酶的专一性实验报告.docx

1、酶的专一性实验报告酶的专一性实验报告实验报告-不同因素对酶的影响 实验报告 课程名称:生物化学实验(甲) 指导老师: 成绩: 实验名称:酶的基本性质实验底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度 实验类型: 分离鉴定实验同组学生姓名:一、实验目的和要求(必填) 三、主要仪器设备(必填) 五、实验数据记录和处理 七、讨论、心得 二、实验内容和原理(必填) 四、操作方法和实验步骤 六、实验结果与分析(必填) ?.酶的基本性质底物专一性 一、实验目的和要求 1. 了解酶的专一性。2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。二、实验基本原理 酶是一种具有催化功能的蛋白质。

2、酶蛋白结构决定了酶的功能酶的高效性，酶催化的 反应(酶促反应)要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。 酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种: 1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性:有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性

3、有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。 Na2CO3+ 2H2O2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2+ Na2SO4 还原糖(CHO or C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O(砖红色或黄色) + 2H2 与Benedict试剂无呈色反应。 淀粉被淀粉酶水解，产物为葡

4、萄糖;蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。 三、实验材料与试剂 1、实验材料? 蔗糖酶(样品?);? 新鲜唾液(含唾液淀粉酶);2、实验试剂? 蔗糖酶液蔗糖酶液(样品?)加蒸馏水适当稀释，备用;? 唾液淀粉酶液(学生自制)取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水(稀释)到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50, 400倍，甚至更高;? 5%蔗糖(A.R.)溶液;? 0.5%淀粉溶液(含0.3%NaCl);? Ben

5、edict试剂 ;四、实验器材与仪器 1.漏斗， 2.脱脂棉花; 3.恒温水浴(37?，100?); 4.量筒;5.试管;6.烧杯;7.吸量管。 五、实验操作方法和步骤 ? 检查试剂 取3支试管，按下表操作: 注:1、检查目的:试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。?淀粉酶的专一性 取三支试管，按下表操作: 注:可增加一组唾液淀 粉酶液 经100?加热3min 处理后的样品对照组。?蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作: 注:可增加一组蔗糖酶液 经100?加热3min处理后的样品对照组。 六、结果分析讨论 各试管观察结果依次是: (一

6、):1号蓝绿色，2号蓝色， 3号蓝色 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。(1号试管是蓝绿色可能是因为有少部分的淀粉水解) (二):1号土黄色，2号黄绿色，3号蓝色 加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。(2号可能是因为蔗糖在37?恒温水浴中也有少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。)总的来看可以看出

7、唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。 (三):1号蓝色， 2号红棕色，3号蓝色 加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。(1号可能是因为淀粉在37?恒温水浴中也有部分水解，所以有颜色变化，但变化不明显。)从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解 有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。 七、思考题1(观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验,每组各有何意义,蒸馏水有何用, 第一组作为整个实验的空白对照组，检测 Benedict

8、试剂对实验结果的颜色有何影响，排除干扰因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸 馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。 2(将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果, 各试管都为蓝色，因为酶在煮沸过程中 已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的水解反应。 3(在此实验中，为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液,0.3%NaCl的作用是什么, 0.3%NaCl 中的Cl 是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀 粉酶的活性不足而导致不同。 八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确

9、，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染;试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错误。 - ?. 影响酶活性的因素激活剂和抑制剂 一、实验目的和要求 1. 了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。二、实验基本原理 在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂;某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团(主要是指酶活性中心上的一些基团)发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。 酶的激活剂种类: 1、一些简

10、单的无机离子，如Mg2+、Cl-等; 2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用; 3、有些酶的催化作用易受某 些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制剂有许多种:如重金属离子(Ag+、Hg2+、Pb2，、Cu2，等)、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的

11、作用是不同的。 本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下: 本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂; Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。 利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。 淀粉 + 碘 蓝色 淀粉 + 淀粉酶水解产物 + 颜色变化 水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。 三、实验材料与试剂 1、实验材料新鲜唾液2、实验试剂? 唾液淀粉酶(学生自制)取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25

12、ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50,400倍，甚至更高。? 0.1% 淀粉溶液? 1.0% 氯化钠溶液? 1.0% 硫酸铜溶液? 1.0% 硫酸钠溶液? 碘化钾-碘液四、实验器材与仪器 1.试管及试管架2.量筒3.漏斗4.脱脂棉花5.点滴板6.吸量管7.恒温水浴(37?) 五、实验操作方法和步骤 取试管4支，按下表操作: 注意: ?找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37?水浴溶保温计时，反应时间最好在8,15min以内，只有确定准确的保温时间才能进行实验。 (2) 加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接

13、触的 反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。(3)碘化钾碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘液挥发，影响显色效果。 六、结果分析讨论1号试管为蓝紫色，2号为浅黄色，3号为褐色，4号为浅褐色。 试管 1 中颜色最深，说明 CuSO 4 可以抑制淀粉酶的活性;试管 2 中颜色最浅，基 本呈碘色，故淀粉酶活性最高，说明 NaCl 可以激活淀粉酶的活性;试管 3、4 中颜色基本 一致，且深浅居于试管1、2 之间，淀粉酶活性一般，说明Na+、SO 4 2- 对淀粉酶活性都没有 影响。故总体上看，可以得出Cl - 是唾液淀粉酶的激活剂，Cu 2+ 是唾液淀粉酶的抑制剂。 七、思考题1. 激活剂可分哪几类,本实

14、验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型, 激活剂可分为:简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等。NaCl 属于简单无机离子;CuSO4 属于重金属抑制剂。 2. 本实验中，1，2，3，4管各有何用意,为什么要设计第3管和第4管, 1 管可观察抑制剂对反应影响的现象，2管可观察激活剂对反应影响的现象，第3管可以将1管中的Na 和2 管中的SO4 对反应的影响去除，4管作为空白对照。 3. 抑制剂与变性剂有何不同,试举例说明。 抑制剂只改变酶的催化活性，并不使蛋白质变性，其影响是可逆的;变性剂破坏了蛋白质的高级结构，使蛋白质变性，并且多数变性剂的影响是不可逆的

15、。如:Cu 是唾液淀粉酶的抑制剂，但如果将Cu 去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染，以免实验结果的错误。3.试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。4.两种淀粉不要弄错。5.激活剂抑制剂实验中，注意运用点滴板(显色板)来控制保温时间; 如1，2，3，4管颜色反应无明显差别，可能是唾流淀粉酶活力太高或太低，若酶活性太高可将酶稀释后重做;若酶活性太低，可延长保温时间或增加酶的浓度。 2+2+2- ?. 影响酶活性的因素温度，最适温度测定 一、实验目的和要求 1. 了解温度对酶活力的影响

16、;2. 学习测定最适温度的原理和方法; 二、实验基本原理 酶的催化反应受温度影响很大，每一种酶所催化的反应，在一定条件下，仅在某一温度范围内表现出最大的活力，即反应速度最大时的温度，这个温度称为该酶促反应的最适温度，高于或低于最适温度时，反应速度逐渐下降。因此，酶促反应与温度的关系，用酶活力对温度作图，通常具有钟罩形曲线特征。 温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件，把底物浓度、酶浓度、反应时间、pH等固定在最适状态下，然后在一系列不同温度条件下，进行反应初速度测定，以酶反应初速度对温度作图，可以得一个钟罩形的曲线，即为温度酶活性曲线，在某温度有一酶活力最大值，这个温度即为最适温度。 实验?利

17、用唾液淀粉酶为试验对象，在0?,65?之间选择不同的温度，进行酶活力测定。根据淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈现颜色的变化来判断酶活力的大小及最适温度。 实验?采用蔗糖酶为试验对象，在室温至75?之间选择不同温度进行酶活力测定。蔗糖酶的活力常以其反应产物还原糖(葡萄糖)的生成量来表示。测定还原糖的方法很多，本实验选择3,5二硝基水扬酸法测定还原糖量。在碱性条件下，3,5二硝水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成红色氨基化合物，并在一定浓度范围内，还原糖的量与反应溶液所呈棕红色物质颜色 篇二:实验 酶的活性及专一性测定 实验七 酶的活性及专一性测定 一、实验目的 通过本实验，了解酶的活性测定方

18、法及其对底物催化的专一性。 二、实验原理 唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色，以此证明酶催化底物的专一性。 三、器材及试剂 1. 器材:试管、试管(转 载于:wWw.xIeL 写 论文 网:酶的专一性实验报告)夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴锅，冰箱等。 2. 试剂: (1)0.5%淀粉溶液(含0.3%NaCl):称取可溶性淀粉0.5g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水

19、中，不断搅拌，待其溶解后，加0.3gNaCl，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。 (2)2%蔗糖溶液:称2g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。 (3)班氏试剂:溶解结晶硫酸铜17.3g于100ml热的蒸馏水中，冷却后加水至150ml为A液。取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加蒸馏水600ml ,加热溶解，冷却后加水至850ml为B液。将A液缓慢倒入B液中，混合即可。 (4)稀释唾液:用清水漱口，清除食物残渣。再含蒸馏水15ml作咀嚼运动，2分钟后将稀释唾液收集于样品杯中备用。(5)碘-碘化钾溶液: 四、实验方法 1. 唾液淀粉酶的活性测定 唾液的稀释:取10支试管，分别编

20、上号1-6，取1ml唾液加入1号试管，加水稀释10倍后从中取出1ml加入2号试管，依次梯度稀释。 各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，然后向6支试管内同时加入1ml的0.5,的淀粉溶液，振荡混匀后放入37? 恒温水浴中，10分钟后取出，滴加2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数，计算酶的活性，用于后续实验。 2. 淀粉酶的专一性 取3个试管，分别编号，按下表操作，记录实验现象。 五、实验结果及分析 六 思考题 每组中蒸馏水分别起什么作用,将酶煮沸10min，重复以上实验可能会有什么结果, 篇三:实验六 温度对酶活影响及酶的专一性 实验六 酶作用的专

21、一性 一、目的:了解酶的一种催化特性对底物的选择性及检查酶的专一性原理与方法。 二、原理 酶作用的专一住是酶与一般催化剂的主要区别之一，所谓酶作用的专一性，即酶仅与一种或一类相似的物质起一定的催化作用，而对其它物质则不能起催化作用。本实验以蔗糖酶(来源于酵母)及枯草杆菌 淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶作用的专一性。 淀粉和蔗糖缺乏自由醛基(苷羟基)，无还原性，但在 淀粉酶的作用下，淀粉很容易水解成为糊精及少量麦芽糖，葡萄糖，使之具有还原性。在同祥的条件下， 淀粉酶不能催化蔗糖的水解，蔗糖酶能催化水解蔗糖生成具有还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解( 本实验采用本尼迪克特(Bened

22、ict)试剂检测还原糖。 三、试剂与器材 试剂: 1. 2% 蔗糖溶液。 2. 1%可溶性淀粉淀液。 称取可溶性淀粉1克，加水10 ml搅成糊状，倾入90 ml预先煮沸的蒸馏水中，搅拌均匀，再煮沸2,3分钟,冷却后定容至100 ml此溶液需新鲜配制。 3(枯草杆菌。 淀粉酶的稀释液。 4. 蔗糖酶液:取适量干酵母100 克，置于研钵内，加少量细砂及50 ml蒸馏水，用力研磨提取约l 小时，再加蒸馏水使总体积为500 ml左右，过滤。滤液保存于冰箱内备用。 5(本尼迪克特(Benedict)试剂:将17.3克硫酸铜溶于约50 ml蒸馏水中，另将173 克柠檬酸钠及100克碳酸钠加于约800 ml

23、蒸馏水中，加热，搅拌使之溶解，冷却后将上述碳酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸一碳酸钠溶液中，混匀，并稀释到100 ml。此试剂可长期保存。 器材: 1(试管及试管架2(恒温水浴锅3(吸管5 ml 3支;1 ml2支;2ml 1支 四、操作 1. 取2 支试管，各加入本氏试剂2 ml,分别加入l %可溶性淀粉溶液和2 %蔗糖溶液各4滴，混合均匀后，放在沸水浴中煮2,3分钟，观察有无红黄沉淀发生，纯净的淀粉和蔗糖应无红黄色沉淀产生。 2. 淀粉酶的专一性试验 取3 支试管，分别加入1%可溶性淀粉3 ml , 2 %蔗糖溶液3 ml及蒸馏水3 ml, 再向3支试管各添加 淀粉酶稀释液lml，混匀，放入37 ?

24、 恒温水浴中保温，15分钟后取出，各加本氏试剂2 ml，摇匀后，放在沸水浴中煮2,3分钟，观察有无红黄色沉淀产生,为什么, 3. 蔗糖酶的专一性试验 取3 支试管，分别加入l %可溶性淀粉溶液3 ml , 2 %蔗糖溶液3 ml及蒸馏水3 ml。向3支试管各添加蔗糖酶液l ml，混匀，放入37 ? 恒温水浴中保温，10 分钟后取出，各加本氏试剂2 ml ，摇匀后，放入沸水浴中煮2,3 分钟，观察有无红黄色沉淀产生,为什么, 五、思考题 1(纯净的淀粉和蔗糖有无还原性，为什么, 2(酶的专一性分哪几类, 3(酶的专一性实验，为何设计这三组, 温度对酶活性的影响 一、目的要求 1(了解温度对酶活性

25、的影响 2(掌握试验温度对酶活性影响的原理及方法 二、原理 酶的催化作用受温度的影响很大，温度对酶催化的反应有双重效应，一方面，温度可以使酶催化反应速度加快;另一方面，温度升高又可使酶因变性而失活而使酶催化反应速度降低。 本实验以枯草杆菌 淀粉酶和蔗糖酶为例，说明温度对酶活性的影响。 三、试剂与器材 试剂: 1. 0.5 ,可溶性淀粉溶液，新鲜配制。 2. 2 ,蔗糖溶液 3. 碘碘化钾溶液:将碘化钾20 克及碘10克溶解到100ml水中，使用前稀释10倍。 4. 本尼迪克特试剂 5. 淀粉酶稀释液 6. 蔗糖醉液 7(冰 器材: 1(试管及试管架2(恒温水浴锅3. 吸管 5ml 2支;2ml

26、 1支;1ml 2支 四、操作 1. 温度对 淀粉酶活性的影响 取3 支试管，编号，各入0.5 ,可溶性淀粉溶液3 ml，分别置于冰水浴。37?水浴及沸水浴中，保温5 分钟，各缓缓加入1ml淀粉稀释液(试管勿从水浴中取出)继续保温5 分钟(取出37?水浴及沸水浴中试管置于冰水浴中冷却后，各加入碘碘化钾溶液约l ml，比较各管颜色，并解释之。 2. 温度对蔗糖酶活性的影响 取3 支试管，编号，各加入2 %蔗糖液3 ml ，分别置于冰水浴，37?水浴及沸水浴中，保温5 分钟后，各加入lml蔗糖酶液，继续保温10 分钟，取入一各加入2 ml 本氏试剂，置于沸水浴中煮2 分钟。比较各管颜色，并解释之。 五、思考题: 1. 温度对酶活影响的机理。 2(试验温度对酶活性影响的一般方法。 3(如果要定量测定温度对酶活性的影响，实验方案应如何设计,