洁净区环境消毒方法及效果验证方案.docx

1、洁净区环境消毒方法及效果验证方案验 证 文 件类 别：清洁验证方案 编码：QJYZ001R00 页码：共17页第1页消毒剂消毒效果及使用周期的验证方案1. 概述2. 职责3. 验证内容3.1 消毒方法及效果的验证3.1.1 臭氧消毒3.1.1.1 概述3.1.1.2臭氧消毒原理3.1.1.3 消毒时间确定3.1.1.4 可接受标准3.1.1.5 取样计划3.1.1.6 检验方法3.1.1.7 消毒效果评价3.1.2 甲酚皂消毒剂消毒灭菌法3.1.2.1 原理3.1.2.2 取样计划3.1.2.3 检验方法3.1.2.4 确定可接受限度标准3.1.3 新洁尔灭消毒剂消毒灭菌法3.1.3.1 原理

2、3.1.3.2 取样计划3.1.3.3 检验方法3.1.3.4 确定可接受限度标准3.1.4 消毒剂消毒频次，消毒剂更换频次的验证3.1.4.1 消毒剂消毒频次的验证3.1.4.1.1 原理3.1.4.1.2 沉降菌检测取样计划3.1.4.1.3 沉降菌检测方法3.1.4.1.4 表面细菌检测取样计划3.1.4.1.5 表面细菌检测方法3.1.4.1.6 确定可接受限度标准3.1.4.2 消毒剂更换频次的验证3.1.4.2.1 原理3.1.4.2.2 沉降菌检测取样计划3.1.4.2.3 沉降菌检测方法3.1.4.2.4 表面细菌检测取样计划3.1.4.2.5 表面细菌检测方法3.1.4.2.

3、6 确定可接受限度标准4. 验证实施5. 验证报告1. 概述。1.1 背景。洁净生产厂房用于D级口服固体制剂、外用制剂、丸剂生产。设备厂房于2002年8月全面完成安装施工。根据GMP要求，结合生产实际情况，决定于2012年10月2012年6月对其清洁消毒效果进行验证。1.2 验证目的。清洁消毒方案及效果是否达到标准要求。2. 职责。2.1 验证领导小组。验证方案的批准，验证的协调工作，验证数据及结果的审核，验证报告的审批，发放验证证书。2.2 生产部。制订验证方案，并负责验证方案的实施，收集各项验证试验记录，报验证领导小组，起草洁净区清洁消毒操作程序。2.3 质量部。验证方案的审核，按验证方案

4、规定的取样计划和标准操作规程进行取样和实验，并报告检验结果；审核验证中的评价结论。2.4 工程部。仪器的校正、公用系统、设备监护等项工作提供可靠的服务。3. 验证内容。3.1 消毒方法及效果的验证。3.1.1臭氧消毒3.1.1.1 概述：臭氧可消灭空气中的细菌和微生物。在常温常压下，分子结构不稳定，很快分解成氧和单个氧原子，单个氧原子具有很强的氧化作用，可破坏细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将细菌和微生物杀死。臭氧通过高频臭氧发生器来获得。3.1.1.2 原理： 将臭氧发生器通向组合式空调器内，通过与空气接触发生臭氧而随空气流动进入洁净区，保持一定的时间起到消毒的目的。3.1.

5、1.3 口服制剂、外用剂、丸剂HVAC系统分别设有臭氧消毒功能，来完成洁净区空间的消毒工作。使用时根据洁净区消毒后的微生物检查情况，确定消毒时间及消毒周期。3.1.1.4 可接受标准。项 目可接受标准总菌落数10个/皿3.1.1.5 取样计划。3.1.1.5.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。3.1.1.5.2 取样：每个房间2个培养皿。 3.1.1.5.3 取样时间：按规定时间通进臭氧后，迅速取样。3.1.1.5.4 取样部位：在距取样点地面0.8米水平面上均匀分布，每点设培养皿1个。3.1.1.5.5 取样点数目。外用剂洁净区洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302

6、灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更92口服制剂洁净区洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92湿混制粒室362整粒混合室272压片室172胶囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.1.5.6 取样点布置 如图示： 在房间部位均匀布置，一次与一次的取样位置不能重复。3.1.1.5.7 取样次数：每点一次。3.1.1.5.8 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。取样员应穿无菌服并套上无菌脚套，以防污染。3.1.1.6 检验方法。将已准备好的肉汤琼脂培养皿置于取样点，打开培养皿，使培养基表面暴露0.5h，再盖上盖。按照中国药典（2010年版二部）附录J微生物限度检查

7、法项下平皿菌落计数法检测菌落数。检验结果以算术平均值计算。并跟踪检验三个批次。检验结果与可接受限度标准相比较，消毒效果达到预期标准并且照射时间最短的时间即为所要选的最佳照射时间。结果计算： C1+C2 A室=- 2 A室：为室的平均菌落数。 C1：为第一取样点取样菌落数。C2：为第二取样点取样菌落数。3.1.1.7 取样周期：每次消毒后连续取样10天进行检测；共计进行三次消毒和取样。3.1.1.8结果判定：3.1.1.8.1消毒效果判定：根据已知的臭氧消毒量、消毒时间，根据取样检测的微生物结果，判定消毒效果是否符合标准。3.1.1.8.2消毒周期判定：根据已知的臭氧消毒量、消毒时间，根据取样检

8、测的微生物结果，以微生物出现不合格或不合格边沿线的时间为基准，缩短三天后的时间既定为消毒周期。3.1.1.9消毒效果评价及周期确定：根据连续三个周期检测结果，由质量管理部做出臭氧消毒效果评价，并确定消毒周期及确认每次消毒时间。3.1.2 甲酚皂消毒剂消毒灭菌法。3.1.2.1 原理。甲酚皂溶液溶于水，呈碱性反应，有除垢作用，并能破坏细菌的细胞膜，导致细胞内物质外渗或漏出，从而呈现出抑菌或杀菌作用。其杀菌作用与浓度有着直接的关系。所以通过对甲酚皂消毒液浓度的确认并与规定的可接受限度标准相比较，若在可接受限度标准范围之内，则可判定该消毒方法的有效性及稳定性。具体方法为：在洁净区内指定几个房间，然后

9、设定3个浓度梯度，分别为1.5%、2.5%、3.5%，按照浓度梯度，配制好相应浓度的甲酚皂溶液。然后用不同浓度的甲酚皂溶液擦拭洁净区墙壁（指定位置），并在擦拭后的对应位置上分别取样，做洁净区房间表面污染试验。根据试验结果以及洁净区最大允许微生物浓度限度标准来确认最佳消毒浓度。3.1.2.2 取样计划。3.1.2.2.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。3.1.2.2.2 取样面积：2inch2/每个棉签。3.1.2.2.3 取样时间：用规定浓度的甲酚皂溶液充分擦拭地面，10分钟后取样。3.1.2.2.4 取样部位：地面。3.1.2.2.5 取样点数目。30万级洁净区（液体制剂车间）

10、洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230万级洁净区（固体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92制粒室362整粒混合室272压片室172胶囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.2.2.6 取样点布置 如图示： 在地面上均匀布置。3.1.2.2.7 取样次数：每点一次。3.1.2.2.8 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。3.1.2.3 检验方法。用灭菌生理盐水润湿的灭菌脱脂棉按规定取样面积充分擦拭取样部位，然后放入装有生理盐水的灭菌容器内，充分振摇。按照中国药典（2000年版二部）附录J微生物

11、限度检查法项下平皿菌落计数法检测浸出液的含菌量即可。并做空白试验。检验结果以算术平均值计算。并跟踪检验三个批次。检验结果与可接受限度标准相比较，消毒效果达到预期标准并且消毒浓度最低的浓度即为所要选的最佳消毒浓度。结果计算： C1+C2 A室=- 2 A室：为室的平均菌落数。 C1：为第一取样点取样菌落数。 C2：为第二取样点取样菌落数。3.1.2.4 确定可接受限度标准。 项目可接受标准菌落数10CFU/inch23.1.2.5 消毒效果及周期评价。3.1.3 新洁尔灭消毒剂消毒灭菌法。3.1.3.1 原理。新洁尔灭为阳离子型表面活性剂，能吸附于细胞表面，改变细胞壁的通透性，从而呈现出强大的杀

12、菌作用。其杀菌作用与浓度有着直接的关系。所以通过对新洁尔灭消毒液浓度的确认并与规定的可接受限度标准相比较，若在可接受限度标准范围之内，则可判定该消毒方法的有效性及稳定性。具体方法为：在洁净区内指定几个房间，然后设定3个浓度梯度，分别为0.05%、0.10%、0.15%，按照浓度梯度，配制好相应浓度的新洁尔灭溶液。然后用不同浓度的新洁尔灭溶液擦拭洁净区墙壁（指定位置），并在擦拭后的对应位置上分别取样，做洁净区房间表面污染试验。根据试验结果以及洁净区最大允许微生物浓度限度标准来确认最佳消毒浓度。3.1.3.2 取样计划。3.1.3.2.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。3.1.3.2

13、.2 取样面积：2inch2/每个棉签。3.1.3.2.3 取样时间：用规定浓度的新洁尔灭溶液充分擦拭墙壁，10分钟后取样。3.1.3.2.4 取样部位：墙壁。3.1.3.2.5 取样点数目。30万级洁净区（液体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230万级洁净区（固体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92制粒室362整粒混合室272压片室172胶囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.1.3.2.6 取样点布置 如图示： 在墙壁的水平面上均匀布置。3.1.3.2.7 取样次数：每点一次。3.1

14、.3.2.8 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。3.1.3.3 检验方法。用灭菌生理盐水润湿的灭菌脱脂棉按规定取样面积充分擦拭取样部位，然后放入装有生理盐水的灭菌容器内，充分振摇。按照中国药典（2000年版二部）附录J微生物限度检查法项下平皿菌落计数法检测浸出液的含菌量即可。并做空白试验。检验结果以算术平均值计算。并跟踪检验三个批次。检验结果与可接受限度标准相比较，消毒效果达到预期标准并且消毒浓度最低的浓度即为所要选的最佳消毒浓度。结果计算： C1+C2 A室=- 2 A室：为室的平均菌落数。 C1：为第一取样点取样菌落数。 C2：为第二取样点取样菌落数。3.1.3.4 确定可接受限度标

15、准： 项目可接受标准总菌落数30CUF/inch23.1.3.5 消毒效果评价。3.2 消毒剂消毒频次、消毒剂更换频次的验证。3.2.1 消毒剂消毒频次的验证。3.2.1.1 原理。不同级别的洁净区有不同等级的洁净度要求。洁净度受到人员、内环境、设备等诸多因素的影响。洁净区工作人员每日虽按SOP对洁净区环境进行全面清洁，但却不能保证把进入室内人员或物品散发的细菌全部杀死或清除出洁净区。所以洁净区应定期进行消毒。通过对洁净区沉降菌及表面污染细菌这两项指标的跟踪检测（一天一次，连续十天），以出现不符合可接受限度标准（一个指标不符合即为不符合）的那一天（dx）为界，统计dx以前的天数，此天数即为消毒

16、剂消毒频次确定的理论依据，从而判定该消毒频次确定的有效性及合理性。3.2.1.2 沉降菌检测取样计划。3.2.1.2.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。3.2.1.2.2 取样时间：洁净区净化空调系统正常运行30分钟后取样。3.2.1.2.3 取样点数目。30万级洁净区（液体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230万级洁净区（固体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92湿混制粒室362整粒混合室272压片室172胶囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.1.2.4 取样点布置

17、如图示： 3.2.1.2.4.1 取样点在离地0.8米高的水平面上均匀布置。3.2.1.2.4.2 布置取样点时，应避开回风口。3.2.1.2.5 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。3.2.1.3 沉降菌检测方法。3.2.1.3.1 将已准备好的肉汤琼脂培养皿置于取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上。3.2.1.3.2 全部取样结束后，将培养皿倒置于30-35恒温培养箱中培养48小时。3.2.1.3.3 按中国药典（2000年版二部）附录J微生物限度检查法项下平皿菌落计数法计数。3.2.1.3.4 结果计算： 1号培养皿菌落数+2号培养皿菌落数 A= 2 其中

18、 A为各个室的平均菌落数。3.2.1.4 表面细菌检测取样计划:3.2.1.4.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。见4.5项下所列表格。3.2.1.4.2 取样部位：墙壁。3.2.1.4.3 取样面积：2inch2/每个棉签。3.2.1.4.4 取样时间：洁净区净化空调系统正常运行30分钟后取样。3.2.1.4.5 取样点数目。30万级洁净区（液体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230万级洁净区（固体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92制粒室362整粒混合室272压片室172胶囊填充室

19、332包衣室102男二更92女二更923.2.1.4.6 取样点布置 如图示： 在墙壁的水平面上均匀布置。3.2.1.4.7 取样次数：每点一次。3.2.1.4.8 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。3.2.1.5 表面细菌的检测方法。用灭菌生理盐水润湿的灭菌脱脂棉按规定取样面积充分擦拭取样部位，然后放入装有生理盐水的灭菌容器内，充分振摇。按照中国药典（2000年版二部）附录J微生物限度检查法项下平皿菌落计数法检测浸出液的含菌量即可。检验结果以算术平均值计算。结果计算： C1+C2 A室=- 2 A室：为室的平均菌落数。 C1：为第一取样点取样菌落数。 C2：为第二取样点取样菌落数。3.

20、2.1.6 确定可接受限度标准:项目可接受标准沉降菌15CFU/皿表面细菌30CFU/inch23.2.1.7 消毒频次 dx值确定：根据检测结果，确定消毒剂消毒频次 dx值。3.2.1.8 消毒频次评价报告。3.2.2 消毒剂更换频次的验证。3.2.2.1 原理。细菌与其它生物一样，存在着遗传与变异。细菌的变异按其本质原因可分为遗传型变异与非遗传型变异两大类型。其中与消毒灭菌有很大关系的就是耐药性变异。耐药性变异是指细菌对许多药物（包括消毒剂）是敏感的，但在使用一段时间后，细菌会对该种药物（包括消毒剂）产生抵抗力，从而影响到疗效或者消毒灭菌效果。所以洁净区使用的消毒剂品种应定期更换，以防耐药

21、菌株产生。通过使用一种消毒剂（甲酚皂或新洁尔灭溶液）按照SOP要求对洁净区环境定期消毒（消毒频次已验证过），每消毒一次，对洁净区环境沉降菌与表面细菌这两项指标就取样检测一次。连续消毒检测几个周期（以周为单位，共设定12个时间周期，分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12），然后将检测结果与洁净区沉降菌、可接受限度标准相比较，以出现不符合可接受限度标准（一项指标不合格即为不合格）的那一个消毒周期（Wx）为界，统计Wx以前的消毒周期，此周期即为消毒剂更换频次确定的理论依据，从而判定该消毒剂更换频次确定的有效性及合理性。3.2.2.2 沉降菌检测取样计划。3.2.2.2.1 取样地

22、点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。3.2.2.2.2 取样时间：按清洁SOP对各房间全面消毒后取样。3.2.2.2.3 取样点数目。30万级洁净区（液体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230万级洁净区（固体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92湿混制粒室362干燥整粒混合室272压片室172胶囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.2.2.4 取样点布置 如图示： 3.2.2.2.4.1 取样点在离地0.8米高的水平面上均匀布置。3.2.2.2.4.2 布置取样点时，应避开回风口。3

23、.2.2.2.5 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。3.2.2.3 沉降菌检测方法。3.2.2.3.1 将已准备好的肉汤琼脂培养皿置于取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上。3.2.2.3.2 全部取样结束后，将培养皿倒置于30-35恒温培养箱中培养48小时。3.2.2.3.3 按中国药典（2000年版二部）附录J微生物限度检查法项下平皿菌落计数法计数。3.2.2.3.4 结果计算： 1号培养皿菌落数+2号培养皿菌落数 A= 2 其中 A为各个室的平均菌落数。3.2.2.4 表面细菌检测取样计划:3.2.2.4.1 取样地点：应选择产尘量大、工作人员多的房间。见

24、4.5项下所列表格。3.2.2.4.2 取样部位：墙壁。3.2.2.4.3 取样面积：2inch2/每个棉签3.2.2.4.4 取样时间：按清洁SOP对各房间全面消毒后取样。3.2.2.4.5 取样点数目。30万级洁净区（液体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）称量室92配液室302灌封室342洗烘瓶室402男二更92女二更9230万级洁净区（固体制剂车间）洁净区域面积m2取样点（个）粉碎室182称量室92制粒室362整粒混合室272压片室172胶囊填充室332包衣室102男二更92女二更923.2.2.4.6 取样点布置 如图示： 在墙壁的水平面上均匀布置。3.2.2.4.7 取样次数：每

25、点一次。3.2.2.4.8 取样器具应无菌。取样操作遵循无菌操作法。3.2.2.5 表面细菌的检测方法。用灭菌生理盐水润湿的灭菌脱脂棉按规定取样面积充分擦拭取样部位，然后放入装有生理盐水的灭菌容器内，充分振摇。按照中国药典（2000年版二部）附录J微生物限度检查法项下平皿菌落计数法检测浸出液的含菌量即可。检验结果以算术平均值计算。结果计算： C1+C2 A室=- 2 A室：为室的平均菌落数。 C1：为第一取样点取样菌落数。 C2：为第二取样点取样菌落数。3.2.2.6 确定可接受限度标准：沉降菌： 15个/皿；表面细菌：30CFU/inch2；3.2.2.7 根据检测结果，确定消毒剂更换频次WX值。3.2.2.8 消毒剂更换频次评价报告。4. 消毒验证实施。验证方案经验证委员会批准后，应尽快予以实施，以确认该消毒方法及效果的有效性和稳定性。生产技术部负责保证在生产结束后严格按照批准的各空间清洁SOP（草案）对空间进行全面清洁。化验室负责按标准操作规程及验证方案规定的取样计划取样检测，并报告验证结果。设备动力部负责在公用系统、设备维护等项工作中提供及时可靠的服务。5. 消毒验证报告。 根据清洁消毒过程监控结果和试验数据的重现性以及微生物检验结果是否同时满足可接受限度标准，由生产技术部做出初步评价。质量管理部根据评价结果，写出综合评价报告及结论，报验证委员会审核，并做出最终结论。