和含有TATA框的启动子序列相结合，在形成转录起始复合物的早期。学习164页的示意图；3、 TFIIA和TFIID结合能够增强转录因子D和TATA框的结合，稳定其复合体，转录因子A能够抵消抑制因子，阻止抑制因子和TFIID的结合让组装过程能够进行稳定的发生。4、 转录因子D结合后，转录因子B就会和D结合，并且B可以和RNA聚合酶结合，这是转录中非常关键的一步；然后E、H、J就会进行陆续结合复合物，形成一个至少由五个亚基组成的大复合体。5、 其中转录因子TFIIH在转录延伸上起到非常重要的作用6、 在不含TATA框的DNA序列上，RNA聚合酶

29、II含有和起始位点重叠的起始元件，在这些启动子上TBP就可以和另一个结合蛋白形成而添加到启动子上，接着以一种类似在含有TATA框的启动子上的方式来吸收别的转录因子和RNA聚合酶。N 真核生物的转录调控N1 真核生物的转录因子1、 转录因子能够特异地和DNA结合位点相结合然后激活转录，并且这些活性可以独立分配给特定的蛋白质结构域，为激活结构与和DNA结合结构域。2、 转录因子很多以同型或异型的二聚体形式存在，有一些转录因子有配体结合结构域，可以通过附加的小分子来调控转录因子自身的活性。3、 DNA的特殊的螺旋-转角-螺旋-结构在被称为识别的螺旋部分处在大沟中，并与DNA发生作用。4、 关于各个转

30、录因子的基本结构见书上的要点5、 碱性结构域：与亮氨酸拉链以及螺旋-环-螺旋二聚体结构域相结合的，碱性结构域一般以二聚体的形式和DNA结合。6、 亮氨酸拉链：每隔7个残基就会有一个疏水的亮氨酸残基，这些残基位于DNA结合域C端的螺旋上，这样侧面每两圈就会出现一个亮氨酸，形成一个疏水的表面，疏水表面之间就可以相互作用并且形成二聚体，这种相互作用形成一个卷曲的卷曲结构。7、 酸性激活结构域有很高比例的酸性氨基酸，同时谷氨酰胺结构域中谷氨酰胺的残基比例也很大，甚至比总体结构更加重要。8、 转录的阻抑针对激活因子功能的干扰：阻断激活因子的DNA结合位点形成非DNA结合复合体从而导致其不能结合形成正确的

31、DNA结合体掩盖激活结构域使之不能够识别并且结合N2转录调控举例1、 SP1是一段富含GC的保守序列GGGCGG相连，结合在许多持家基因的启动子中，SP1富含谷氨酰胺结构域并且和TAFII发生过特异性作用，TAFII因为能够和TBP发生特异性组合形成TFIID，所以这样能够调控起始转录复合物。2、 许多转录因子由激素激活，比如类固醇激素就能够穿越细胞膜并且和被称为类固醇激素受体的转录因子相互作用。受体平时一般和抑制蛋白相结合，当和类固醇激素结合后，受体就可以从抑制蛋白上游离出来形成受体二聚化并且转录进细胞核。3、 STAT蛋白通过和细胞表面的受体结合并通过称为信号转导的过程将信号传递给细胞内的蛋白质；4、 HIV能够编码一种称为Tat的激活蛋白，这种蛋白质是HIV基因大量表达所必须的。Tat与RNA上一段称为TAR的苯环结构相结合。TAR是HIV的5端转录起始点后一段不翻译的区域，其作用一般是为了延伸，如果没有tat，转录复合体会因为进城很慢而使HIV的转录过程终止。5、 细胞决定：在机体能够通过细胞分化形成骨骼肌肉细胞之前，由体节负责肌肉细胞的生成，6、 myoD是在成肌细胞未分化之前进行表达并负责肌肉形成与执行细胞决定的基因，其过量表达可以使成纤维细胞便成肌细胞特异基因的累计肉细胞和类生肌节。同时myoD激活p21 waf1/cip1 的表达，which是一个依赖细胞周期蛋白